酶专一性及活性影响因素探讨

酶的专一性及酶促反应速率影响探讨一．实验目的1)通过实训测出各种因素是如何对酶活性进行影响的。2)找到唾液淀粉酶各种单因素影响的最佳条件。二．实验原理酶与一般催化剂的区别是具有高度专一性。支队某一种或一类底物具有催化作用。对其他底物没有催化作用。淀粉在唾液淀粉酶的作用下水解，经过一系列被称为糊精的中间产物最后生成麦芽糖。碘液可指示淀粉的水解程度。淀粉→蓝色糊精→红色糊精→无色糊精→麦芽糖淀粉酶只对淀粉起作用，而不能水解蔗糖。淀粉、蔗糖、与糊精无还原性，或还原性很弱，对班氏试剂呈阴性反应；麦芽糖、葡萄糖、果糖是还原糖，与班氏试剂共热后生成红棕色Cu2O2沉淀。本次实验内容通过比较淀粉酶在不同PH、温度、以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。三．试剂与器材1.试剂2%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、班氏试剂（由CuSO4配制）、碘液、磷酸缓冲液2.材料唾液淀粉酶。先用蒸馏水漱口，再含10ml左右，轻轻咀嚼2min后吐出到收集杯里，既得唾液淀粉酶溶液。3.仪器恒温水浴（37℃）、沸水浴（100℃）、冰浴（0℃），试管数只，移液管数只，白瓷板，胶头滴管。四．操作步骤1.酶的专一性操作项目管号1231%淀粉112%蔗糖1唾液淀粉酶11蒸馏水1酶促水解摇匀，37℃水浴保温10min班氏试剂111反应摇匀，沸水浴加热10min后观察现象遇碘变蓝遇碘变蓝遇碘红色遇碘无色遇碘无色2.温度对酶活力的影响操作项目管号123唾液淀粉酶溶液111PH=7的缓冲液111温度预处理0371001%的淀粉111反应2-5min现象操作要点：加淀粉溶液的时候不能将试管移开水浴或冰浴；反应进行5分钟后，每隔1min用胶头滴管从2号试管取一滴，滴入白瓷板槽内，然后加一滴碘液，若呈无色或淡黄色，则可以停止反应；若呈蓝色，说明2号试管淀粉没有水解完全，继续反应，知道取出的反应液与碘液反应呈无色或淡黄色。3.PH对酶活力的影响操作项目管号123PH5.0磷酸缓冲液2PH7.0磷酸缓冲液2PH8.0磷酸缓冲液21%淀粉10滴10滴10滴预保温混匀，37℃水浴中保温2min唾液淀粉酶溶液111检查淀粉的水解程度摇匀，37℃水浴反应1min，每隔1min从2号试管中取出1滴，滴入白瓷板槽中，加一滴碘液，看反应状态。若呈无色或淡黄色，则可以停止反应；若呈蓝色，说明2号试管淀粉没有水解完全，继续反应，知道取出的反应液与碘液反应呈无色或淡黄色。碘液111现象4.酶的抑制和激活操作项目管号1231%NaCl1%CuSO4蒸馏水唾液淀粉酶溶液1%淀粉保温反应并检查淀粉的水解程度摇匀，37℃水浴反应1min左右，检查1号试管的淀粉水解程度。碘液（滴）111现象五．结果与分析针对每个实验现象进行说明，说明为什么是这个现象，如果做的实验现象和理论有差别，说明，为什么你做的是这个现象，说明你自己在操作时，错在什么地方。