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毕业论文(设计)学生姓名:指导教师:专业名称:园林技术所在系部:园林系2010年3月9日辽宁林业职业技术学院毕业论文评审书论文摘要(由论文作者填写)摘要:被誉为“洋兰王后”的蝴蝶兰,几年来一直都处于花卉销售的首位,一直受到花迷们的青睐。近年来除了盆花,还大量被用作切花材料,切花中除我们常见的插花用途之外,还是制作胸花的好材料,在开会庆典场合备受瞩目,至于用来制作新娘捧花,也是目前国内流行的新风潮,深受广大消费者的好评,这就使得高品质的蝴蝶兰需求量逐年增加。但目前由于专业性培育蝴蝶兰的整体水品不是很高,关键的生产环节技术薄弱,造成蝴蝶兰生产成本较高繁殖系数偏低,工业化生产效率不高,许多名贵品种短缺,品质较低,且市场售价较高。因此建立和完善蝴蝶兰组培快繁技术是解决这一问题的关键环节.本文针对植物组织培养中常见的褐变现象,详细地分析了其产生的机理及影响因素,并提出了相应的对策,为科研和生产提供了一定的理论和实践依据。指导教师评语(含观点、内容、文字表达方面的评价)指导教师评定成绩:指导教师:年月日评审小组意见及成绩:评审小组组长签字:年月日答辩小组意见及成绩:答辩小组组长签字:年月日毕业论文成绩:备注:辽宁林业职业技术学院毕业论文(设计)蝴蝶兰品种组织培养技术摘要:被誉为“洋兰王后”的蝴蝶兰,几年来一直都处于花卉销售的首位,一直受到花迷们的青睐。近年来除了盆花,还大量被用作切花材料,切花中除我们常见的插花用途之外,还是制作胸花的好材料,在开会庆典场合备受瞩目,至于用来制作新娘捧花,也是目前国内流行的新风潮,深受广大消费者的好评,这就使得高品质的蝴蝶兰需求量逐年增加。但目前由于专业性培育蝴蝶兰的整体水品不是很高,关键的生产环节技术薄弱,造成蝴蝶兰生产成本较高繁殖系数偏低,工业化生产效率不高,许多名贵品种短缺,品质较低,且市场售价较高。因此建立和完善蝴蝶兰组培快繁技术是解决这一问题的关键环节.本文针对植物组织培养中常见的褐变现象,详细地分析了其产生的机理及影响因素,并提出了相应的对策,为科研和生产提供了一定的理论和实践依据。关键词:蝴蝶兰;快繁技术;养殖;褐变辽宁林业职业技术学院毕业论文(设计)目录前言……………………………………………………………………………………………第一章蝴蝶兰的生态习性…………………………………………………第二章蝴蝶兰的快速繁殖技术…………………………………………………2.1茎尖培养…………………………………………………2.2蝴蝶蝶兰的诱导培养基为VW、KC、MS、BK……………………………2.3叶片培养…………………………………………………2.4花梗腋培养…………………………………………………2.5根尖培养…………………………………………………2.6原球茎的继代培养与育苗…………………………………………………第三章蝴蝶兰的栽培管理…………………………………………………3.1栽培介质…………………………………………………3.2温度……………………………3.3浇水………………………………………………………………………3.4光照……………………………………………………………………3.5通风……………………………………………………………………3.6营养………………………………………………3.7花后管理………………………………………第四章蝴蝶兰褐变产生的影响因素…………………………………4.1植物种类及基因型不同的植物和不同的基因型……………………………………4.2外植体部位及生理状态外植体的部位及生理状态不同……………………………………4.3培养基成分…………………………………………………………………4.4培养条件…………………………………………………………………第五章防止外植体产生褐变的对策…………………………………5.1适当外植体的选择…………………………………………………………………5.2对外植体的处理………………………………