过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法

植物生理学实验报告实验题目：过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法姓名班级学号一、实验原理和目的H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性二、实验器具和步骤材料：海桐叶仪器与用具：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；试剂:0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0、pH7.80.1mol/LH2O2步骤：1．称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液(pH7.0)6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以6000r／min离心15分钟，倾出上清液。2.测定：取10ml试管2支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。紫外吸收法测定H2O2样品液配置表管号S1S2(对照)粗酶液(ml)0.20.2（ph7.8PBS）pH7.8磷酸(ml)1.51.5蒸馏水(ml)1.01.03．测定:25℃预热后,逐管加入0.3ml0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。4.按下式计算酶活性。结果计算：以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=ΔA240*Vt/(0.1*t*FW*V1)Vt—粗酶提取液总体积（ml）；V1—测定用粗酶液体积（ml）；FW—样品鲜重（g）；0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。三、实验数据和作业过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=(1.546-1.526)*6/(0.1*2*0.3*0.2)=10四、数据分析过氧化氢酶活性较低，可能是由于叶片采集时间过久。五、思考题（1）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?答：叶片的选择，温度的变化，研磨是否充分，洗涤是否干净。（2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关?答：过氧化氢是一种代谢过程中产生的废物,它能够对机体造成损害.为了避免这种损害,过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质.过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中,它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2,使得H2O2不至于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH.