凝集反应试验

第二章抗原抗体反应凝集反应（agglutination）是指颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、螺旋体、细胞性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，与相应的抗体（或抗原）在适量的电解质存在的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象。凝集反应的特点颗粒性抗原致敏颗粒（可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合）电解质的存在肉眼可见的凝集现象凝集反应的发生分两阶段：①抗原抗体的特异结合②出现可见的颗粒凝集凝集反应的类型直接凝集试验玻片凝集试验：ABO血型试管凝集试验：外斐试验，肥达试验间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验协同凝集试验间接血凝试验胶乳凝集试验明胶凝集试验根据凝集反应中抗原的性质，反应的方式分为：①直接凝集反应②间接凝集反应直接凝集反应（directagglutination）细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。参加反应的颗粒性抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin）。玻片法：（定性）–细菌鉴定–ABO血型的鉴定试管法：（半定量）–肥达试验（Widaltest）---伤寒–外斐试验（Weil-Felixtest）---立克次体–交叉配血试验间接凝集反应（indirectagglutination）将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶联与免疫无关大小适当的颗粒性载体的表面，使之成为致敏载体颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象，称间接凝集反应（indirectagglutination）或被动凝集反应（passiveagglutination）。其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应。常用载体：RBC聚苯乙烯胶乳（polystyrenelatex）明胶颗粒活性炭皂土（bentonite）火棉胶间接凝集反应分类依据根据致敏载体用的是抗原（正向）或抗体（反向）根据载体（RBC，胶乳，明胶）根据凝集反应的方式（间接凝集试验，间接凝集抑制试验，协同凝集试验）间接反应的常见类型–间接凝集试验–间接血凝试验–胶乳凝集试验–明胶凝集试验–间接凝集反应的应用1、（正向）间接凝集试验2反向间接凝集试验3、间接凝集抑制试验本次实验内容一、第一次加强免疫二、ABO血型鉴定目的与要求掌握凝集反应的原理与类型掌握玻片凝集法操作与结果判断熟悉ABO血型鉴定的原理与操作玻片凝集法-ABO血型鉴定试验目的通过标准血清抗体鉴定红细胞上ABO血型系统抗原，掌握盐水介质法进行ABO血型系统正定型的基本操作方法和结果判断。实验原理根据IgM类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应（室温），若出现凝集想象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。实验材料与方法试剂：抗A血清，抗B血清材料：玻片，采血针，消毒干棉球，酒精棉球等实验方法与步骤1、标记玻片：取玻片一张，一分为二，分别标记为抗A，抗B。2、采血：用酒精棉球消毒被检者左手无名指或中指内侧，用采血针刺破皮肤，用干棉球擦去第一滴血，稍加挤压，使其流出第二滴血，装入盐水试管，摇匀，即成血细胞悬液。3、加抗血清：滴加抗A，抗B血清于玻片标记处、4、加RBC：在抗A，抗B血清中滴加RBC各一滴。5、混匀：前后左右摇动，观察有无血细胞凝集出现。6、结果：记录受检者红细胞凝集情况及血型鉴定结果。ABO血型结果判断抗B抗A血型-++-++--间接乳凝试验检测类风湿因子间接凝集反应也称为被动凝集反应，是将可溶性抗原或抗体吸附于载体颗粒表面、再与相应的抗体或抗原结合，出现凝集现象。间接乳凝试验检测类风湿因子。常用类风湿因子检测。【操作方法】1、轻轻混匀胶乳试剂2、核对阴、阳性对照3、在反应板孔中加1滴未稀释血清20ul4、然后加1滴胶乳试剂在血清中（阴阳性对照同此法）5、轻轻摇动其充分混匀2分钟内观察结果。实验结果二、ABO血型鉴定结果：1、A型血抗A试剂凝集为＋。2、B型血抗B试剂凝集为＋。3、O型血抗A、B试剂不凝集为－。4、AB型血抗A、B试剂都凝集为＋。三、RF测定结果1、有凝集出现RF为阳性。2、无凝集出现RF为阴性。注意事项1、加强无菌操作、安全防范意识。2、如一次采血要求采集几个标本时，应按一下顺序采血：血培养管、无抗凝剂及添加剂管，凝血现象，有抗凝剂（添加剂）管。3、在做配型试验时，如发现有不配合现象，则取受检者血清，用已知A或B血型红细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。4、RF试验阴阳性对照经检测HbAg、HCV、HIV为阴性，但仍须如病人样品一样小心处理。思考题凝集试验有哪些？可用于检测的原理是什么？