血液SOP文件

河北省人民医院检验科文件1血液实验室作业指导书河北省张家口市第二医院检验科编制：审核：批准：河北省张家口市第二医院河北省人民医院检验科文件2凝血酶原时间-纤维蛋白原（PT-FIB）测定1.实验原理本实验可同时测定凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）浓度。原理：确定量的抗凝血浆（50微升）样本经一定时间加温后，将组织凝血活酶、钙离子加入其中，激活外源凝血途径，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆，测定其凝固过程中90o散射光变化，然后通过标准曲线求出凝血酶原时间，再通过参数计算得出凝血酶原活动度及INR值。在检测PT的同时，血浆浊度的变化与血浆中FIB的含量成正相关，通过测定凝固终点和起始点光散射强度的差值，再根据试验前已经做出的由不同已知FIB浓度与相应的光散射差值关系的标准曲线即可推测出FIB的浓度。2.标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。3.标本存放：全血贮存在4～10oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，此血浆在室温22～24oC下可存放2小时，在2～4oC可存放4小时，在-20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。4.标本运输：低温条件下运输。5.标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。6.实验材料：6.1每个试剂均购自德国DadeBehringMarburg公司。1）PT-FIB测定试剂盒（代号P/N:84688210）兔脑促凝血激酶10mLX8瓶2）定标血浆CalibrationPlasma（代号P/N:20003700）3）参比液ReferenceEmulsion（代号P/N:9756900）4）因子稀释液Factordiluent（代号P/N:9757600）5）正常质控血浆Normalcontrolplasma（代号P/N:20003110）6）低水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelI/Low（代号P/N:20003210）7）高水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelII/High（代号P/N:20003310）注：促凝血酶原激酶当用不同的促凝血酶原激酶，或用不同的检测方法（手工、半自动、全自动）做PT测试时，其秒数结果将会有较显著的差异。而对于口服抗凝药的病人来说，需要一个能进行比较的PT结果。国际血液血标准委员会（ICSH）及国际血栓与止血委员会（ICTH）建议，根据试剂的ISI值（国际敏感度指数）计算INR值（国际标准化比值），并以INR值作为PT的通用结果报告。根据经验及文献报道，试剂的灵敏度一手测试方法及机器自动化程度的影响。但美国贝克曼库尔特公司提供的PT-FIB试剂，每一批号都经过了严格的测试，与ICSH及ICTH的参考品有很好的相关性，其ISI值均注明在试剂盒说明书中。在ACL7000上，当输入试剂的ISI值后，机器会自动给出INR值。INR=(PTRatio)ISI6.2试剂准备用8mLNCCLSII型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶促凝血激酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。6.3试剂保存未开封的试剂可保存在2～8oC至试剂盒上标明的有效期。河北省人民医院检验科文件3试剂溶解后，于原瓶中2～8oC，3天内有效；在ACL7000上（15oC），8小时有效。建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2～8oC。7.仪器设备：7.1仪器名称：syxmexCA7000全自动血凝仪7.2仪器厂家：日本希森美康公司7.3仪器型号：CA70007.4仪器技术参数：7.4.1试剂位：18个，具冷藏功能。7.4.2样本位：40个，可通过换盘连续添加。7.5仪器校准程序：7.5.1校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。7.5.2校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。8.操作步骤：8.1开机：CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检，当屏幕上边显示Ready时可进行试检8.2洗针：在主屏幕上选RinseProbe键，然后按Execute进行洗针8.3检查消耗品：1.准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。2.准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把每一项的试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选ReagentSetting，按屏幕显示位置放置试剂。注意：共三个位置放清洗液。3.查看仪器的洗液瓶和废液瓶8.4准备标本：将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。8.5输入检测项目：主菜单上的按下Worklist键，进入工作菜单。输入项目，直接点击相应的实验项目键重复：按屏幕下菜单的REPEAT键，在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数，仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息。输入样本号：按屏幕下菜单的IDNO.Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号。开始检测：录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START键，开始检测查看结果：返回到主屏幕，检测的项目如果由○变成●表明此试验已经完成。按下StoredDate键，出现已存储结果界面，屏幕显示已完成的测试的信息。如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等。8.6洗针：当做完一批标本后，需要洗针，按下RinseProbe然后按下Execute进行洗针8.7关机：回到主屏幕下，在洗完针后方可关机，切断电源，同时关闭压力泵和总电源。9.检验结果的判断与分析：9.1仪器测定PT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息：﹡﹡﹡.﹡出现错误，不能得到分析数据ˉˉˉ.ˉ不能计算参数＋＋＋.