感染性疾病试验诊断

THANKYOU感染性疾病的实验诊断中国医科大学附属第一医院实验诊断学教研室褚云卓THANKYOU讲授内容第一节概述第二节感染性疾病的常用病原学检测第三节常见感染性疾病的实验诊断相关知识回顾1、与医学相关微生物有哪些？2、病原体的致病性3、学习过的病原体的检测方法THANKYOU第一节概述一、当今感染病特点二、感染类型三、医院感染四、感染性疾病的实验诊断感染性疾病实验诊断的目的•确定感染的发生和性质•提供恰当的治疗方案•采取有效的预防措施•防止感染传播一、当今感染病特点•感染性病原体的种类不断发生变迁•宿主的免疫防御能力下降•内源性感染与条件致病菌的感染增加THANKYOU二、感染类型1、按病原体分类传统病原体：细菌、病毒、真菌新发病原体：SARS病毒、H1N12、按疾病特征分类隐性感染（或亚临床感染）、潜伏感染显性感染、带菌状态（或携带者）3、按病原体来源分类外源性感染、内源性感染三、医院感染•院内感染（nosocomialinfection;hospitalinfection)医院获得性感染(hospitalacquiredinfection)是指感染来自医院或医疗机构，包括在医院获得出院后才发生的感染，但不包括入院前已存在的感染或入院时已处于潜伏期的感染。范围可包括病人、医院工作人员、探视者。1、医院感染常见的病原体与类型•病原学：细菌最常见，以革兰阴性杆菌为主（肠杆菌科和非发酵菌）、病毒、真菌。•病原体特点：1、条件致病菌2、耐药菌及多重耐药菌：MRSA、VREESBL、MDR•来源：内源性感染：定植、菌群迁徙、组织受损、滥用抗菌药物外源性感染：住院病人、医务人员、探视者、陪护人员、医院环境及未彻底消毒灭菌的医疗器械、血液制品等•常见医院感染：泌尿系统感染、手术部位感染、医院感染肺炎、血流感染2、医院感染的微生物学检测•标本的收集•感染菌的鉴定•药物敏感试验•耐药表型检测•报告和资料保存•菌株的保存3、暴发流行的识别和处理•识别：当医院感染发生率增加而超过该时期的预计值时，就属于暴发。•处理：提出诊断标准、尽快进行实验室确诊、告知感染细菌耐药模式、准确描述菌株特征并保存菌株、进行分子分型、必要时进行深入研究。4、医院环境和医务人员标本的培养•血液制品•环境表面•消毒剂和防腐剂•空气•水•医务人员手•鼻前庭四、感染性疾病的实验诊断•一般检测1、白细胞常规2、C-反应蛋白3、前降钙素原4、器官功能改变的检测•病原学实验诊断THANKYOU讲授内容第一节概述第二节感染性疾病的常用病原学检测第三节常见感染性疾病的实验诊断第二节感染性疾病的常用病原学检测一、标本采集和运送二、直接显微镜检查三、病原体分离、培养和鉴定四、病原体抗原检测五、病原体核酸检测六、病原体抗体检测七、细菌毒素检测一、标本采集和运送•采集：1、严格执行无菌操作；2、尽量在抗菌药物使用前采集标本；3、送检标本应注明姓名、年龄、采集日期时间、采集部位种类、临床诊断和检测项目；4、盛标本的容器须灭菌处理。•运送：立即送检，含1类病原体标本的运送需按要求专人护送。1、涂片染色显微镜检查：•方法：革兰染色、抗酸染色、芽孢染色、荚膜染色等，观察病原体的形态、染色性等特征。•临床意义：（1）无菌体液检到病原体具有诊断价值，如：脑脊液中查见革兰阴性双球菌，结合临床表现可作出流行性脑膜脊髓炎的诊断；（2）有正常菌群的部位不能确定诊断，但对进一步检查有重要的提示作用；（3）血液涂片染色检查是诊断疟疾、丝虫病和巴虫病的常用方法。二、直接显微镜检查粒细胞内G-双球菌有芽孢的G+粗大杆菌2、涂片不染色显微镜检查：•方法：悬滴法、压滴法或湿式涂片，观察细菌的运动方式、螺旋体形态、真菌菌丝结构、寄生虫虫卵、原虫的包囊和滋养体等。•临床意义：（1）血液、尿液标本发现形似发亮串珠，两端呈钩状、运动活泼的密螺旋体时，可报告“暗视野查找到钩端螺旋体”；（2）下疳渗出液、二期梅毒的皮疹渗出物、淋巴结或组织穿刺液暗视野查见有运动活泼的密螺旋体即可诊断梅毒；（3）检出真菌菌丝和孢子，可确定真菌的存在；（4）湿式涂片可检查寄生虫卵；（5）米泔水样便发现运动活泼的鱼群样弧菌，结合制动试验阳性有助于霍乱的诊断。