血涂片评价和分类计数的质量控制流程

血涂片评价和分类计数的质量控制流程血涂片评价血涂片的显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，制备薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。一、血涂片制作取末梢血1滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接触血滴后稍停。血液即沿推片散开，将推片与载片保持30～45°角，向前平稳均匀推动推片，载片上便留下一层薄血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形。血膜干燥后，用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。涂片时血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。太薄的血膜片50%的白细胞集中于边缘或尾部，血涂片过厚，细胞重叠缩小均不利于白细胞分类计数。如果血膜分布不匀，主要是推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁所致。二、血涂片的质量控制1、血膜片的质量要求是厚薄均匀适度，低倍镜下观察全片，细胞不重叠，头尾及两侧有一定的空隙，血膜头部有明确的病人标志。2、一些体积较大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此蜡笔划线时应注意保存血膜尾部细胞，血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。3、配制染料须用优质甲醇，稀释染液用缓冲液，因为缓冲液的pH对细胞染色的影响很重要。在偏酸性环境中正电荷增多，在偏碱性环境中负电荷增多，又因为细胞着色对氢离子浓度十分敏感。如果染色偏碱，原是紫红色的中性颗粒则染成深蓝色，造成识别困难。冲洗须用中性水，虽亦可用自来水（但不能保持稳定）。4、对所用染液应进行预染试验，新配制的染液放置一段时间后其中的美蓝逐渐氧化成天青B，天青B对细胞核的着色效果比美蓝好，因此，瑞氏染液放置时间越长染色效果越好，临床上称之为成熟。判断染液成熟程度的简易方法是用正常优质血片做预染试验，先用低倍镜观察载有染液的血片，认为着色满意后，再按照染色后冲洗顺序最后用油镜镜检，这样不仅可了解染液的成熟程度，而且还可以选择合适的染色时间，供临床标本染色时参考。5、染液与缓冲液的比例要适当，以1∶2为宜。一般说来缓冲液稀释度愈大，染色时间愈长，细胞着色愈匀称、鲜艳。缓冲液和染液量要充足，否则染液很快蒸发，染料沉淀于细胞上，使细胞深染而无法检查。细胞较多较厚的涂片（如红细胞增多症）染液应多些。细胞较少的涂片染液应少些。6、染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关，染液愈淡，室温越低，细胞愈多，所需时间越长，应适当增加染液浓度，因此必须根据情况灵活掌握。7、染色良好的血膜片，外观呈浅红色，红细胞呈粉红色，白细胞核呈暗紫红色，染色质结构能辨，粒细胞的颗粒呈固有种特异颜色。四、注意：在日常工作中遇到特殊标本，在制片时就要特殊对待。如：贫血病人、WBC特高疑为白血病人、腹水或胸水。个人：由检验师（士）完成涂片、染色、计数、分类。两差比较：由主管技师计数、分类。双份技术标准差评价法：由检验师（士）及副主管技师计数、分类后比较。质评：A级（优）：90~100分。B级（良）：80~89分。C级（中）：70~79分。D级（及格）：60~69分。E级（不及格）:60分。检验士→主管技师→副主任技师质控目的：1避免或消除技术误差。2缩小固有误差。质控评价：1常规考核标准。2变异百分数评价。3经验控制。分类计数的质量控制流程制定血细胞分析仪血涂片复检的标准并加以评价，建立适合我院的分类计数的标准。方法：通过对200份临床标本血涂片进行显微镜检查，评价仪器提示结果与手工分类计数的一致性和标准执行的可行性。复检标准的标本均需要严格按照操作规程进行显微镜镜检，以免造成漏诊、误诊现象，提高血液学分析质量。白细胞分类计数一、低倍镜观察：选择细胞分布均匀、染色好的部位，转油镜下计数100—200个细胞，求出各种白细胞所占百分比。包括：中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞。二、细胞分布：头体部以淋巴细胞较多，尾部和两侧以中性粒、单核细胞较多，片尾部异常大的细胞较多。一般选择体尾交界处，细胞分布均匀的地方按一定方式，有规律的移动视野。三、发现幼稚或异常白细胞，应分类报告，包括在分类百分率中。如遇到不能确认的细胞，应另列入分类不明一项，如实报告，并保留血片。如发现有核红细胞，应报告分类100个白细胞所见有核红细胞数。检验人员必须能对所有常见白细胞进行分类，并了解大多数白细胞的形态异常，包括先天性和获得性。参与细胞形态学检查的检验人员必须进行专业培训，并具备实际工作经验。检验人员的工作态度、动机和专心程度是关键因素。因为白细胞分类计数是一项主观性很强的工作，影响分类计数的因素很多，有检验人员的态度、实验室环境条件和工作量等。四、血涂片考核考核样本选择10份样本。样本必须包含7种类型白细胞（中性分叶核粒细胞、性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）。按照要求，每份样本制备5张血涂片，按照第节所述方法染色，统一标签，但检验人员不知道样本来源。玻片分成5套，每套包含10份样本的玻片各1张。五、检验人员考核分发给参加检验的人员一套考核血涂片，要求每张血涂片做200个白细胞的分类计数，并根据血涂片编号，报告结果。计算每份样本每种细胞的均值，进行结果解释，制作每种类型细胞分布图。