结题报告紫皮石斛品种选育与工厂化育苗关键技术研究

**************************项目工作总结报告合同编号：********项目名称：紫皮石斛品种选育与工厂化育苗关键技术研究项目执行期：****************2014年8月25日i目录1项目资金落实与支出情况................................................................11.1资金到位情况..............................................................................11.2资金使用情况..............................................................................12.项目产品开发进度与取得成果情况.................................................22.1建立了紫皮石斛种质资源圃.......................................................22.2筛选出3个优质的紫皮石斛种质资源......................................32.3建立和优化优质紫皮石斛的组培快繁体系................................52.3.1采集外植体..........................................................................62.3.2培养基的优化......................................................................62.3.3其他因子优化....................................................................103．项目产品市场开拓与销售情况......................................................134.合同技术、经济、质量、资产指标完成情况................................145．项目验收时与立项时企业资产、销售、利税情况.......................156.项目执行过程中存在的问题...........................................................157.其他相关说明..................................................................................161紫皮石斛品种选育与工厂化育苗关键技术研究项目工作总结报告1项目资金落实与支出情况1.1资金到位情况本项目于2012年7月开始启动，自2012年8月至2014年7月按项目合同应新增投资共92万元，其中昆明市创新基金支持20万元，公司投资72万元。至2014.7月，已到位资金为；总资金到位103.5万元，其中，昆明市创新基金无偿支持资金到位20万元；公司资金到位83.5万元，资金已全部按要求到位。1.2资金使用情况本项目到位资金已全部用于本项目开展工作。其使用项目如下：（见表1）表1新增投资使用情况项目新增投资支出情况其中:项目产品开发及试制51.89万元购买仪器、设备4.13万元购置生产设备28.14万元贷款贴息0万元流动资金8.52万元销售费用2.75万元基建1.77万元其他6.3万元合计103.5万元22.项目产品开发进度与取得成果情况2.1建立了紫皮石斛种质资源圃从缅甸、龙陵、文山等地，收集了120多分野生紫皮石斛，建立60m2的紫皮石斛种质资源圃。紫皮石斛资源圃（腾冲基地）紫皮石斛植株特征32.2筛选出3个优质的紫皮石斛种质资源根据不同采集地，母株的形态特征，果实、口感等初步选取7个7个种源为试验样本（见表2）；表2部分紫皮石斛种质资源特性编号来源茎特征口感花特征MZ00缅甸野生种源茎紫色，较粗壮，长30-40cm，中部直径0.8-1.2m粘，甘，无异味，渣较多花瓣及萼片白色，上部具紫红色晕，边缘具短流苏；唇瓣白色，边缘具复式流苏，上面密布短毛；唇盘两侧各具一个黄色斑块。MZ01缅甸野生种源茎紫色，粗壮，长40-60cm，中部直径1.2-1.5cm粘度大，甘，无异味，渣中等MZ03缅甸野生种源茎紫色，较粗壮，长30-40cm，中部直径0.8-1.2cm粘度大，甘，无异味，渣中等LZ01龙陵栽培种源茎紫红色，粗壮，长40-60cm，中部直径1.0-1.2cm粘度大，甘，无异味，渣少LZ02龙陵野生驯化种源茎紫色，极粗壮，长60-80cm，直径1.5-2.0cm，单茎条近500g。粘度大，甘，无异味，渣较少WA1文山栽培种源茎紫色，较细，叶薄、细。茎30cm，直径0.5-0.8cm水分较多，粘度小，甘，无异味，渣较少WY文山野生种源茎较细，叶薄、细茎30cm，直径0.5-0.8cm水分少，粘度大，甘，无异味，渣中等4将上述7个样本进行组织培养繁殖，并检测其中的多糖含量:表3部分紫皮石斛种质资源组织培养表现编号生长状况增殖倍数变异培养周期（天）综合评价MZ00苗高生长较差，小苗增殖率高，苗密集细弱，变异较大12+++++60良MZ01苗高生长快，小苗增殖率稍高，苗较粗壮，变异较少8++60优秀MZ03苗高生长较差，小苗增殖率高，苗密集细弱，变异大12+++++60良LZ01苗高生长快，小苗增殖率适中，苗较粗壮，变异少5+60优秀LZ02苗高生长较其他种源快，小苗增殖率适中，苗粗壮，变异少5+50特优秀WA1小苗生长慢，细弱，变异较少6++60中WY小苗生长慢，细弱，变异较少6++60中注：以+表示程度的高低，+号越多，程度越高。5表4部分紫皮石斛种质资源组培苗多糖含量根据上述试验结果，对供试样本的母株产量，口感等状况，组培过程中的表现（生长状态、变异率等）、有效成份的含量等因素综合分析，筛选了3个优良品种：MZ01特点：缅甸野生种源，多糖含量最高，茎干粗，产量高，组培中增殖系数较大，注意接种密度并及时淘汰变异苗。LZ01特点:龙陵人工种植种源，多糖含量较高，增殖系数适中，变异小，组培适应性强。LZ02特点:龙陵野生种源。多糖含量高，尤其是茎干最粗，单根茎条重量可达500g，口感甘甜，粘度高。组培苗适应性强，生长快。综合分析LZ02种源的优良表现，可能是自然多倍体，但需进一步作细胞学检测。