………………………………5.3适宜的培养基………………………………………………………………5.3.1适当的无机盐浓度………………………………………………………5.3.2适当和适量的激素………………………………………………………5.3.3培养基的硬度………………………………………………………辽宁林业职业技术学院毕业论文(设计)5.3.4培养基中水的硬度………………………………………………………5.3.5培养基的pH值………………………………………………………5.3.6培养条件………………………………………………………5.4添加褐变抑制剂和吸附剂………………………………………………5.5进行细胞筛选和多次转移………………………………………………总结………………………………………………………………………………………致谢………………………………………………………………………………………参考文献…………………………………………………………………………………辽宁林业职业技术学院毕业论文(设计)1蝴蝶兰的生态习性喜高温、高湿、半阴环境,越冬温度不低于18度。由于蝴蝶兰出生于热带雨林地区,本性喜暖畏寒。生长适温为15~20℃,冬季10C以下就会停止生长,低于5℃容易死亡。蝴蝶兰的气根颇多,其根尖翠绿,相当敏感,要细心加以保护,切不可触动损伤,否则,就好像打坏了人的嘴巴,要正常进食就困难了。蝴蝶兰喜欢潮湿和半阴的环境,要求空间经常保持湿度50%~70%,盆内不能淋水过多。在夏秋季节不能让阳光直射。但早上的朝阳对它生长最好,应充分加以利用。如果春季阴雨天过多,晚上要用光管给它增加光照,以利日后开花。蝴蝶兰对病虫害的抵抗力较弱,经常会发生叶斑病和根腐病,可采用农药百菌清或达仙冲1000倍溶液喷射,每隔七八天喷1次,连喷3次。这些药液沾在叶上留有白色痕迹,可不必抹去,以利于继续发挥杀菌作用。2蝴蝶兰的快速繁殖技术2.1茎尖培养将除去叶的茎用流水冲洗干净,再用10%的漂白粉表面消毒15min,除去叶原基后,用5%漂白粉用业灭菌10min,用无菌水冲洗干净。在无菌条件下将茎尖及叶基部腋芽切成大小约2~3mm的方块,进行接种。2.2蝴蝶蝶兰的诱导培养基为VW、KC、MS、BK用培养基附加15%的椰乳进行液体和固体培养。液体培养时,至于以160转/min速度震荡培养,10d左右更新新的培养液。培养温度为25℃,光强2000LX,每天光照16~24h,1个月左右诱导出原球茎,这时可转到固体培养基上继续培养。也可取试管苗植株的直径约为0.30mm的茎尖,不需要消毒接种在MS+BA3mg/1的培养基上,培养温度为23-27℃,光强1500LX,14d后茎尖膨大,颜色转绿,三个月后,原球茎直径生长达6mm。2.3叶片培养取试管实生苗片尾外植体,实生苗年龄以3~4个月为最好,其诱导率及每个外植体上的原球增殖的个数最高。对于120d的小苗,可将整叶切下直接插入培养基中,效果比将叶切断好。并且取自第1叶的外植体,原球茎形成率较老叶好;将幼叶骗切断进行培养时,中间部分原球茎形成率比顶部和基部好;成年植株用叶片基部好;切断大小与诱导率直接相关,切断太小成活率低,以0.50cm左右为最好。原球茎的诱导培养基选用。2.4花梗腋培养增殖,最后分化成苗。另一种培养方式是不切下腋芽,取带叶芽的花梗先进行消毒,想消毒后的芽接种到卡特兰属1号培养基上并在培养基中加入10%的香蕉匀浆。也可用VW液体培养基震荡培养一段时间后,产生原球茎,进行切割转移、取带腋芽的花梗节。消毒后直接插入培养基上,接种7天后,侧芽膨大并向外伸长。2.5根尖培养将150天实生苗根尖培养在附加肌醇100mg/l、烟酸1mg/l、VB6mg/l、VB110mg/l、蔗糖30g/l,PH=5.5的B5培养基上,或以30转/min的转速液体震荡培养,培养温度5℃,光强2000lx辽宁林业职业技术学院毕业论文(设计)每天光照12h,结果光培养与暗培养的诱导率差异不大,KT10mg/l和NAA5mg/Ld的激素配比诱导率最高达70%。