发酵罐清洁验证方的案头孢菌素转庆大霉素和金霉素

文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:1of17发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)福建省福抗药业股份有限公司文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:2of17目录1.文件批准32.目的43.验证范围44.系统的清洁验证44.1.清洁标准44.2.设备的清洗75.擦拭回收率试验86.发酵罐最难清洁位置的确认107.检验方法118.验证方案相关的记录样张129.方案实施139.1.方案实施要求139.2.方案实施责任者1310.方案偏差报告1310.1.偏差和修正一览表1410.2.偏差报告样张1511.方案修改记录表1612.参考文献16文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:3of17发酵罐清洗的清洁验证方案已由下列人员审查并批准：文件责任职位签字日期起草者审查者审查者批准者文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:4of171.目的由于公司产品调整，决定701车间从2011年7月份全部停止头孢菌素发酵生产，计划将该车间的种子罐和发酵罐全部用于非头孢菌素发酵，本方案验证701车间种子罐和发酵罐经碱溶液破坏和自来水清洁后可用于非头孢菌素类发酵使用。2.概述701车间用于头孢发酵的一级种子罐（20m3）、二级种子罐（35m3）、补料罐（35m3）、三级种子罐（80m3）、发酵罐（150m3），均是不锈钢材质，内表面经抛光处理。一级种子罐（20m3）、二级种子罐（35m3）、补料罐（35m3）、三级种子罐（80m3）生产是种子培养阶段没有活性物质。头孢菌素活性物质（CPC）是在发酵罐中产生，故选取发酵罐（150m3）设备做清洗验证。清洗验证项目包括活性物质破坏、擦拭取样（擦拭回收率试验）、发酵罐最难清洁位置的确认、清洗剂选取、清洗方法。3．验证范围系统包括：一级种子罐（20m3）8个：201、202、203、204、205、206、207、208二级种子罐（35m3）8个：501、502、503、504、505、506、507、508补料罐（35m3）4个：601、602、603、604三级种子罐（80m3）10个：701、702、703、704、705、706、707、708、709、710发酵罐（150m3）10个：801，801、803、804、805、806、807、808、809、810合计共40个罐。4.系统的清洁验证4.1.清洁标准4.1.1.清洁标准的制定原则可接受标准基于以下原则。以目测为依据的限度，如不得有可见的残留物。生物活性的限度，如CPC含量应低于10ppm。考虑到CPC是属于β-内酰胺文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:5of17类，转生产非头孢菌素类，所以取10ppm的十分之一即1ppm作为清洁验证接受限度的标准。4.1.2.1.洗罐水头孢菌素残留浓度药品清洁验证时规定由上一批产品残留在设备中的活性物质全部溶解到下一批产品中所致的浓度不得高于1ppm即1µg/g，即下一批产品中含上一批产品活性物质的量应不超过1µg/g，因此头孢菌素发酵罐转产非头孢菌素时洗罐水头孢菌素残留浓度计算如下：头孢菌素(CPC)允许残留高限为1µg/g,庆大霉素最小生产量为100kg，金霉素最小生产量为2000kg，红霉素最小生产量800kg，最终淋洗水为3m3，按转产庆大霉素计算：冲洗水中允许最高头孢菌素残留量为：(1µg/g×100kg/3m3)=0.03µg/ml按转产金霉素计算冲洗水中允许最高头孢菌素残留量为：(1µg/g×2000kg/3m3)=0.6µg/ml按转产红霉素计算冲洗水中允许最高头孢菌素残留量为：(1µg/g×800kg/3m3)=0.26µg/ml因此淋洗水中的头孢菌素残留量取两者中的更小值应≤0.03µg/ml4.1.2.2.