CKMB

肌酸激酶同工酶MB（CKMB）的检测一、项目名称、检验方法名称1.项目名称：肌酸激酶同工酶MB（CKMB）的检测2.检验方法名称：化学发光法二、方法学原理：肌酸激酶同工酶MB测定采用双位点夹心化学发光免疫分析法，其采用的技术原理如下：第一步：将样本与包被着CK-MB单克隆抗体的超顺磁性磁微粒（磁珠）以及CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵育，样本中的CK-MB和包被在磁珠上的CK-MB单克隆抗体结合，同时CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB另一位点结合。反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质。第二步：将化学发光底物（3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，AMPPD）添加到反应管内，发光底物AMPPD能有效地被碱性磷酸酶所分解,脱去一个磷酸根基团，生成不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，由光电倍增管对反应所产生的光子数进行测量，所产生的光子数与样本内CK-MB的浓度成正比。样本内分析物的量由定标曲线来确定。三、试剂品牌、代号、包装规格、内含物1、试剂品牌：深圳迈瑞2、包装规格：2*503、内含物：Ra试剂：包被着抗CK-MB抗体的超顺磁性微粒，0.2g/L；Tris缓冲液，50mmol/L；ProClin300，0.5g/L；叠氮钠，0.9g/L；Rb试剂：抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物，3mg/L；MES缓冲液，50mmol/L；ProClin300，0.5g/L；叠氮钠，0.9g/L4、储存条件及有效期：2~8℃保存，有效期365天。上机使用后，在2~8℃的贮存环境下有效期为28天四、仪器品牌、型号：迈瑞CL1000i五、具体操作步骤（包括主要的仪器测定参数）5.1校准：5.1.1校准品来源：试剂厂家的标准液。5.1.2定标频率A）试剂批号更换后。B）由质控结果决定。C)仪器维修后。5.2样品测试：将10L样本加入反应杯中，加入50LCK-MBRa试剂和50LCK-MBRb试剂并于37℃孵育5分钟，用化学发光分离液冲洗、分离反应相；加入200L化学发光底物液以启动光化学反应。5.3质控测试：5.3.1厂家质控5.3.1.1、质控品使用方法：迈瑞心肌标志物复合定值质控品（低值）和心肌标志物复合定值质控品（高值）。5.3.1.2、使用水平：两个浓度5.3.1.3、使用频率：每个工作日应对质控品做一次检测为了监测系统的性能，此外，每执行完一次校准测试、更换试剂批次、执行维护和故障处理操作后，也建议进行质控测试。5.3.1.4、质控规则：Westgard规则5.3.2临检中心室内质控品：5.3.2.1、使用方法：使用临检中心提供的朗道心脏标志物质控品；质控品保存于-20℃以下的冷冻冰箱，使用时取出在室温稳定30分钟后混匀滴注于样品杯待用。5.3.2.2、使用水平：两个水平（低、高值）5.3.2.3使用频率：一周不低于两次，视标本量；如果标本量大的话每周可以进行三次质控。5.3.2.4质控规则：采用Westgard多规则控制程序。5.3.2.5失控情况处理及原因分析：室内质控失控时，应填写《失控报告单》，分析及登记失控原因。并上交专业主管。纠正在控后在检测患者标本。5.3.3.临检中心室间质评5.3.1质控频度：每年2次。5.3.2质评品数量：2次质评，每次5个样品。5.3.3质控品的储存：按照质控品的储存要求进行储存。5.3.4检测方法：与检测患者一样的方式检测室间质评的样本。5.3.5质评结果上报：免疫组长负责质评品的检测，确认结果准确无误后，将结果填写在汇总表上，并将原始结果一同交给科主任，由科主任对结果时行最终确认，登录上海市临检中心的官方网站，进行室间质评的结果网络上报。5.3.6结果回馈分析和不符合项目的处理措施：结果回馈分析：应及时对质评结果进行回馈分析。5.3.7不符合项目的处理措施：如有不符合项目，应及时查找原因，可向临检中心专家咨询、厂商技术支持共同探讨等方法进行分析，采取纠正措施并有记录。5.3.8质控数据管理要求：质控分析记录应保留2年，质控数据应作备份并保留2年。5.3.99．其他事项:未开展的室间质控项目，应与上级医院做比对试验。六、操作性能概要：6.1最低检测限:不大于0.1ng/mL6.2线性:试剂盒在0.1ng/mL~300ng/mL区间内，其相关系数（r）不低于0.9900。6.3重复性:变异系数CV≤6%。批间差变异系数CV≤10%。6.4分析特异性:当样品中甘油三酯浓度≤3000mg/dL、胆红素浓度≤20mg/dL、血红蛋白浓度≤500mg/dL、总蛋白≤10g/dL时，测试结果的干扰偏差在±10%范围内。6.5准确度:对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±10%范围内。注意事项:本试剂盒仅供体外诊断使用；在使用本试剂盒时，必须遵循所有实验室试剂操作的注意事项；本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑；由于方法学或抗体特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，6.6用不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释；建议实验室在发给临床医生的检测报告6.7注明所用试剂特征。系列监测中如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值；本产品含有动物源性物质，可能存在潜在生物风险。对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待，所有废弃物必须按照当地法规进行处置；叠氮钠可能会与铅以及铜制的管件发生反应，形成具有高危爆炸性的金属叠氮物。在倾弃这种液体时，应以大量的水进行冲洗，防止叠氮物的集结七、参考值或参考范围：男性：＜6.36ng/mL女性：＜4.97ng/mL八、临床意义：肌酸激酶主要催化高能磷酸键从ATP转移到肌酸，生成磷酸肌酸。肌酸激酶是二聚体酶，包括骨骼肌CK-MM，脑组织CK-BB，心肌CK-MB和线粒体肌酸激酶等四种同工酶形式。CK-MB分子量80,000，由两个亚单位组成(每个亚基MW=40000)：亚单位M表示肌肉型，亚单位B表示脑型。CK-MB主要存在于心肌组织，占CK总活性的20%，骨骼肌中也有微量分布。血清中CK-MB含量对诊断急性心肌梗死、心肌炎等心肌缺血性疾病有重要意义。CK-MB在心肌损伤早期即可出现于循环血中，于心肌损伤后2-6小时开始升高，在12-24小时内达到峰值，之后降至正常水平(36–72小时)，CK-MB测值的升降伴随ECG演变和胸痛病史。CK-MB含量和时间变化，对评估心肌损伤发病时间、梗死体积以及再灌注后损伤有重要意义。此外，骨骼肌损伤、横纹肌溶解症及中风等疾病中，也伴随有CK-MB含量升高。临床诊断上，CK-MB经常与肌红蛋白和肌钙蛋白I联合检测。在心肌损伤相关疾病诊断上，肌钙蛋白I特异性强，肌红蛋白和CK-MB早期敏感性高，三者联合检测可以提高诊断的特异性、敏感性九、病人准备、标本要求：9.1病人无需空腹；9.2推荐使用血清样本或者EDTA、肝素类抗凝剂采血管收集的血浆样本。9.3样本应尽可能及时测定，若在6小时内无法完成测定，可将样本置于低温下保存。样本在2~8℃环境下可稳定2天；在-20℃或低于-20℃的环境下可稳定90天。样本应尽量避免反复冻融，反复冻融次数不宜超过5次。十、参考文献：1、叶应妩、王毓三、申子瑜.全国临床检验操作规程（第四版）2、迈瑞公司提供的CKMB试剂说明书编写：审核：批准：批准日期：20年月日