3、宿主细胞内包涵体检查：•方法：Wright-Giemsa染色，观察多核巨细胞内或胞质内的包涵体。•临床意义：（1）在眼结膜、尿道及子宫颈上皮细胞内检出典型包涵体，对包涵体性结膜炎和生殖道衣原体感染的诊断有价值；（2）海马神经细胞内出现胞质内嗜酸性包涵体，即内基小体（Negribody），对狂犬病有诊断价值；（3）细胞病变效应（cytopathiceffect，CPE)：对病毒感染有诊断价值。4、负染电镜观察和免疫电镜技术：•方法：电子显微镜观察病原体形态。•临床意义：对某些病毒感染有确诊价值：如电镜下查见婴幼儿急性胃肠炎腹泻的粪便中车轮状的双层衣壳病毒颗粒即可诊断为轮状病毒感染。三、病原体分离、培养和鉴定1、细菌分离培养鉴定•方法：体外人工培养基培养•临床意义：（1）分离培养和鉴定是细菌感染性疾病诊断的“金标准”；（2）提供细菌纯培养进行体外药物敏感试验；（3）指导抗菌治疗和预测治疗效果。2、病毒分离培养和鉴定•方法：易感动物、鸡胚或细胞培养•临床意义：病毒分离培养和鉴定是病毒感染性疾病诊断的“金标准”。3、真菌分离培养和鉴定•方法：沙氏培养基或血平板进行培养。•临床意义：（1）真菌分离培养和鉴定是真菌感染性疾病诊断的“金标准”；（2）无菌体液分离培养出真菌具有诊断价值；（3）具有正常菌群部位培养出真菌，需结合患者临床表现做出诊断。四、病原体抗原检测种类：细菌的菌体抗原、鞭毛抗原、毒素、侵袭性酶、病毒的衣壳蛋白、包膜抗原、真菌细胞壁抗原如曲霉菌半乳甘露聚糖及(1,3)-β-D葡聚糖等。方法：免疫荧光技术、酶免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验等。临床意义：（1）病原体的抗原成分检测有助于早期诊断感染性疾病，阳性结果提示某种感染性病原体的存在；（2）无菌体液、血液等标本中检测出特异性病原体抗原，有诊断价值，如：脑脊液中检出脑膜炎奈瑟菌抗原；泌尿生殖道标本检出沙眼衣原体抗原;（3）存在正常菌群的标本，需考虑交叉反应。五、病原体核酸检测•方法：PCR、DNA探针杂交•临床意义：（1）用于不易分离培养的病原体的检测，如：结核菌、各种病毒、支原体、衣原体等；（2）对于判断病毒的活动性感染、病毒与宿主之间的关系研究、对抗病毒治疗的监控具有重要作用；（3）评估移植后病毒感染的几率及移植成功率；（4）直接检测病毒核酸及细菌鉴定。•评价：标本处理不当，蛋白酶、核酸酶、DNA抑制剂等可造成假阴性；反应体系中DNA极微量的污染可产生假阳性。六、病原体抗体检测•方法：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、间接免疫荧光技术、放射免疫测定、酶联免疫吸附试验等。•临床意义：适用于流行病学调查和回顾性分析或经抗菌治疗后慢性细菌性感染的诊断；是诊断病毒感染的主要手段。•评价：（1）排除疾病时：选择高敏感度、高阴性预测值的试验；（2）确诊疾病时：选择高特异度、高阳性预测值的试验。七、细菌毒素检测•外毒素检测：生物学方法、免疫血清方法、核酸和基因诊断技术、自动化检测。•内毒素检测：家兔热原试验、鲎试验（定性、定量）THANKYOU讲授内容第一节概述第二节感染性疾病的常用病原学检测第三节常见感染性疾病的实验诊断THANKYOU第三节常见感染性疾病的实验诊断一、血流感染二、中枢神经系统感染三、呼吸系统感染四、胃肠道感染五、肝脏感染六、泌尿系统感染七、皮肤及软组织感染八、先天及新生儿感染一、血流感染•血流感染（bloodstreaminfection)：当病原微生物通过各种途径进入血液，并通过血液造成全身播散，引起各种临床症状称为血流感染。（一）引起血流感染的常见微生物与常见疾病•菌血症（bacteremia）：由细菌引起的血流感染。•真菌血症（fungemia）：由真菌引起的血流感染。•病毒血症（viremia）：由病毒引起的血流感染。•脓毒血症（pyemia）：由各种病原微生物和毒素侵入血流所引起骤发寒战、高热、心动过速、呼吸急促、皮疹，肝脾肿大和精神神志改变等一系列严重临床症状，严重者可引起休克、DIC和多脏器功能衰竭。