发酵罐擦拭取样残留限度的计算冲洗水中头孢菌素允许残留高限为0.03µg/ml，最后淋洗用水为3m3，150m3罐总内表面积约170m2=1.7×106cm2（罐体上下封头面积各19.78m2，罐体高度（部包括上下封头高度）10m，罐体半径约2.1m，故总表面积2×2.1×3.14×10+19.78×1≈151m2），保险因子为10。单位表面积允许的残留物限度为:[0.03×6×103/(1.51×106)]1/10=0.00001mg/cm2=0.012g/cm2拟定取样面积为100cm2,溶解于100ml纯化水中,则擦拭取样残留浓度限度为:文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:6of17100cm2×0.012g/cm2÷100ml=0.012g/ml因此将头孢菌素发酵罐转产非头孢时擦拭取样头孢菌素残留浓度限度定为≤0.012g/ml4.1.3可接受的清洁标准为：发酵罐内表面目测不得有可见的残留物。洗罐水中头孢菌素C残留浓度≤0.03µg/ml擦拭取样头孢菌素残留浓度限度为≤0.012g/ml。擦拭回收试验连续进行三次,擦拭回收率≥80%，RSD应≤20%，以保证擦拭试验结果的可靠性。4.1.4取样4.1.4.1洗罐水的取样洗罐结束后，从放罐管道排水处用洁净带塞的100ml三角烧瓶取100ml洗罐水送品管部测定头孢菌素残留含量。4.1.4.2擦拭取样用市售的棉签在装有100ml纯化水的三角瓶中润湿,并靠在瓶壁上挤压以除去多余的水。在确认取样位置(擦拭部位根据发酵罐最难清洁位置的确认结果确定)和面积（100cm2）后，将棉签头按在取样表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面，在向前移动的同时将其从一边移到另一边。擦拭过程应覆盖整个表面，翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直(见图一棉签擦拭取样示意图)后，将棉签放入三角瓶中，振摇浸泡10分钟，并在三角瓶上注明有关取样信息后送品管部检测头孢菌素含量。文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:7of17图一棉签擦拭取样示意图4.2.设备的清洗4.2.1.设备清洗剂选择头孢菌素易被氢氧化钠破坏，故选用NaOH水溶液作为清洗剂，根据《用NaOH溶液破坏CPC溶液中CPC的有效性试验》(FACVP-CPC-701-01)，采用0.1%NaOH对设备浸泡2小时以上。4.2.2.设备清洗方法和步骤4.2.2.1清洗用的工具B型离心式水泵（型号3B57），其技术参数为：扬程57m,流量45m3/小时，转速2900转/分钟，电机功率15kw。加压水管4.2.2.2清洗的地点发酵罐内和放罐管道4.2.2.3清洗操作程序原来用于头孢菌素生产的20m3、35m3、80m3、150m3罐在停产时已经进行了清洗，本次验证时将按程序对这些罐进行以下的特殊处理和清洗。4.2.2.3.1打开发酵罐罐底阀，关闭放罐管道末端阀门以及放罐管道排冷凝水阀门，设备清洗示意图见图二。4.2.2.3.2在发酵罐内加入30%浓度的工业用液碱NaOH（具体加碱量见下）。然后打开罐的自来水阀门，开启自来水管路上的离心泵，加自来水至罐顶视镜处，浸泡2小时以上。发酵罐清洗液的加碱液量计算*：150m3罐V=150×103L×0.1%÷22%=681L80m3罐V=80×103L×0.1%÷22%=364L35m3罐V=35×103L×0.1%÷22%=159L20m3罐V=20×103L×0.1%÷22%=91L*加碱量计算根据《用NaOH溶液破坏CPC溶液中CPC的有效性试验》(FACVP-CPC-701-01)见附件1。