组织切片课程设计

生物制片技术课程论文——鲤鱼脾脏组织结构摘要：组织切片方法是教学、科研、病理检验工作中广泛应用的一种实验技术,所谓组织切片，即取动物某一实体器官上的组织块用包埋剂包埋，然后进行切片及染色的制片过程。在整个制片过程中，包括有取材与固定，脱水与透明，浸蜡与包埋，切片与粘片，染色与封固五大步骤。石蜡切片是组织切片方法中最为简单和常用的切片方法，本实验选择石蜡切片法制作鲤鱼肝脏组织切片。制作时需对每一步都必须认真对待，否则将达不到预期效果，甚至导致制片工作的彻底失败。本文就传统的石蜡组织切片方法进行了全面地改进试验研究，使组织固定完全，脱水彻底，透明适度，浸蜡充分，切片较薄，染色良好；不仅缩短时间，简化程序，节省药液，而且提高了组织切片的质量。关键词：动物组织；HE染色；石蜡切片ProductionandobservationofthespleentissueoffishAbstract:Tissueslicemethodisakindofexperimentaltechnology.whichwidelyusedinteaching,scientificresearchandpathologicalexamination.Socalledtissueslices,thatis,thebodyofasolidorganonthetissuepiecewithparaffinembedded,andthensliceanddyeingoftheproductionprocess.Intheentireproductionprocess,includingthematerialandthefixation,dehydrationandthetransparency,theimmersionwaxandtheembedding,theslicingandthestickypiece,thedyeandthesealfivebigsteps.Production,everystepmustbetakenseriously,otherwiseitwillnotachievethedesiredresults,andevenleadtothefailureoftheproductionwork.Inthispaper,thetraditionalmethodoftissueslicinghasbeencomprehensivelyimproved,whichmakesthetissuefixed,dehydrated,transparentandappropriate,thedipwaxissufficient,thesliceisthin,andthedyeingisgood.Keywords:animaltissue;HEstaining;Paraffinslice一、实验目的1,、通过对鲤鱼的结构观察，了解鱼类的主要特征以及鱼类适应于水生生活的形态特征。2、了解生物制片主要方法；3、掌握石蜡切片和H·E染色技术。基本设备及常用试剂二、基本设备1、显微镜：光学显微镜2、切片机：轮转式、滑动式（平推式）、冰冻式、振动式。均有三组部件安装在牢固稳定的切片机身上：①刀架。②组织块夹具。③微动调节器。3、恒温箱或干燥箱恒温箱是切片不可缺少的设备，主要供浸蜡、烤片、烘烤清洗后的玻璃器皿及某些需要加温60℃以上时应用4、冰箱用于保存染液、试剂和药品并提供切片用冰5、离心机可供脱落细胞及染色体技术用6、切片刀、天平、酸度计、定时钟、一般手术器械、染色缸、染色架、载玻片、盖玻片、常用玻璃器皿、毛笔、酒精灯等。三、常用试剂1、洗液重铬酸钾300g浓硫酸300ml自来水3000ml，即重铬酸钾、硫酸与自来水之比为1：1：10。先将重铬酸钾溶于水，如加热须待冷后，再缓缓加入浓硫酸，边加边搅。不准将水倒入浓硫酸内！另外，清洁液只能用于玻璃仪器的清洗，不能浸泡金属器械。2、蛋白甘油：蛋清打泡，静置、过虑，加入等量甘油，充分混合，加入1%麝香草酚或樟脑防腐。3、盐酸-酒精：作分色用，100ml的70%酒精加入0.5或1ml浓盐酸。4、酒精稀释液：用95%酒精稀释使用。如将95%酒精稀为70%酒精时，可取70ml的95%酒精加水至95ml即成，依次类推。5、碱性水：0.1%氨水或1%碳酸锂水溶液6、10%福尔马林：商品甲醛10ml水90ml7、苏木精溶液：甲液：苏木精2g无水酒精20ml乙液：甲矾40g蒸馏水400ml丙液：高锰酸钾1g蒸馏水16ml三液分别溶化，然后将甲液注入乙液，再加丙液6ml，时时搅拌，加温至煮沸0.5-1min，使速冷却后即可使用。四、实验步骤实验材料：新鲜的鲤鱼一条1.杀死与取材：用手术刀和镊子按要求迅速找到鱼的脾脏，然后取出，要求动作迅速。2.固定：使用小块组织固定法，取下的小块组织，立即置入10%福尔马林固定液中进行固定。3.洗涤：因为小组织可不冲洗，所以本实验需要多次换水浸泡即可。4.脱水：先放入70%酒精中30min，然后80%酒精30min，95%酒精30min,95%酒精30min,无水酒精30min,无水酒精30min，5.透明：比例为1:1的无水酒精和二甲苯混合（30min），二甲苯20min,二甲苯10min.6.浸蜡与包埋：比例比1:1二甲苯和石蜡（30min）,石蜡30min，石蜡30min，包埋。7.切片：将熔化好的石蜡倒入包埋框或包埋盒，用加温的镊子将组织块切面朝下放入，做好标记，冷却。完全凝固后，修整蜡块。将切片机准备好，调整好角度，固定好刀架、刀片和蜡块，切片厚度：6-8μm；转速：40至50次/min。8.染色：二甲苯（5'）→1:1二甲苯+无水酒精（5'）→无水酒精（2'）→95%酒精（2'）→80%酒精（2'）→70%酒精（2'）→苏木精（15'）→自来水洗（2'）→1%盐酸酒精（30''）→自来水蓝化（15'）→蒸馏水（2'）→70%酒精（2'）→80%酒精（2'）→伊红（1'）→95%酒精（2'）→95%酒精（2'）→无水酒精（2'）→无水酒精（2'）→二甲苯（2'）→二甲苯（2'）9.封固：切片经染色透明后，取出切片，滴一滴中性树胶，将盖玻片盖于切片上。贴上标签注明名称、编号。10.观察五、总结与讨论石蜡切片实验是细胞生物学实验的重要部分，迄今为止石蜡切片仍然是疾病诊断，尤其是病变性质判断的重要手段。石蜡切片过程中，最易受到操作人员实验技术影响的步骤是浸蜡、包埋，而且包埋效果直接影响到实验结果的好坏。正确应用动物组织切片技术与完成动物组织切片染色标本的制作好坏关系重大。六、参考文献[1]刘育艳.制作优质实验动物组织切片的有效方法.山西医科大学学报.2001，21（3）：275-276.[2]任成林，田勇，梁淑珍.动物组织HE染色石蜡切片技术的改进,河北北方学院学报.2007，23（1）:41-45.[3]袁广明，胡黎平，李燕，陈大堤，谢富康.成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色.解剖学研究,2006，28（1）:73-74.[4]李华.浅谈制作实验动物组织石蜡切片的方法和体会.2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编.2011:171-173.[5]何书海，陈宏智，焦凤超.动物病理组织切片制作方法的改良.动物医学进展2011,32（11）:130-132.[6]高书堂.在教学和科研中应用动物组织切片技术的体会.湖北教育学院学报.1992，(2).[7]弯雪燕．常规石蜡切片中浸蜡包埋方法的改进[J]．诊断病理学杂志，2000，7(4)：303-304．[8]杨捷频．常规石蜡切片方法的改良[J]．生物学杂志，2006，23(1)：4546．