糖复合物-lyz

1、名词解释1、血型抗原：具有血型特异性的抗原性物质,存在于红细胞、白细胞及血小板上。血浆蛋白成分也有抗原特异性。例如ABO血型抗原有A、B、O三种,主要存在于红细胞的表面,与脂质、蛋白质结合在一起,不溶于水,可溶于乙醇。抗原成分是一种糖蛋白,以大分子多肽链为骨架,上面连接不同糖链,多肽决定ABH抗原的抗原性,糖类决定ABH抗原特异性。2、糖胺聚糖：是蛋白聚糖大分子中聚糖部分的总称。由糖胺的二糖重复单位组成，二糖单位中通常有一个是含氨基的糖，另一个常常是糖糖醛酸，并且糖基的羟基常常被硫酸酯化。糖胺聚糖分为透明质酸、硫酸软骨素/硫酸皮肤素、硫酸角质素、硫酸乙酰肝素/肝素。3、N-糖链核心五糖：与天冬酰胺连接的寡糖链简称N-糖链，它通常包含一个五糖核心区，称为三甘露糖五糖核心：Manα1↘6Manβ1→4GlcNAcβ1→4GlcNAcβ1→AsnManα1↗3根据该五糖核心区连接的其他糖基的情况，N-糖链可分为三类：高甘露糖型，复杂型（二天线型、三天线型、四天线型等）和杂合型。4、硫酸软骨素C：是常见的GAG。由葡萄糖醛酸以β1→3键连接C6位硫酸化的N-乙酰氨基半乳糖形成的重复二糖单位组成，每一个重复二糖单位彼此以β1→4键相互连接。2、书写结构1、UDP-Gal：2、聚β-1,4葡萄糖醛酸：把六位换成羧基或3、2,6-二乙酰基-β-甲基吡喃葡萄糖苷：在2位和6位加上乙酰基3、2种五碳糖，2种六碳糖，2种氨基糖，2种糖醛酸，哈沃斯结构式：2种五碳糖2种六碳糖2种氨基糖2种糖醛酸艾杜糖醛酸一、简答4、氨基糖测定原理，反应式：该法适合于游离氨基糖的测定，含有氨基糖的多糖及其复合物必须先水解为单糖，然后进行分析，氨基糖在酸水解时会破坏，一般需要封管中真空或充氮气保护下用4M盐酸于沸水浴水解4小时以上。原理：（1）氨基糖在碱性条件下与乙酰丙酮缩合形成生色原2-甲基-3-二乙酰吡咯衍生物（2）生色原再与Ehrlich试剂对二甲氨基苯甲醛（DMAB）在浓盐酸乙醇溶液中生成有色物质，530nm比色测定。5、肝素和硫酸乙酰肝素的结构与活性差异：版本1：肝素(HP)和硫酸乙酰肝素(HS)均由[→4）GlcNAcα1→4GlcAβ（1→]n二糖组成。糖链骨架在链的延长过程中或紧接着链的延长之后，发生一系列的修饰变化。首先，一部分N-乙酰基被除去，同时加硫酸基形成N-硫酸氨基葡萄糖（GlcNS），从而使负电荷量有所增加。这是一个临界步骤，因为后续的修饰作用主要发生在沿骨架已发生N-硫酸化的连续区域进行。N-硫酸化作用的程度是区别HS与肝素的一个重要标志。在HS中，转变为N-硫酸的N-乙酰基一般不足50%，而在肝素中则常达70%或更多(90%)。葡萄糖醛酸差向异构化为艾杜糖醛酸并紧密伴随着2-硫酸化作用(IdoA2S)，正如氨基葡萄糖的6-硫酸化(Glc6S)作用一样是相当普遍的。差向异构作用是一个可逆的平衡反应，而2-硫酸化作用可防止艾杜糖醛酸逆向的差向异构化成为葡萄糖醛酸，这对艾杜糖醛酸的形成是极为有利的。因此，肝素的最后结构是高度聚阴离子化的，通常每个二糖含有4个潜在的阴离子：一个羧基，一个N-硫酸和两个O-硫酸。