高二生物(基因工程的基本操作程序)

三、目的基因导入受体细胞1、什么是转化？2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。三、目的基因导入受体细胞1.目的基因导入植物细胞常用的方法:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法农杆菌的特点:a.易感染双子叶植物和祼子植物。b.具有趋化性。c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞1.目的基因导入植物细胞农杆菌转化法的导入过程:构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达２.目的基因导入动物细胞常用的方法:显微注射技术操作程序：三、目的基因导入受体细胞a.先提纯含目的基因的表达载体b.从动物体内取出卵(受精卵）c.显微注射仪进行显微注射d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体3.目的基因导入微生物细胞原核生物的特点:繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。大肠杆菌的转化过程:用Ca2+处理细胞增加细胞壁的透性，与细胞膜无关三、目的基因导入受体细胞→感受态细胞重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子四、目的基因的检测与鉴定1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？3、利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？1.目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上目的基因的检测内容和方法检测方法:DNA分子杂交技术DNA探针：用放射性同位素等作标记的含有目的基因的DNA片段。四、目的基因的检测与鉴定2.目的基因是否转录出mRNA目的基因的检测内容和方法检测方法:分子杂交技术用DNA探针与mRNA杂交。四、目的基因的检测与鉴定目的基因的检测内容和方法检测方法:抗原—抗体杂交3.目的基因是否翻译出蛋白质四、目的基因的检测与鉴定4、个体生物学水平的鉴定四、目的基因的检测与鉴定β—珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的β—珠蛋白，想一想，应该如何设计？思考与探究思考与探究1.从小鼠中克隆出β—珠蛋白基因的编码序列（CDNA）。2.将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。3.将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌菌落，则表明β—珠蛋白基因已进入。4.培养进入了β—珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β—珠蛋白。