紫茉莉叶片组织培养综述

紫茉莉叶片组织培养综述摘要：目前，组织培养技术是一项处于快速发展并有待完善的新型生物培养技术，其在生物研究个方面都有很高的利用价值。本实验以紫茉莉叶片为研究材料，研究不同浓度配比的植物生长调节剂对紫茉莉生长愈伤组织产生的影响，最终确立最适的生长调节剂的配比，为紫茉莉优良变异种的保存利用奠定基础。在紫茉莉叶片愈伤诱导中，最适生长调节剂配比的确立需要考录到愈伤组织的褐化、氧化、玻璃苗的防止，最终培养出健康生长力旺盛的愈伤组织，以便于更好的诱导不定芽以及不定根，为紫茉莉苗木再生体系的建立打下基础。组织培养中保持无菌环境是实验成败的基础。关键词：紫茉莉组织培养最适生长调节剂浓度愈伤组织无菌环境引言：组织培养的理论基础是细胞的全能性，细胞全能性是指细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。在多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因，只要条件许可，都可发育成完整的个体。本实验就是根据这一理论基础将高分化的紫茉莉叶片细胞脱分化形成原始干细胞团即愈伤组织。愈伤组织就是紫茉莉在分化，扩大培养的原始材料。生长调节剂在植物生长发育上有很重要的作用，合理的植物生长调节剂配比浓度能使高度分化的植物组织细胞脱分化，产生原始干细胞，即愈伤组织。再用合适的生长调节剂浓度处理愈伤组织即可脱分化产生再生植株。在愈伤组织诱导的时候容易产生褐化、氧化现象，其影响因素有培养基类型、生长调节剂浓度、光照、温度等。正文：一、培养条件：紫茉莉的组织培养即无菌培养，也就是要求培养的材料不带有杂菌。从农场切取叶片材料时，应选择健壮无病虫母株，取幼嫩、分生能力强的部位，以利生长。去材料后需要灭菌处理，先用自来水冲洗十几分钟，冲洗干净后，用70%的酒精浸泡20-30秒钟消毒。接着用无菌水（经高压灭菌的蒸馏水）冲洗三次，再用0.1%的氯化汞浸泡6分钟消毒，最后用无菌水冲洗3-4次本研究的所有离体培养试验中，每处理组接种十瓶，重复3次，培养基pH值均调至5.8—6.0。蔗糖浓度单位为g/L，激素浓度单位为mg/L。培养温度为25℃，先暗培养一周，再在光照强度为2000-2500lx，光照/黑暗时间是12h/12h进行培养。二、试验过程1.培养基配制（1）准备母液：取50mL烧杯，量取25mL大量元素母液、0.5mL微量元素母液、5mL有机母液、5mL铁盐母液，适宜浓度的激素置于烧杯中备用。（2）制备培养基：取500mL烧杯一只，加入500mL蒸馏水，标记液位线，将蒸馏水到出2/3。称取2.5克琼脂粉倒入烧杯中，将烧杯放在电炉上煮沸，待琼脂完全溶化后加入15g蔗糖，充分溶解后加入含有大量元素母液、微量元素母液等的混合液完全倒入大烧杯中，加热至沸腾后将烧杯远离火源，并用蒸馏水定容至液位线。（3）调pH：用1mol/LHCL或1mol/LNaOH将溶液培养基的pH调至5.8-6.0。（4）分装：将配好的培养基分装至100mL的三角瓶中，每瓶约装20~30mL。分装完成后，用封口膜封口，贴上标签。（5）高压灭菌：将分装好的培养基放入灭菌锅的消毒桶内，在外层锅内加入适量水，将排气管插入消毒桶的槽内后盖上锅盖，拧紧螺丝，接通电源。压力升值0.05MPa时，断开电源打开放气阀，待压力归零后继续加热。压力指针移至0.1~0.15MPa时，通过控制电源使压力维持在这个区间15至20分钟。关闭电源，打开放气阀，待压力归零后取出培养基。室温下放置培养基2-3天，确定培养基没有被污染后可用于接种。2.材料接种用75%酒精擦拭超净工作台台面，将培养基以及接种用具置于超净工作台上，用紫外线灭菌30分钟，通风10分钟后开始接种工作。材料消完毒后用经过高压灭菌的滤纸将外植体表面的水吸干，用经过灭菌的剪刀剪成适当大小的块体，然后迅速将外植体接种到培养基表面，正面向上。揭开培养瓶时要在酒精灯的无菌区内进行，注意剪刀和镊子要经过酒精灯烘烤消毒，冷却后再用来处理外植体，以免烫伤烫死培养材料。三、结果与分析不同生长调节组合对愈伤形成的影响1.无生长调节剂加入的培养基培养出来的外植体生长缓慢，无愈伤组织产生，在14天时由叶脉处发出不定根。2.在有添加生长调节剂的培养基里，八个处理（①MS+2，4-D0.5mg/L+6-BA0.5mg/L②MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L③MS+2，4-D1.5mg/L+6-BA1.5mg/L④MS+2，4-D2.0mg/L+6-BA2.0mg/L⑤MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L⑥MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L⑦MS+NAA1.5mg/L+6-BA1.5mg/L⑧MS+NAA2.0mg/L+6-BA2.0mg/L）在14天后均有粉红色、绿黄色愈伤组织发生，但以①②④⑤的愈伤长势较好，三周后愈伤停止生长并渐渐变黑，继代后愈伤组织又开始生长，但继续变黑，继代后两周大多数愈伤组织变黑死亡。（问题待解决中）四、讨论变黑问题中猜测原因：1.营养缺乏，培养后期变黑因为营养缺乏导致营养供应不上，使细胞变黑坏死；2.生长调节剂浓度不适，生长调节剂浓度不适导致后期组织不是症状渐渐表现出来，出现变黑坏死；3.外植体本身代谢出现问题，有害物质渐渐积累增加，最后外植体出现中毒变黑现象。（问题待解决中）