1、菌血症的分类•一过性菌血症（transient）：对感染组织的处理、污染粘膜表面的创伤性操作、污染的外科手术等。•持续性菌血症（Continuoys）：感染性心内膜炎、感染性动脉瘤、血栓性静脉炎、血管内膜感染、伤寒热，波浪热最初几周等。•间断性菌血症（intermittent）：脓肿未及时引流等。2、血流感染常见的病原菌•细菌：葡萄菌属、肠球菌属、链球菌属、肠杆菌科及非发酵菌。•真菌：继发于大剂量抗菌药物的使用、静脉留置导管、肿瘤、肾上腺皮质激素使用、静脉高营养等。•病毒：HBV、HCV等。（二）血流感染的病原学检查1、标本采集和运送•采血部位：通常为肘静脉；对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人，在病灶或髂前（后）上棘处消毒后抽取骨髓培养；疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。•采血时间：对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采血；最好在未应用抗菌药物之前采血，若已应用抗抗菌药物，应在下次应用抗抗菌药物前采血。03060Time(min)Temp体温Chills寒战BloodCultures血培养BACTEREMIALEVEL菌血症的水平•静脉采血皮肤消毒方法：70%酒精擦拭静脉穿刺部位；再以碘酊（1～1.5分钟）或碘氟（1.5～2分钟）擦拭；最后再以70%酒精脱碘。•采血量：自动化仪器通常要求成人8～10ml/瓶、儿童1～5ml/瓶；手工配制培养基要求血液和肉汤之比为1:5～1:10；一份血培养为2瓶（即1个需氧瓶和1个厌氧瓶）。•采血次数：一般24小时内2～3次（即2～3份）。采血量对血培养的影响010203040506070809010051015202530354045505560ml%RelativeYieldOverall/Mayo01020304050607080901001234BloodCultureSetCockerill,CID2004采血份数对血培养的影响•中心静脉导管标本：剪下5cm导管尖端，进行半定量滚动培养。•标本运送：采血后应该立即送检；如不能立即送检可室温保存切勿冷藏。2、细菌学检验•临床意义：1、阳性血培养（鉴定到种的微生物名称及药物敏感试验）报告可确诊血流感染；2、阴性血培养报告“培养XX天，未见细菌生长”。3、真菌学检验•临床意义：阳性血培养瓶进行涂片、革兰染色检查、发现真菌孢子或菌丝立即报告临床，同时接种沙氏琼脂培养，观察菌落形态并鉴定到种。二、中枢神经系统感染（一）引起中枢神经系统感染的常见微生物与常见疾病•常见病原体：引起脑膜炎的常见病原菌有细菌、真菌及病毒•常见疾病：脑膜炎、病毒性脑炎、脑脓肿等（二）中枢神经系统感染的病原学检查1、标本采集和运送•无菌术腰椎穿刺采集脑脊液；•立即送检，同时保温，不可置冰箱保存，因脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌等病原菌会因此而死亡；•有条件可床旁接种。2、细菌真菌学检验临床意义：•正常的脑脊液是无菌的；•细菌性脑膜炎：革兰染色镜检见到细菌；•结核性脑膜炎：抗酸或金胺“O”染色可见抗酸菌。真菌性脑膜炎：镜检可见真菌孢子，隐球菌脑炎时墨汁染色可见黑色背景中的透亮菌体和宽厚荚膜，即隐球菌；3、病毒学检验检验方法：分离培养及鉴定、血清学检查、分子生物学方法等。临床意义：•抗体检测用于流行病学调查；•特异性IgM抗体检测可用于流行性乙型脑炎的早期诊断；•检测狂犬病病毒抗糖蛋白抗体可证实狂犬病的诊断。三、呼吸系统感染（一）引起呼吸系统感染的常见微生物与常见疾病•急性上呼吸道感染：有70%～80%由病毒引起，细菌感染可直接或继病毒感染之后发生，依次为溶血葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和葡萄球菌；•肺炎：细菌、病毒、真菌、寄生虫等。1、标本采集和运送：（1）痰、鼻咽拭子和通过气管收集的标本；（2）鼻咽