＋数值超出线性范围.9.2仪器设定PT参考范围在10-14秒，如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记：﹡出现错误信息数据低于可报告的低限数据高于可报告的高限10.质量控制：每批样本同时测定两个浓度水平(正常值和高值)的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，河北省人民医院检验科文件4绘制质控图，判断是否在控。每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。至少每8小时做一次质控分析。用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。请参考CA7000全自动血凝仪操作手册。11.临床意义：PT是用于筛查外源性凝血系统（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素等）的检测项目。11.1参考范围：秒数S：12-16S（患者结果超过正常对照35以上有临床意义）活动度：80-120％国际标准化比值INR：0.8-1.511.2PT延长：见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏；低（无）纤维蛋白原血症；获得性见于急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶症、维生素K缺乏、广泛而严重的肝脏实质性损伤（如急性重症肝炎及肝硬化）、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素）。11.3PT缩短：见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态（DIC早期、急性心肌硬塞等）、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎）、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后。11.4监测口服抗凝药（如华发令、双香豆素等）的重要指标。一般要求：PT(S)：18-24SINR：2.5-3.5，不同疾病不同值。口服抗凝剂“华发令”，预期值约为参考植的2倍，PT活动度参考值为75%-120%，降低到＜40%可能有出血倾向。12.变异的潜在来源12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查12.2标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。12.3纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。12.4超剂量使用肝素使凝固时间延长。12.5FDP增加使凝固时间延长。12.6某些药物，如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。12.7血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。游离血红蛋白胆红素甘油三脂肝素PT100mg/dl15mg/dl700mg/dl0.5U/mlFIB100mg/dl15mg/dl700mg/dl1.0U/mlFDP对PT-FIB的影响比对FIB-Clauss法小。13.操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解13.1确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用。13.2溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。14.仪器维护与保养14.1每日保养：14.1.1开机前观察样品参比液液面，看是否够做测定。14.1.2注意检查液面水平并倒空废液瓶，确保废液能顺利流入废液瓶。14.1.3让开关机尽量减少到最少。14.1.4检查废反应盘杯，必要时倒空废反应盘杯。14.1.5在每天工作前和工作后，执行冲洗程序：按“PROG”，显示应用菜单，选择“PRIMING”，按“ENTER”确认。14.2每周保养14.2.1清洁仪器表面，标本区域内壁和分析腔。14.2.2进入清洁程序清洁吸样针河北省人民医院检验科文件514.2.3清洁冲洗/废液池。14.3每月保养清洁空气过滤网14.4根据需要14.4.1清洁废液管路14.4.2清洁溢出的样本14.4.3更换吸样针组件14.4.4调整吸样针位置14.4.5对吸样针/试剂针排污处理15.参考文献15.1叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社.15.2CA7000全自动血凝仪操作手册活化部分凝血活酶时间（APTT）测定1.实验原理将试剂加入抗凝血浆中，试剂中的微粒硅胶是血小板因子3的表面活性剂，与牛脑磷脂一同作用于内源凝血系统，当加入CaCl2后，开始凝集，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出活化部分凝血活酶时间。2.标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。3.标本存放：全血贮存在4～10oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，此血浆在室温22～24oC下可存放2小时，在2～4oC可存放4小时，在-20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。4.标本运输：低温条件下运输。5.标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作该项目检测。6.实验材料：6.1每个试剂均购自德国DadeBehringMarburg公司。1）APTT测定试剂盒（代号P/N:8468710）冻干脑磷脂5瓶CaCl25瓶(25mmol/L)2）定标血浆CalibrationPlasma（代号P/N:20003700）3）正常质控血浆Normalcontrolplasma（代号P/N:20003110）4）低水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelI/Low（代号P/N:20003210）5）高水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelII/High（代号P/N:20003310）6）因子稀释液（代号P/N:9757600）6.2试剂准备用9mLNCCLSII型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干脑磷脂，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用