呼吸道感染病原体抗体检测及应用(精)

呼吸道感染病原体抗体检测及应用云南昆钢医院检验科湛成国一、呼吸道感染概述二、九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测一、呼吸道感染概述1.概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。常见病因为病毒，少数由细菌引起，患者不分年龄、性别、职业和地区，不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。2、临床症状1）局部症状：鼻塞、流涕、喷嚏、干咳、咽部不适和咽痛等，多于3～4天内自然痊愈。2）全身症状：发热、烦躁不安、头痛、全身不适、乏力等。部分患者有食欲不振、呕吐、腹泻、腹痛等消化道症状。腹痛多为脐周阵发性疼痛，无压痛，可能为肠痉挛所致；如腹痛持续存在，多为并发急性肠系膜淋巴结炎。3）婴幼儿起病急，全身症状为主，局部症状较轻。多有发热，体温可高达39～40℃，热程2～3天至1周左右，起病1～2天可因高热引起惊厥。年长儿以局部症状为主，全身症状较轻，可仅轻度发热。3、非典型呼吸道病原体呼吸道非典型病原体是指除肺炎双球菌以外的病原体，已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。4、非典型呼吸道病原体的检测方法分子生物学检测：PCR病原检测：病原体分离培养血清学检测：ELISA、IFA(间接免疫荧光抗体法)5、呼吸道传染病的预防措施避免受凉净化环境管理传染源，切断传播途径补充营养注意生活规律加强个人卫生和个人防护自动免疫二、九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测目前市场上商品化的呼吸道九联检产品基本都是检测以下九项：嗜肺军团菌、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒（1、2、3型）。西班牙VIECELL公司出品安图代理1.检测样本要求本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小时内检测应2～8ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。2.检测方法原理间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果。3.操作流程4.显微镜观察病原体形态或荧光模式嗜肺军团菌杆状肺炎支原体细胞外围荧光模式立克次体球杆状肺炎衣原体球状腺病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）呼吸道合胞病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）甲型流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）乙型流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）副流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）5.结果判读1）阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。2）阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。6.注意事项1）每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应与说明书要求相符合，否则检验无效。2）洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗，以免冲洗掉已经固化反的应复合物。3）单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的诊断。应采集双份样本（急性期和康复期）同时检测来观察血清转化或抗体水平的明显升高。4）载玻片上病人样本交叉污染会导致错误结果，要小心操作防止发生。5）吸附剂加入样本后要注意观察是否有明显的沉淀出现。谢谢！