原球茎的增殖在同样的培养基上,6个月后可形成幼苗。2.6原球茎的继代培养与育苗继代培养基可选用诱导培养基,也可选用KC、KYOTO。可适当加人某些附加物质及调整激素含量以促进原球茎的生长。育苗时用培养基可选用继代培养基,加入一定量复合添加物质促进小植株的发育,如香蕉匀浆或椰乳,也可加人少量的维生素,促进根的生长。进行球茎增殖时,将需要转移的球茎切成几小块,转人新培养基进行增殖培养,培养一段时间后,再进行切割转移,通过这种方式原球茎成倍增长。不需继代的原球茎在继代培养基或育苗培养基上分化出芽,并逐渐发育成丛生小植株,切开丛生小植株,转人育苗培养基上,不久小植株生根,等长到一定大小时可移人温室。切离丛生小植株时,基部未分化的原球茎及刚分化的小芽不要丢弃,收集起来植人另一育苗培养基中,作为种苗。异端时间后将长大的种苗挑出,种植,小苗和原球茎可继续增殖分化。这样既能得到大量的种苗,又能得到大量的不断分化的试管苗。3蝴蝶兰的栽培管理3.1栽培介质蝴蝶兰常见的栽培介质主要以水草、苔藓为主。3.2温度蝴蝶兰喜欢高温高湿的环境,生长时期最低温度应保持在15℃以上,蝴蝶兰适宜生长温度为16℃至30℃。秋冬和冬春之交以及冬季气温低时应注意增温。夏季温度偏高时需要降温,并注意通风,若温度高于32℃,蝴蝶兰通常会进入半休眠状态,要避免持续高温。春节前后为盛花期,适当降温可延长观赏时间,开花时夜间温度最好控制在13℃至16℃之间,但不能低于13℃。3.3浇水蝴蝶兰原产于原始森林中,雾气较多,温度较高。zBWlwm)9蝴蝶兰没有粗大的假球茎储存养分,如果空气中温度不足,则叶面发皱且软弱无力。因此,蝴蝶兰宜在通风、湿度高的环境中栽培养护。蝴蝶兰适宜生长空气湿度为50%至80%。3.4光照尽管蝴蝶兰较喜阴,但仍需要使兰株能接受部分光照,尤其花期前后,适当的光可促使蝴蝶兰开花,使开出的花艳丽持久,一般应放在室内有散射光处,勿让阳光直射。3.5通风蝴蝶兰的正常生长需要流动的新鲜空气,尤其是在夏季高湿期,一定要以良好的通风来防暑,同时也能避免病虫害的感染。3.6营养蝴蝶兰要全年施肥,除非低温持续很久,否则不应停肥。冬天为蝴蝶兰的花芽分化期,停肥很容易导致无花或花少。春夏期间为生长期,可每隔7天至10天施用一次稀薄液肥,宜用有机肥,也可施用蝴蝶兰专用营养液,但有花蕾时勿施,否则容易提早落蕾。夏天长叶(即花期过后),可以追施氮肥和钾肥。秋冬花茎生长期则可用磷肥,但要稀薄,约每隔2周至3周施用一次。施肥的时间在下午浇水以后,施肥数次后,要用大量水冲洗兰盆及兰株,以免残留的无机盐类危害根部。3.7花后管理花期一般在春节前后,观赏期可长达2个月至3个月。当花枯萎后,须尽早将凋谢的花剪去,这样可减少养分的消耗。4蝴蝶兰褐变产生的影响因素影响植物组织培养褐变的因子是复杂的,因植物的种类、基因型、外植体部位及生理状态等不同,褐变的程度也有所不同。4.1植物种类及基因型不同的植物和不同的基因型植物种类及基因型不同的植物和不同的基因型决定了不同的褐化程度。在组织培养中,品种褐化难易可能是与该品种中多酚类物质含量的多少及多酚氧化酶(PPO)活性的差异有关。4.2外植体部位及生理状态外植体的部位及生理状态不同辽宁林业职业技术学院毕业论文(设计)外植体部位及生理状态外植体的部位及生理状态不同其褐化程度不同,同时,不同时期和不同年龄的外植体在培养中褐变的程度也不同。4.3培养基成分培养基成分中的无机盐、蔗糖浓度、激素水平等对褐变的程度的影响尤为重要。另外,其pH值也与褐变程度有较大关系。4.4培养条件温度过高或光照过强,均可加速被培养组织的褐变。不利环境条件都能造成细胞的程序化死亡,温度是诱导程序化死亡的主要因素[1]。5防止外植体产生褐变的对策从理论上讲,酶促褐变可以通过以下三种方法加以抑制:一是除去引起氧化的物质——氧;二是捕捉或减少聚合反应的中间产物;三是抑制有关的酶。实际操作上,下列措施是被认为行之有
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