顶空法GC测定氯苯达诺盐酸盐原料药中的残留溶剂

顶空气相色谱法测定氯苯达诺原料药中的残留溶剂含量王琳，丁海宏，胡丽，张智红(江苏宝众宝达药业有限公司，江苏南通226500）摘要：目的建立顶空气相色谱法检验氯苯达诺盐酸盐原料药中残留溶剂的方法。方法采用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱（DB-624，0.53mm×30m，3.0μm），程序升温，初始温度40℃，保持3min，以20℃/min的速率升温至240℃，保持3min；氢火焰离子化检测器（FID），检测器温度250℃，进样口温度200℃，载气为氦气，流速5mL/min，进样体积1mL。分流比1：1。结果5种有机溶剂（甲醇、乙醇、乙腈、苯、甲苯）进样浓度与峰面积呈良好线性关系，相关系数均大于0.9990，加样回收率在96.0%~103.0%之间。结论此法准确可靠，灵敏度高，可用于氯苯达诺中残留溶剂的测定。关键词：顶空色谱法氯苯达诺残留溶剂DeterminationofResidualSolventinClofedanolbyGasChromatographywithHeadspaceSamplingWangLin，DingHaihong，Huli,ZhangZhihong（JiangsuBaozong&BaodaPharmachemCo.,Ltd.JiangsuNantong255000）ABSTRACT:OBJECTIVEToestablishaGCmethodforthedeterminationofresidualsolventsinClofedanol.METHODSDB-624chromatographiccolumn(coatedwith6%cyanopropylphenyl-94%dimethylpolysiloxane,length30m,I.D.0.53mm,film3.0μm)wasadopted.Thecolumntemperaturewasprogrammed:keptat40℃for3min,andthenincreasedby20℃/minto240℃,andkeptfor3min.ThetemperatureofFIDdetectorwas250℃andthetemperatureofinletwas200℃.ThecarriergaswasHeataflowrateof5mL/min.Theinjectionvolumewas1mL.RESULTSThecalibrationcurvesoffivesolventsallshowedgoodlinearityinadetectedconcentrationrange(r＞0.9990),therangeofaveragerecoverywas96.0%~103.0%.CONCLUSIONThemethodwasaccurate,reliableandsensitive,andcanbeusedforassayofresidualorganicsolventsinClofedanol.KEYWORDS:GC;Clofedanol.;residualsolvent氯苯达诺除有中枢性镇咳作用外，还有抗组织胺作用和阿托品样作用，能减轻支气管痉挛和粘膜充血性水肿。适用于呼吸道急性感染引起的干咳或阵咳，常与祛痰药合用。在氯苯达诺的合成过程中用的溶剂有苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙腈，这些溶剂在成品中不可避免的会残留，根据中国药典及ICH对溶剂残留有限度规定，故本文研究了测定氯苯达诺残留溶剂含量的方法。1仪器与试药Agilent7890N气相色谱仪（美国安捷伦）；Agilent7694E顶空进样器（美国安捷伦）；毛细管柱：DB-624（30m×0.53mm，3.0μm）；苯、甲苯、无水甲醇、乙醇、乙腈均为分析纯，DMF为色谱纯；氯苯达诺（江苏宝众宝达药业有限公司，批号：1041210001、1041210002、1041210003）。2方法与结果2.1溶液制备对照储备溶液制备：精密称取乙腈205mg，甲苯445mg，无水甲醇1500mg，无水乙醇2500mg，苯溶液（1mg/ml）1.0ml，置于100ml容量瓶中，用DMF水溶液（10→100）稀释至刻度，摇匀。对照溶液制备：精密移取1.0ml对照储备溶液于100ml容量瓶中，加DMF水溶液（10→100），稀释至刻度，摇匀即得，精密移取10.0ml置于顶空瓶中。