细菌鉴定流程.

Groupmembers:环境微生物的检测——受试菌初步鉴定报告CONTENTS分离环境形态及理化特征16sRNA基因PCR结果及网上比对结果参考文献结论与讨论分离环境时间采集地分离基物2015年手指表面生科院2019室受试菌的采集步骤：在酒精灯火焰旁，半开皿盖，用手指（洗手前）在平板上轻轻按一下，迅速盖上皿盖。形态及理化特征菌落形态在培养基上呈黄色菌落。菌落圆形，凸起，光滑且有光泽，边缘整齐。形态特征：菌落特征形态及理化特征显微特征圆球状，无鞭毛且不可运动形态特征鞭毛染色1、步骤制片：滴菌液→倾斜玻片→室温干燥染色：A液3-5min→水洗→B液冲残水，覆盖染色→出现明显褐色时轻轻水洗→晾干2、结果受试菌无鞭毛不可运动形态及理化特征革兰氏染色形态特征1、步骤制片：载玻片：火烧去脂→水滴：小→菌：少(薄而均匀)染色：滴加结晶紫染液初染2min→水洗→冲残水后滴加卢戈氏碘液媒染1min→水洗→吸残水后滴加95%乙醇脱色约30s→滴加沙黄染液复染1-2min→水洗→吸干水，镜检2、结果受试菌为革兰氏染色阳性菌G+（金黄色葡萄球菌）受试菌G-（大肠杆菌）形态及理化特征TITLETITEXT枯草芽孢杆菌淀粉水解实验大肠杆菌1、步骤：固体淀粉培养基→划线接种→37℃培养24h→滴加碘液（均匀铺满平板）→观察2、结果：受试菌周围未出现无色透明圈说明不能分泌胞外淀粉酶受试菌理化特征形态及理化特征变形杆菌糖发酵实验大肠杆菌1、步骤葡萄糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养24~48h→观察培养基颜色和是否产生气泡乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养24~48h→观察培养基颜色和是否产生气泡2、结果受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发酵均不产酸不产气受试菌理化特征变形杆菌大肠杆菌受试菌葡萄糖乳糖形态及理化特征氨苄青霉素抗性实验1、步骤氨苄青霉素滤纸条→垂直接种→培养→观察、测量滤纸条距菌起始位置的距离2、结果受试菌对青霉素敏感理化特征受试菌大肠杆菌芽孢杆菌葡萄球菌平板编号大肠杆菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌受试菌11.803.70（？）3.782.702——2.102.902.60抑菌长度（cm）形态及理化特征API20NE试剂条检测1.试剂条接种和培养a)选择菌落（先确定是否为单一纯菌株）b)向培养盒中加入少许无菌水（保持湿度）c)挑取单菌落至2mL0.85%NaCl(aq)（已灭菌）中，使菌浓度达到0.5个麦氏单位标准浊度。用同一枪头分别接种盐水菌悬液从NO3到PNPG试剂管（120µL/管）。d)将剩余的200µL生理盐水菌悬液加至APIAUX培养基，仔细混匀，注满由GLU至PAC管（250µL/管）。e)GLU,ADH,URE三个管用矿物油覆盖f)将API20ESTRIP放入盒中，盖上盒盖，在30℃培养24h。理化特征2.试剂条的结果观察a)培养后，将一滴NIT1和NIT2试剂进入到NO3中，5min后，红色表示阳性反应；阴性反应的，为排除N2的影响，加入锌粉5min，无色表示阳性反应。b)将JAMES试剂加入TRP，立即显现粉红色为阳性反应c)其他见实验结果判定表形态及理化特征API20NE试剂条检测理化特征（24h，30℃）（48h，30℃）形态及理化特征API20NE试剂条检测理化特征结果API20NE硝酸盐还原API20NE产生吲哚API20NE酸化葡萄糖API20NE精氨酸双水介酶活API20NE脲酶活API20NEβ-葡萄糖甙酶活API20NE明胶蛋白酶活API20NEβ-半乳糖苷酶活API20NE可以同化的碳源阴性阴性阴性阴性阴性阴性阳性阴性葡萄糖，麦芽糖，苯乙酸形态及理化特征API20NE试剂条检测理化特征“0050202”16sRNA基因PCR结果及网上比对结果16sRNA基因PCR结果GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACGGTTTCCCCTTTGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG16sRNA基因PCR结果及网上比对结果网上比对结果最相似菌种名Micrococcusluteus最高相似度99.00%结果与分析由16sRNA基因检测结果与数据库对比与Micrococcusluteus最高相似度99.00%从伯杰氏手册查的藤黄微球菌的特征为：球菌，直径为1.0-2.0微生，细胞单生，对生和向几个方向分裂而形成四联体、不规则的堆团或规则的立方堆形。不运动。生成四联或不规则细胞堆团的菌株形成光滑、凸起并具有整齐边缘的菌落。形成立方堆菌株表面常呈现颗粒状和无光泽。菌落黄色、黄绿色或橙色，有些菌株形成一种能扩散到培养基内的紫色素。在液体培养基中浑浊均匀，随之变清，产生一些细的像颗粒状或粘液状的沉淀。通常从碳水化合物中不产生可察觉的酸，在葡萄糖培养液中最终PH值在6.4-8.2.含碳化合物包括乙酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、麦芽糖、蔗糖，都可氧化为水和二氧化碳。对甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖和淀粉的氧化作用都是可变的，不能氧化卫矛醇。藤黄微球菌Micrococcusluteus结果与分析藤黄微球菌Micrococcusluteus可以水解蛋白质、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不还原硝酸盐。有些菌株能生长在含有丙酮酸（作为碳源和能源）、谷氨酸、生物素和无机盐的培养基上。另一些菌株需要含某些氨基酸更复杂的培养基。专性好氧，最适生长温度约为35℃。大多数菌株可在10℃生长，有些在45℃生长。能在5%NaCl生长，但不常在10%或15%NaCl中生长。大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感。对植物和动物不致病。通常存在于土壤、灰尘、水、人和其他动物皮肤上。建议新的模式菌株：CCM169;ATCC44698;NCTC2665.结果与分析分析比较项目菌形态革兰氏染色葡萄糖分解运动性菌落特征有无鞭毛藤黄微球菌球状阳性不分解不运动金黄色无受试菌球状阳性不产酸不产气不运动金黄色无由于API的结果查询需要付费应此因此没有得到其结果，根据16sRNA的查询结果，对比受试菌与藤黄微球菌两则的基本特征，发现都吻合顾初步判定受试菌即为藤黄微球菌。参考文献•NCBIBlast•百度百科•Wikipedia•中国科技资源共享网•伯杰氏系统细菌学手册•沈萍陈向东主编《微生物学实验（第4版）》•PeterKa¨mpfer,HolgerC.Scholz,BirgitHuber,EnevoldFalsenandHans-Ju¨rgenBusse.Ochrobactrumhaematophilumsp.nov.andOchrobactrumpseudogrignonensesp.nov.,isolatedfromhumanclinicalspecimens.InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology(2007),57,2513–2518THANKSGroup214生基一班第二小组