色谱柱的管理

色谱柱的管理一、液相柱的平衡C18柱的平衡方法：以甲醇或色谱柱说明书要求的试剂作流动相，首先用低流速（0.2ml/min）将色谱柱平衡过夜（注意断开检测器），然后将流速增加到0.8ml/min冲洗30分钟即可。CN柱的平衡方法：先用正已烷以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。NH2柱的平衡方法：正相使用：新柱子可直接用流动相。推荐先用正已烷以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。反相使用：先用正已烷以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同流速、相同用量的异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。硅胶柱的平衡方法：以正已烷作流动相，首先用低流速（0.2ml/min）将色谱柱平衡过夜（注意断开检测器），然后，将流速增加到0.8ml/min冲洗2小时即可。二、色谱柱的测试首次使用，按专用产品项下的测试条件，进行柱效和分离度等系统适用性试验的测试，测试合格后，贴上标签。三、液相色谱柱的使用和维护1、使用装色谱柱时应使流动相流路的方向与色谱柱标签上箭头所示的方向一致。除另有规定外，不宜反向使用，否则会导致色谱柱柱效明显降低，无法恢复。色谱柱在使用过程中，应避免压力和温度的急剧变化及任何机械振动。温度的突然变化或者机械振动都会影响固定相的填充情况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流动相的流速时应缓慢进行。色谱柱的贮存液若无特殊说明，均为有机溶剂，反相柱常用甲醇、乙腈或者高比例的甲醇/乙腈水溶液，正相柱常用脱水处理后的纯正已烷。使用前，一定要注意色谱柱的贮存液与待分析样品的流动相之间是否互溶。有些色谱柱如氨基柱或氰基柱，即可用于正相体系，也可用于反相体系，如色谱柱中贮存液为正相（正已烷）而使用条件为反相时，必须用异丙醇先置换掉色谱柱内的贮存液，然后再用于反相条件，否则将会明显减少色谱柱的使用寿命。在反相色谱中，如果流动相中缓冲盐的浓度较高（大于0.1mmol/l），必须先用低浓度的甲醇/乙腈-水溶液（10-20%）冲洗20分钟。否则缓冲盐在高浓度的有机相中很容易析出，从而使色谱柱堵塞。进样前色谱柱应用流动相充分冲洗平衡。色谱柱在使用过程中出现色谱峰分叉或柱压过高，可先将柱子不接检测器反方向冲以补救或改为其它品种使用。2、流动相流动相中使用的各种有机溶剂应尽可能使用色谱纯，水最好为超纯水或重蒸馏水，如果流动相含盐，还应将配置好的流动相经0.45或0.22um的滤膜过滤。另外，装流动相的容器和色谱系统的在线过滤器等装置应清洁，否则将影响色谱柱的寿命。以硅胶为基质的各种键合相对酸和碱都很敏感，一般PH适用范围为2.5-7.5，应参阅色谱柱使用说明书，配置好流动相后，必要时测定PH值，防止PH过酸或过碱，以免色谱柱填料不可逆性损坏。3、样品样品溶液应经0.45或0.22um的滤膜过滤，或用固相萃取小柱（SPE）对样品溶液进行前处理：如样品成分复杂，部分组分有可能吸附在色谱柱上，最好使用前置保护柱。在用正相色谱分析时如无特殊要求，所有的溶剂和样品应该严格脱水。四、色谱柱的保存反相色谱柱在日常使用时，每次实验之前应先用甲醇/乙腈：水（10：90）冲洗，冲洗体积为柱体积的20倍以上。然后进流动相平衡测样。实验完成后再先后用甲醇/乙腈：水（10：90）和甲醇/乙腈：水（50：50）冲洗，冲洗液体积各为柱体积20倍以上，最后用纯甲醇/乙腈进行冲洗20倍柱体积以上，拆下，拧紧两端柱塞保存。反相柱可以长期贮存于甲醇或乙腈中，正相柱可贮存于经脱水处理后的正已烷中，离子交换柱可贮存于含5%甲醇或含0.05%的叠氮化钠的水中，并将色谱柱两端的堵头堵上，以免干枯，室温保存。用于测定葡聚糖凝胶色谱柱可以长期贮存于水中，但需在冰箱储藏室直立保存。