机能学设计性实验

机能学设计性实验遵义医学院2012级临床（6）班胰岛素静脉注射对正常家兔的降血糖作用立项背景：1、胰岛素于1921年由加拿大人班廷和贝斯特首先发现，是一种蛋白质激素，由胰脏内的胰岛β细胞分泌。胰岛素参与调节糖代谢，控制血糖平衡，应用于临床数十年，使过去不治的糖尿病患者得到挽救。2、胰岛素主要作用在肝脏、肌肉及脂肪组织，控制着蛋白质、糖、脂肪三大营养物质的代谢和贮存。(1)对糖代谢的影响：能加速葡萄糖的利用和抑制葡萄糖的生成，即使血糖的去路增加而来源减少，于是血糖降低。(2)对脂肪代谢的影响：促进脂肪的合成和贮存，抑制脂肪的分解。糖尿病时糖代谢障碍，脂肪大量动员，产生大量游离脂肪酸在肝脏氧化至乙酰辅酶A，然后变为酮体，若酮体产生过多则出现酮血症。胰岛素能抑制脂肪分解，并促进糖的利用，从而抑制酮体产生，纠正酮血症。(3)对蛋白质代谢的影响。促进蛋白质的合成，阻止蛋白质的分解。(4)胰岛素可促进钾离子和镁离子穿过细胞膜进入细胞内；可促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。3、胰岛素可用于治疗各型胰岛素缺乏的糖尿病。主要包括以下几点：（1）一型糖尿病：胰岛素是目前治疗一型糖尿病唯一有效的药物，不论有无急性和慢性并发症，均须终生胰岛素替代治疗，不可突然终止。（2）二型糖尿病：通过控制饮食、体育锻炼和口服降糖药治疗都不能取得良好疗效的2型糖尿病患者。（3）出现并发症，如增生型糖尿病视网膜病变、严重神经病变、糖尿病肾病、心脏病变、严重的皮肤病变及肝硬化、肝炎等的糖尿病患者。（4）出现酮症酸中毒、糖尿病高渗性昏迷和乳酸性酸中毒等各种糖尿病急性或慢性并发症的患者。（5）糖尿病合并重症感染、消耗性疾病、急性心肌梗死、高热、妊娠、分娩、创伤及接受大型手术治疗等的糖尿病患者。（6）因全胰腺切除而引起的继发性糖尿病的患者。（7）由于胰岛素能促进钾离子进入细胞，使血液中钾离子浓度降低而细胞内钾离子浓度升高，故而可以用于治疗高钾血症和心肌梗死早期及预防心肌病变时引起的心律失常实验动物：健康家兔15只，体重2.0~2.5kg,，雌雄不限。主要仪器：哺乳动物手术器械一套，RGZ-10型婴儿秤，兔手术台，试管架，离心机，722N分光光度计，试管4支，离心管2支，洗耳球，注射器（5ml、10ml各一支），动脉夹，动脉插管，纱布，10ml移液管，缚腿带5根，丝线，废液缸。主要试剂和药品：胰岛素（1ml胰岛素+52ml生理盐水），0.13%葡萄糖标准液，蒸馏水，10%三氯醋酸，10%三氯化铁，10g/L肝素钠溶液，250g／L的乌拉坦溶液。研究方法：把15只家兔分别编号为1～15号，均按以下实验方法进行实验，用统计表记录注射胰岛素前后家兔血糖浓度变化，并作假设检验。实验方法：•1、实验准备将2支离心管编号为1~2号及四支试管分别编号为1~4号，2只离心管和3、4号试管分别加入10%三氯醋酸7ml，3号、4号离心管分别加蒸馏水及0.13%标准葡萄糖溶液2ml，将注射器和针头用肝素润湿。•2、标本采集家兔实验前12h禁食。称重家兔并记录，以250g／L乌拉坦于（4ml／kg）耳缘静脉注射麻醉，仰卧位固定于兔台。然后行颈总动脉插管术。首先，注射前取血：从近心端开始，第1ml弃去不用，再取2ml血放入1号离心管中，用玻璃棒搅匀。随即自耳缘静脉注射胰岛素：以剂量为每千克体重0.75ml注射胰岛素。最后，注射后取血：注射胰岛素1h后取血2ml于2号离心管，方法同第一步。（3000转每分，离心5分钟）。