试管法血型抗体效价测定

试管法血型抗体效价测定1.检验目的抗体效价测定是一种半定量检测抗体浓度的方法。把效价视为抗体的含量，在临床输血检验中主要用于鉴定标准血清效价、患者血清抗体检测及血清试剂的稀释等。2.检验方法试管法（血凝法）。3.检验原理将被检抗血清用生理盐水作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现肉眼明显可见凝集的最高血清稀释倍数的倒数来表示抗体的效价。4.标本要求4.1采集患者EDTA抗凝静脉血2.0ml。4.2将不抗凝静脉血以3000r/min离心3分钟，分离上层血清4℃保存。5.试剂标准2％A1、B型标准红细胞悬液；0.9%生理盐水。6.器材离心机、小试管、刻度吸管或加样器（50～200µl）、37℃水浴箱等。7.操作程序7.1.取20支小试管，分两排，编号1-10号，第一排每管加生理盐水0.4ml。7.2.用加样器在第一排第一管中加入0.4ml被检者血清，混匀，移0.2ml至第二排第1管，依此类推，至第10管，最后弃去0.4ml。1～10管的稀释度分别为1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512。7.2.于第一排每管中加入2％A1型标准红细胞悬液0.2ml，混匀。7.3.于第二排每管加入2％B型标准红细胞悬液0.2ml，混匀。7.3.室温孵育15分钟。7.4.以3000r/min离心10秒，以出现（＋）凝集强度试管的血清稀倍数的倒数为该抗血清的效价。8.结果判断8.1.一般盐水凝集试验可立即观察，或置室温1小时观察结果。8.2.冷凝集素效价要置4℃冰箱1小时观察结果。8.3.若出现低稀释凝集强度比高稀释凝集强度要强，说明有前带现象发生。8.4.对1份血清重复滴定，结果可能不一样，如果只有一个稀释度的差别，是正常误差范围。9.注意事项9.1．稀释操作时要准确，避免稀释不匀出现“跳管”现象。9.2.离心后试管内上清出现溶血外观，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，有重要临床意义。9.3.稀释液的容量越小，可能产生的误差越大。如果可能，可以增大稀释容量。9.4.如果一种血清分别和几种红细胞作用，要将血清做总稀释，然后分别取相同的血清量到几个试管中，以减少误差。