苍白密螺旋体苍白亚种之微生物学检验

苍白密螺旋体苍白亚种之微生物学检验微生物学检验1．标本可取湿性渗出液(I期梅毒取硬下疳渗出液，Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液)，也可采集血液。标本应及时送检。2．显微镜检查将渗出液或淋巴液置玻片上，暗视野显微镜检查梅毒螺旋体的形态和运动情况。如见沿其长轴滚动、屈伸、旋转、前后移行等活泼运动，即有诊断意义；但阴性不能排除梅毒感染。主要适用于I期梅毒的硬下疳、先天梅毒的皮肤黏膜、胎盘、部分Ⅱ期梅毒皮肤黏膜损害等分泌物。暗视野检查是诊断早期梅毒的有效方法，但敏感性低。也可将标本与荧光标记的梅毒螺旋体抗体作用后，荧光显微镜观察。如标本中存在梅毒螺旋体，可见特异荧光。此外，还可利用梅毒螺旋体的嗜银特性，用镀银染色法染色后，普通显微镜观察被染成黑褐色的梅毒螺旋体。3．血清学诊断人体感染梅毒螺旋体后，除产生特异性抗体外，还产生一种非特异性抗体一反应素。反应素的来源有两种假说①梅毒螺旋体表面存在的脂质所引起；②梅毒螺旋体破坏宿主细胞，由细胞释放的脂质所引起。因此，梅毒血清学试验有非密螺旋体抗原试验和密螺旋体抗原试验两类。(1)非密螺旋体抗原试验：用牛心肌的心脂质作为抗原，测定患者血清中的反应素(抗脂质抗体)。检验方法主要有性病研究实验室试验(venerealdiseaseresearchlaboratorv，VDRL)、快速血浆反应素环状卡试验(rapid1alasmareagm，RPR)和甲苯胺红不加热血清试验(to1uidineredunheatedserunltest，TRUST)。VDRL是1946年由美国性病研究实验室创建，并以该实验室名称命名的方法。原理是以胆固醇为载体，包被心脂质构成vI)RI。抗原微粒，与血清中的反应素结合后出现凝集现象为阳性反应；不发生凝集为阴性反应。试验在玻片上进行，可以定性或半定量，结果需用低倍显微镜观察。由于试剂需现配现用，目前实验室已很少采用。RPR是VDRL试验的改良。原理是用未经处理的活性炭颗粒(直径3～5μm)吸附VDRL抗原。此颗粒若与待测血清中的反应素结合，则形成肉眼可识别的黑色凝集块。试验在专用纸卡的反应圈(内径18mm)内进行，可以用于定性或半定量。TRUST是用甲苯胺红颗粒代替RPR中的碳颗粒作为指示物，此颗粒若与待测血清中的反应素结合，则形成肉眼可识别的红色絮状物，其原理、操作步骤、结果判读等与RPR试验基本相同。RPR和TRUST适用于对大量标本的筛检。由于反应素在非梅毒患者血清中也有出现，如风疹、水痘等病毒性感染；类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫病；麻风、疟疾等细菌感染性疾病；吸毒者甚至个别健康人亦可呈阳性。此外，RPR和TRUST的敏感性高但特异性较低，故结果分析和判定时，须结合临床资料。(2)密螺旋体抗原试验：用梅毒螺旋体抗原检测血清中特异性抗体，可确诊梅毒。常用的检验方法有荧光密螺旋体抗体吸收试验(fluorescenttreponemalantibody-absorption，FTAABS)、梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验(treponemapallidumparticleagglutinationassay，TPPA)、TP-ELISA试验和快速免疫层析试验。FTA-ABS是用梅毒螺旋体Nichols株的抗原悬液在玻片上涂成菌膜，吸附待检血清中的IgG抗体，再用荧光素标记的羊抗人lgG抗体，检测待检血清中的梅毒螺旋体抗体。因待检血清预先经吸附剂去除了非特异性抗体，故特异性较高。TPPA是用超声裂解梅毒螺旋体Nichols株抗原致敏明胶粒子，此粒子与待测血清中的梅毒螺旋体抗体结合可形成肉眼可识别的凝集。ELISA是用超声裂解的梅毒螺旋体Nichols株为抗原检测待测血清中的梅毒螺旋体抗体。该法灵敏度高，试剂稳定、价廉，是目前梅毒血清学诊断的常用方法。快速免疫层析试验采用吸附有显色标记的梅毒螺旋体重组抗原的滤纸条，快速检测血浆或全血中的梅毒螺旋体抗体。此法简便、快速，结果与常规密螺旋体抗原试验有较好的一致性，可用于标本的快速筛查。WHO推荐用VDRL、RPR法对血清进行过筛试验，阳性者用FTA-ABS、FTA-ABS双染色法、TPPA和ELISA等进行确认。先天性梅毒较难诊断，可取脐血用RPR半定量每月监测1次，连续6个月检测反应素效价，或用VDRL定量检查抗体效价变化，若效价增高或稳定在高水平，则表明先天梅毒。神经梅毒应检测脑脊液中的梅毒螺旋体抗体。也可用PCR技术检测梅毒螺旋体或用免疫印迹法测定梅毒螺旋体特异性抗体。