供试品溶液制备：取氯苯达诺约0.5g，精密称定，加DMF水溶液（10→100）10mL，溶解，作为供试品溶液。2.2色谱条件DB-624毛细管柱，FID检测器，检测器温度250℃，进样口温度200℃；载气为氦气，纯度99.99%，流速5mL/min；采用程序升温，初始温度40℃，保持3min，以20℃/min的速率升温至240℃，保持3min；顶空瓶平衡温度80℃，平衡时间25min，进样量1mL；定量环温度120℃，传输线温度130℃2.3系统适用性与精密度试验记录色谱图，5种溶剂分离度良好，见图1，经验证出峰顺序为甲醇、乙醇、乙腈、苯、甲苯；各峰之间的分离度依次为2.2、10.6、10.6、12.0、8.1，分离度均大于1.5，色谱峰完全分离；其峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为4.4%、4.5%、3.7%、2.5%、8.1%，峰保留时间的相对标准偏差（RSD）分别为0.02%、0.01%、0.01%、0.01%、0.02%，表明仪器精密度良好，方法重现性好。1：甲醇（2.4min）2：乙醇（3.3min）3：乙腈（4.0min）4：苯（6.1min）5：甲苯（7.4min）2.4线性关系及检测限试验分别精密量取对照品贮备液200μl，150μl，100μl，50μl，10μl，5μl，置于顶空进样瓶中，再分别精密量取10mLDMF水溶液（10→100），混匀，按2.2项下的色谱条件进样，记录色谱图，以浓度（C）对峰面积（A）进行线性回归，结果见表1。表1线性回归方程和线性范围测定结果溶剂回归方程线性范围/mg.mL-1相关系数甲醇Y=696.5X-0.39360.007534~0.301340.9999乙醇Y=1375.7X-0.83740.01245~0.49830.9998乙腈Y=62285.2X-0.66550.001002~0.040080.9997苯Y=80352.4X-0.08050.0000575~0.00230.9990甲苯Y=74789.9X-50.63220.002247~0.089860.9991通过逐级稀释降低浓度，进样测定，测得甲醇、乙醇、乙腈、苯、甲苯的检测限分别为0.171、0.425、0.0699、0.0127、0.00585μg/mL，折算成样品中的含量分别为3.4ppm，8.5ppm，1.4ppm，0.03ppm，0.12ppm。。2.5回收率分别各配制测定限度的50%，100%，150%加入对照溶液的样品溶液，按2.2项下的色谱条件，按外标法计算，甲醇、乙醇、乙腈、苯、甲苯平均回收率分别为98.8%、99.6%、100.7%、101.8%、100.5%，RSD分别为5.3%、6.5%、2.8%、9.4%、7.2%。2.6重复性试验取同一批供试品（批号：1041210001），共6份，按2.1项的方法制备供试品溶液，按2.2色谱条件进样，记录色谱图，按外标法计算样品中甲醇、乙醇、乙腈、苯、甲苯的残留量分别为290ppm、89ppm、未检出、未检出、5ppm，RSD分别为5.6%、4.2%、未检出、未检出、5.7%。2.7样品测定取氯苯达诺3批（批号：1041210001、1041210002、1041210003），按2.1项的方法制备供试品溶液，按2.2色谱条件进样，记录色谱图，按外标法计算样品中各溶剂的残留量，3批样品的测定结果见表2。表2样品测定结果溶剂104121000110412100021041210003甲醇290ppm374ppm323ppm乙醇89ppm136ppm98ppm乙腈未检出未检出未检出苯未检出未检出未检出甲苯5ppm0.2ppm0.2ppm3讨论3.1平衡温度的选择通常较高的平衡温度可提高灵敏度，减少平衡时间，但通过高温度会导致供试品及残留溶剂分解或发生其他变化，还可引起顶空的耐压和气密性等问题，增大分析误差。本文预试一系列温度，80℃比较适宜。3.2平衡时间的选择考察了20，25，30，40min等不同平衡时间对结果的影响，表明了30min后峰面积基本不再增大，故选择30min为平衡时间。参考文献[1]国家药典委员会.中国药典2010年版.二部[S].北京:中国医药科技出版社,2010.附录61-附录65.[2]ICH指导委员会.药品注册的国际技术要求(质量部分)[S].北京:人民卫生出版社,2002.79-100[3]秦立,胡昌勤.气相色谱保留时间预测在药品残留溶剂中的应用[J].药物分析杂志,2000,(10):1469-1471