表4肝素和硫酸乙酰肝素的主要区别[12]特征硫酸乙酰肝素肝素在2mol/L乙酸钾（pH5.7，4oC）中溶解溶解不溶分子大小10～70kD10～12kD硫酸基/己糖胺0.8～1.81.8/2.4N-硫酸基40%～60%≥85%IdoA含量30%～50%≥70%与抗凝酶结合0～0.3%～30%合成部位几乎所有动物细胞肥大细胞几乎所有动物细胞均可以表达硫酸乙酰肝素，但只有肥大细胞可以表达肝素，尽管硫酸乙酰肝素也有抗凝血活性，但未加工的硫酸乙酰肝素制品的抗凝血活性远低于肝素。在生物合成过程中，肝素的硫酸化反应和糖醛酸差向异构的反应深度比硫酸乙酰肝素大地多，85%的GlcNAc残基脱掉乙酰基而被硫酸化，而且70%的GlcA被转化为IdoA。HS和肝素的结构修饰作用在阐明生物大分子特异的相互作用方面具有重要意义。在某些细胞类型中，氨基葡萄糖的C3位偶尔被硫酸化，形成3-O-硫酸基。此种取代作用对肝素紧密结合在抗凝血酶Ⅲ的肝素结合部位是必需的，所以在肝素的抗凝活性中起着重要的作用。另一个少见的修饰作用是葡萄糖醛酸的C2位硫酸化，具有此种取代作用的HS曾经在大鼠肝癌细胞系的细胞核中发现过，它可能有抑制细胞分裂的作用[13]。版本2：3、以葡聚糖为例简述其结构测定方法：（单糖、甲基化、IR、NMR、GCMS等分析方法）：（1）分离纯化：首先采用低压凝胶渗透色谱（LPGPC）法对进行纯化，以含有一定离子强度的溶液洗脱，控制合适的流速，收集各组分，用硫酸-苯酚法测定多糖含量，收集合并各含糖组分，透析浓缩，冻干得较纯多糖样品。（2）纯度分析：对分离纯化的多糖样品，采用高效液相色谱进行分子量测定及纯度鉴定。（3）单糖组成测定：采用一定浓度的三氟乙酸对纯化收集的多糖样品进行完全酸水解后，先采用高效薄层色谱法初步判断多糖的单糖组成。然后采用PMP柱前衍生高效液相色谱法精确测定单糖组成，测定结果显示该样品中单糖与葡萄糖标准品保留时间一致，且只含一个单峰，故该样品属于葡聚糖。（4）甲基化反应：采用Hakomori改良法，1）先在无水环境下将干燥得样品加入到DMSO浆中，加入NaOH粉末和MeI试剂，密封反应5-10min，对多糖中的-OH进行全甲基化，冰浴水淬灭反应后，进行透析，收集沉淀后用氯仿水萃取全甲基化的多糖，收集氯仿层产物用IR确定，结果显示3500cm-1的吸收峰消失；2）再用90%甲酸，（含有0.5mol/LH2SO4），RT30min，80℃for2-5Hrs，BioRadAG3X4（acetate）去除硫酸根，冻干，1%NaBH41Hr，少量HAc，RV，FD，得到水解还原后糖醇样品；3）最后Py/Ac2O,100℃,2Hrs,进行乙酰化，甲苯旋蒸除Py，氯仿水萃取，收集氯仿层。获得单糖糖醇甲酯/乙酸酯产物4）糖醇甲酯/乙酸酯进行GC/MS分析，通过GC分离纯化各单糖衍生物，通过峰面积等得到各单糖衍生物的比例，进而通过MS分析确定各单糖衍生物之间的糖苷键连接方式，及分支结构。（5）红外光谱（IR）：IR不仅可以在甲基化反应中起到判断甲基化完成程度的作用。对于未经处理的多糖样品，可以根据特征吸收峰确定糖苷键及糖的构型。例如α-D-Glcp的-C-H在844cm-1，而β-D-Glcp的-C-H在891cm-1。（6）核磁共振（NMR）：在1H-NMR谱图中，α型吡喃糖C1上质子δ值超过5.0ppm，而β型则小于5.0ppm，借此可区别相对构型；另外，不同糖苷键组成的多糖中C1上质子峰面积之比代表着各糖残基的比例。13C-NMR在多糖结构分析上的应用主要有：解决异头碳的构型问题、确定多糖残基中取代位置和分支点、确定多糖中各残基种类和比例。