蛋白浓度的方法

蛋白浓缩的方法（因为百度文库下载要积分，所以把自己在生物论坛写的帖子上传换点积分）常规方法有：丙酮沉淀法，TCA沉淀法，还有浓缩柱浓缩法，柱浓缩法用到浓缩柱，可能有点小贵，但是效果很好。下面介绍下具体过程：丙酮沉淀法，TCA沉淀法见《蛋白技术手册》P60，提供一个直接有的群共享：HelixNet4群毕赤酵母53074791在群共享里有，在此不写了。浓缩柱浓缩+TCA法【本人原创、供大家参考】1、取诱导表达菌液1ml2、离心取上清400ul加到浓缩柱中，离心至剩余约100ul3、将100ul剩余液体加入10ulTCA【过程参考《蛋白技术手册》P60，本人做了一些改进】4、冰上放置20-30min5、离心，弃上清，洗涤后，37度烘干6、加入10ulPBS溶解，再加10ulbuffer，沸水5min7、上样，其余都一样。补充：浓缩柱：UltracelYM-101包￥450。【我的蛋白大概20KD，所以选用了10KD的柱子】部分问题汇总：Q:我就用TCA浓缩的，浓缩50倍也没有看见条带，准备放弃了A：有的时候不见得是没有表达，有可能是表达量低检测不到Q:柱浓缩在哪个公司买的，之前用透析袋浓缩过，效果都不好A:UltracelYM-101包￥450分子公用Q:UltracelYM-10、YM-30配合用来超滤上清获得20KD是不是更好啊？A:建议用分子量小的，比如分子量20KD，有可能有糖基化，或者几聚体什么的超过30KDQ：我的蛋白17KD可以用多大的A:10KD甚至更小