•3、制备血浆将离心后的上清液分别倒入1、2号试管中，然后定量1~4号试管取液6ml，分别加入10%三氯化铁12滴，五分钟后在波长为620nm下比色（3号管调“0”，读取1、2、4号试管比色值。），并作好记录实验流程图：家兔的称重，麻醉固定颈动脉插管取血2ml于1号离心管，注意第1ml弃去耳缘静脉注射胰岛素取血2ml于2号离心管，方法同上进行离心（3000r／min,5min）上清液到入对应试管，且4只试管均定量为6ml,分别加入三氯化铁12滴比色表1家兔血糖测定（ml）试剂离心管1离心管2空白管3标准管4三氯醋酸7.07.07.07.0葡萄糖标准液———2.0蒸馏水——2.0—注射前兔血2.0———注射后兔血—2.0——取离心上清液于试管定量6.06.06.06.0三氯化铁（滴）12121212观察指标•1、在注射胰岛素后观察家兔是否有口唇发绀、烦躁不安、呼吸急促等低血糖休克前症状；•2、试管中滴入血液后的颜色变化；•3、注射胰岛素前后的血糖浓度变化。预期结果注射胰岛素后家兔血糖浓度较注射前低。数据的收集及处理方法表2实验结果管号（g／100ml）光密度（X）血糖浓度测定管1X1C1测定管2X2C2标准管4X40.13处理方法：K=C4/X4C1=KX1C2=KX2注：C4为标准管的血糖浓度0.13g/100ml；X4为标准管的比色值.C1为未注射胰岛素时的血糖浓度；X1为测定管1的比色值.C2为注射胰岛素后的血糖浓度；X2为测定管2的比色值。表3注射胰岛素前后家兔血糖浓度变化编号注射前血糖浓度注射后血糖浓度差值dd的平方12345……1415统计学检验利用配对设计资料的t检验进行假设检验，检验其有无统计学意义。注意事项1、用药浓度和剂量要求准确，以免效果不佳。2、所用药品不要污染，以免影响实验结果。注射器在注射药品之前，务必冲洗干净。3、注意家兔的取血，第1ml弃去不用。取血时要先用1g∕ml肝素润湿注射器和针头，取血后用肝素封管，避免血液凝固。4、取上清液时，要先将上清液到入编号相对应的试管中，再吸取所需的毫升数，以免吸入沉淀，注意试管应对号使用。参考文献•[1]王志珍.胰岛素作用机制研究的新进展[J].生物化学与生物物理进展.1985(01)•[2]王武超.胰岛素的作用及临床分类[J].中国社区医师.2009(10)•[3]朱文玉.胰岛素研究的进展[J].生物学通报.1997(12)•[4]王志珍,梁栋材.当今胰岛素研究的趋势——胰岛素作用机制的阐明[J].生理科学进展.1985(04)•[5]乐志培,李立群.胰岛素作用机理[J].国外医学.临床生物化学与检验学分册.1984(02)•[6]许樟荣.糖尿病患者胰岛素治疗时存在的问题[J].北京医学.1990(01)•[7]郭婷雯,张媛媛,潘翠柳.糖尿病患者正确认识和使用胰岛素[J].中国卫工程学.2008(S1)•[8]尤杰,孙兆林,季宇彬,陈明苍.糖尿病动物模型的种类与研究进展[J].中国药业.2012(09)•[9]伏琨.降糖药物的应用细节[J].中国药店.2013(18)•[10]贾伟平,项坤三.对糖尿病的再认识[J].上海医学.2001(04)•[11]赵保胜,董淑云,霍海如,姜廷良.2型糖尿病动物模型的研究进展[J].中国实验方剂学杂志.2005(05)•[12]苏更林.胰岛素与糖尿病[J].化工之友.2001(02)•[13]袁群,郭立新,黄列军.胰岛素与糖尿病[J].健康人.2002(10)•[14]李光伟.胰岛素抵抗评估及其临床应用[J].中华老年多器官疾病杂志.2004(01)