文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:8of174.2.2.3.3两小时后，打开发酵罐罐底阀，打开放罐管道末端阀门，待罐内碱水全部流出后用水管加压至0.4—0.6MPa自来水冲洗下列各处：罐顶，罐壁，人孔及人孔盖；搅拌系统（包括搅拌轴，叶及固定架，三角架）；视镜及视镜冲洗管；蛇形管；各个挡板；空气分布管。直至清洗水pH值降低到与自来水pH值一致，并目测无可见的残留物。4.2.2.3.4关闭放罐管道末端阀门，再用水量约3m3（用200L/min的流速冲洗15min）的水以加压至0.4—0.6MPa自来水冲洗下列各处：罐顶，罐壁，人孔及人孔盖；搅拌系统（包括搅拌轴，叶及固定架，三角架）；视镜及视镜冲洗管；蛇形管；各个挡板；空气分布管。洗罐结束后，打开罐底排水管道排冷凝水阀门用洁净带塞的100ml三角烧瓶取100ml洗罐水送品管部测定头孢菌素含量。4.2.2.3.5按照已通过擦拭回收率试验的方法（擦拭取样见步骤“4.1.4.2擦拭取样”）对罐的最难清洗位置取样（最难清洗点确定见步骤“6.发酵罐最难清洁位置的确认”），送至品管部测定头孢菌素含量。发酵罐离心泵发酵罐罐底阀自来水碱水放罐管道放罐管道末端阀门放罐管道排冷凝水阀门(取样口)图二设备清洗示意图5.擦拭回收率试验文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:9of175.1试验材料：头孢菌素C锌盐样品（批号：WS-CPC-1101含量73.1%）；喷雾器；电子天平；超声波仪。5.2试验步骤5.2.1将准备好的洁净干燥的喷雾器，称其空白喷雾器重Wc（g）；5.2.2准确称取头孢菌素C锌盐(CPC-Zn)，具体称取过程：在干净的称量滤纸上盛放大约0.1g的头孢菌素C锌盐，用天平称量其总重W1（g）。5.2.3将头孢菌素C锌盐倒入洁净干燥的喷雾器中，用天平称量滤纸重量W2（g）；5.2.4实际称取的头孢菌素C锌盐重量Wa=W1—W2；头孢菌素C锌盐效价为K；5.2.5在喷雾器中，加入100ml纯化水置于超声波中使其完全溶解，振荡摇匀备用。用天平称量其喷雾器与头孢菌素C锌盐溶液总重为Wb（g）；头孢菌素C锌盐溶液重量浓度C（µg/g）计算：C=K×Wa/（Wb-Wc）5.2.6擦拭回收5.2.6.1准备一块50cm×50cm的平整光洁的材质与发酵罐相同的不锈钢板。在不锈钢板上用钢锥划出40cm×40cm的区域，每隔10cm划线，形成16块10cm×10cm的方块。5.2.6.2用软管连接氮气出口和喷雾器进气口后，开启氮气总开关（氮气纯度≥99.99%），缓慢调节送气量调节阀，使溶液均匀地喷在40cm×40cm的区域内；5.2.6.3喷液完毕，关闭氮气总开关，排空软管内少量氮气后，关闭氮气调节阀。喷雾器用已校正的电子天平称重得We（g）。5.2.6.4实际涂布的溶液重量为Wd=Wb–We（g）。5.2.7用电吹风温和地吹干不锈钢板。用去离子水润湿棉签，按步骤（“4.1.4.2擦拭取样）擦拭钢板，每擦一个方块（100cm2）换一根擦拭棒，共擦8个方块（见图三回收率试验擦拭取样示意图）。文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品)文件号.:FACVP-CPC-701-02页号:10of17图三回收率试验擦拭取样示意图将擦拭过的棉签分别放回三角瓶中，振摇浸泡10分钟，使头孢菌素C锌盐溶出，在三角瓶上注明有关信息后检测溶液的CPC-Zn含量。5.2.8擦拭回收率的计算C=Wa/（Wb-Wc）Wd=Wb-WeA=C×WdD=B/（A×1/16）B=E×100ml擦拭回收率=回收量/涂布量×100%A:总涂布量；B:回收量；C:样品溶液重量浓度；D:擦拭回收率；Wa:样品重量；Wb:喷雾前总重量；Wc：空白喷雾器重量；Wd：总涂布的溶液重量；We：喷雾后总重量；E：擦拭回收样品溶液中CPC-Zn含量。5.2.9擦拭回收试验连续进行三次,计算回收率（回收率应≥80%）和回收率的RSD(RSD应≤20%)。6.发酵罐