2.3建立和优化优质紫皮石斛的组培快繁体系编号MZ00MZ01MZ03LZ01LZ02WA1WY成熟茎多糖含量（%）21.229.522.825.626.918.120.5组培苗多糖含量（%）0.330.550.360.470.460.230.2562.3.1采集外植体准确鉴定所采集的种质资源，从中初步筛选出品种纯正，茎干较粗，粘度大，口感好，无异味的样品，取其90%成熟度的果实或新芽进行无菌播种或初代培养。2.3.2培养基的优化共试验了种子萌发配方3组，增殖壮苗配方26组，生根培养配方8组：表5种子萌发培养试验配方ZM1X1+NH0.5+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgarZM2X1+NH0.5+12%CM+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgarZM3Pf+NH0.5+10%PE+0.1%AC+2%SU+4.5g/LAgar7表6紫皮石斛增殖壮苗试验配方表7紫皮石斛生根培养试验配方1X1+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/Lagar2X1+NH0.2+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/Lagar3X1+BH0.1+NH0.2+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/Lagar4X1+BH0.5+NH0.2+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/Lagar5X1+BH1.0+NH0.2+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/Lagar6X1+NH0.5+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/Lagar7X1+BH0.1+NH0.5+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar8X1+BH0.5+NH0.5+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar9X1+BH1.0+NH0.5+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar10X1+NH1.0+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar11X1+BH0.1+NH1.0+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar12X1+BH0.5+NH1.0+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar13X1+BH1.0+NH1.0+7%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar14X1+NH0.2+10%PE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar15X1+NH0.2+7%PE+3%BE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar16X1+NH0.2+5%PE+5%BE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar17X1+NH0.2+3%PE+7%BE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar18X1+NH0.2+10%BE+0.1%AC+2%SU+4.2g/LAgar19X1+HR0.0001+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar20X1+HR0.001+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar21X1+HR0.001+NH0.1+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar22X1+HR0.01+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar23X1+HR0.01+NH0.1+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar24X1+HR0.1+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar25X1+HC0.01+NH0.1+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar26X1+HC0.1+NH0.1+10%PE+0.1%AC+3%SU+4.5g/LAgar1Pf+NH0.2+7%BE+0.1%AC+2%SU+5g/LAgar2X2+NH0.2+7%BE+0.1%AC+2%SU+5g/Lagar3X2+HT0.5+NH0.1+7%BE+0.1%AC+2%SU+5g/Lagar4X1+NH0.2+7%BE+0.1%AC+2%SU+5g/LAgar5X1+HT0.5+7%BE+0.1%AC+2%SU+5g/LAgar6X1+BH1.0+NH0.1+7%BE+3%PE+0.1%AC+2%SU+4.5g/LAgar7X1+HT1.0+NH0.1+7%BE+3%PE+0.1%AC+2%SU+4.5g/LAgar8X1+7%BE+0.1%AC+2%SU+5g/LAga8试验结果如下：①种子萌发试验：将果实用酒精表面消毒后，仔细切口一端，将粉状的种子播于培养基表面，暗培养一个月后，种子变绿。此时光培养，2个月后，形成原球茎，各培养基情况观察如下：ZM1:种子萌发率95%以上，原球茎翠绿色，大小中等，形成小芽。ZM2:种子萌发率90%以上，前期生长较快，但后期有部分发黄死亡。原球茎较大，黄绿色。ZM2:种子萌发率90%以上，原球茎深绿色，原球茎细小致密。比较上述三种培养基特性，以ZM1和ZM2较为适宜。ZM2培养基在后期表现较好，原球茎大，苗健壮，也是较好的培养基。②紫皮石斛增殖壮苗试验将从原球茎萌发形成的小苗接种于增殖壮苗配方中，接种方法分别为丛接（3-5株为一丛）和单芽接种，经过65天的培养，观察结果如下：1-6，8组，9组，10组，16组：生长状况较差，单接苗细弱，增殖少；丛接增殖太多，变异大高生长差，苗呈草坪状，无根；15组17组：单接增殖中等，苗稍弱。丛接容易形成草坪状生长；911组，12组，13组