腺相关病毒入门基础

腺相关病毒入门基础腺相关病毒（AAV）因安全性好、嗜性广泛、可感染分裂或不分裂的细胞、理化性质稳而易于保存等优点，在基因治疗、疫苗以及生物学基础研究特别是神经生物学领域中得到越来越多的应用。然而对于如何使用腺相关病毒，很多研究员可能仍不是很清楚，我们将通过一系列图文消息让您在最短的时间全面了解腺相关病毒。什么是AAV？腺相关病毒(AAV)是一种无包膜的单链DNA病毒，是细小病毒家族的一员，通常需要腺病毒、疱疹病毒等辅助病毒的帮助，才能进行自我复制。现阶段已发现的AAV有12种的血清型（AAV1至AAV12）和130多种突变型。在基因治疗中，将携带有外源基因的重组腺相关病毒定点整合到宿主基因组，既能克服随机插入所导致的染色体缺失和基因重排等潜在危险，又可以达到长期治疗的目的。AAV如何传递和表达基因重组腺相关病毒是基因传递和表达的一个重要工具，在Vigenebio公司的AAV病毒基因传递系统中，包含末端重复序列(ITRs)的载体质粒pAV-FHAAV载体与包含rep/cap基因的辅助质粒pAAV-rep/cap载体没有任何共同区域，避免通过重组而恢复出野生型病毒，宿主细胞免疫反应被降至最低，从而允许对具有免疫能力的宿主细胞进行基因传递。rAAV进入细胞后，作为附加的DNA能稳定存在。基因的表达通常在第2-7天出现峰值，并可在体内持续数周甚至数月。AAV在基因传递和表达的优势1.宿主范围广：随时可转染的AAV可高效感染分裂和非分裂细胞；2.多种血清型：AAV1,AAV2,AAV5,AAV6,AAV7,AAV8和AAV9等；3.安全性高：ITR序列和rep/cap基因分别由独立的质粒表达；未发现AAV对人体致病，rAAV去除了wtAAV基因组的96%，进一步保证了安全性；4.免疫原性低：AAV2的基因组仅4681个核苷酸，便于用常规的重组DNA技术进行操作，而且进行动物实验时造成的免疫反应小；5.扩散性强：AAV可以穿透血脑屏障，是最理想的神经元和胶质神经下感染工具。为什么选择AAV在研究中经常会遇到病毒载体工具选择的问题，究竟选择何种病毒载体比较合适？各自又有什么优缺点呢？腺病毒慢病毒腺相关病毒病毒基因组dsDNAssRNA(+)ssDNA病毒外壳无具有包膜蛋白无基因组大小38-39kb9kb5kb感染的细胞类型分裂和非分裂细胞分裂和非分裂细胞分裂和非分裂细胞整合至宿主基因组非整合整合非整合外源基因表达短暂长久潜在的持久包装容量7.5kb6kb4.5kb免疫反应高低非常低相对病毒滴度10E11（非纯化）10E7（非浓缩）10E10-11（非浓缩）相对转染效率100%70%70%外源基因的相对表达量高中中如何选择血清型研究发现AAV具有多种血清型，各种不同血清型的AAV载体的主要区别是衣壳蛋白不同，因此对不同的组织和细胞的转染效率存在差异。具体需要使用哪种血清型的AAV，可参阅下面两个表格表，来确定哪种血清型AAV更适合您的细胞。AAVSerotypRetinalpigmentedeMuscleHepatocytePulmonaryBrainepitheliumPancreasKidneyAAV1XneuonsandglialcellsXXAAV2XAAV5lungalveolarcellsneuonsandglialcellsXAAV6XXAAV7XneuronsXAAV8XXneuronsXXAAV9XXXXXX腺相关病毒的优势1）载体全：不同的启动子（神经特异性启动子HumanSynapsin、CamkIIα、GFAP等）和多种报告基因（EGFP、mCherry、RFP和luciferase等）可供客户选择；2)货期短：AAV克隆载体均与我们18,000个预制人类全长cDNAORF克隆载体MCS区通用，行业中最短的生产周期；3）滴度高：可提供10E12V.G/ml及以上滴度的病毒.，最高可达10E14V.G/ml；4）服务优：可根据客户的具体需求提供特殊定制服务。