第7章细菌感染的检查方法与防治原则.

第七章细菌感染的检查与防治要求：（1）掌握临床标本的采集原则；（2）掌握细菌的检验程序（3）了解常用的血清学诊断方法第七章细菌感染的检查与防治感染性疾病的病因学诊断确定感染的微生物，为临床诊断提供根据。由于该诊断是通过确定感染的微生物而确立的，故称微生物学诊断（病原学诊断）。关系到正确的治疗、控制和预防。检查方法微生物学(细菌的形态学检查、分离培养和鉴定）免疫学（查Ag或Ab）分子生物学（查核酸）一、标本的采集和送检原则无菌操作适当的标本（注意病程）早期采集采集双份血清做好标记尽快送检（标本必须新鲜）第一节细菌感染的实验室诊断（一）细菌形态学检查针对一些在形态与染色上具有特征的病原菌。1）光学显微镜2）染色法检查（二）细菌分离培养与鉴定主要内容：1、细菌分离培养—菌落大小、色素、溶血；2、涂片、染色、镜检。尤其用于在形态、排列和染色性方面无特征的某些病原菌的检查。阳性率高于直接镜检，但时间长。革兰染色原理：细胞壁结构不同。G+结构致密、肽聚糖层厚、乙醇不易透入；乙醇使胞壁脱水形成一道屏障，短暂阻止结晶紫-碘复合物从胞内渗出；G-疏松、肽聚糖层薄、外膜均含大量脂质，易被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞内结晶紫-碘复合物被溶解脱出而脱色。革兰染色实际意义---鉴别细菌选择用药研究细菌致病性其它染色有：单染色、抗酸染色、特殊染色等。抗酸染色法特殊染色法：鞭毛染色荚膜染色负染色法2、生化反应现有“程序控制的自动分析仪”。3、血清学鉴定：用已知Ab鉴定从标本中分离培养出的未知菌（玻片法简便易行）。分群、分型4、动物试验用于：①分离鉴定病原菌；②测定细菌的毒力及产毒性选用高度易感、健康等条件的动物。如：毒素-抗毒素中和试验---小白鼠；钩端螺旋体---幼龄豚鼠、金地鼠。5、药物敏感试验指导临床选择用药，及时治疗和控制感染有重要意义。药敏试验（纸片法）6、自动微生物鉴定和药敏分析系统：微生物编码鉴定技术---数据库微量培养自动监测分析自动记录药敏结果（三）细菌抗原的检测用已知Ab检测未知抗原（Ag-Ab反应）。优点--特异、灵敏、简便方法：玻片凝集、协同凝集、间接血凝试验、乳胶凝集、对流免疫、酶免疫技术、免疫荧光技术。载体颗粒SPA、乳胶特异性Ab待检Ag凝集协同凝集试验示意图常用的免疫学技术有—--协同凝集试验乳胶凝集试验酶联免疫吸附试验(ELISA,间接法)enzymessuchasperoxidasereactwithappropriatesubstratessuchas3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine),thiscausesachangeincolor.对流免疫电泳免疫扩散试验（四）细菌核酸的检测核酸杂交、PCR、16SrRNA基因测序、基因芯片等技术。更特异、敏感、快速5’3’5’3’PCR3’5’3’5’5’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’检测PCR产物三、细菌感染的血清学诊断(serologicaldiagnosis)查Ab：检测病人血液中由于细菌感染而产生的特异性抗体，辅助临床诊断。广泛用于多种病原体的微生物诊断和流行病学调查。双份血清：早期（急性期）晚期（恢复期）结果：根据双份血清中测到的抗体效价，若升高4倍或以上，有辅助诊断价值。方法：凝集试验，中和试验，ELISA等。致病菌的检验程序药物敏感试验直接涂片染色分离培养生化试验血清学试验动物试验明确诊断初步诊断分子生物学技术其他检测技术第二节细菌感染的特异性预防一、人工主动免疫(artificialactiveimmunization)（一）疫苗、类毒素1、死疫苗—伤寒、霍乱等。2、活疫苗—BCG、鼠疫等。疫苗接种区别点死疫苗活疫苗制剂特点死，强毒株活，减毒株接种剂量与特点量大，2~3次量较小，1次保存及有效期易保存，约1年不易保存免疫效果较低，维持数月~2年较高，维持3~5年甚至更长死疫苗与活疫苗的比较3、亚单位疫苗(subunitvaccine)利用现代生物技术，除去细菌或病毒无关有害成分，分离提取纯化对人体有保护性的抗原。如：肺炎链球菌、脑膜炎球菌的荚膜多糖疫苗，+佐剂即成。接种少量抗原可使人体产生良好免疫应答，且接种反应轻微。优点a、去除引起副反应的物质；b、因不含核酸可免去减毒活疫苗回复突变及灭活全疫苗发生感染性复活的可能；c、消除肿瘤病毒潜在的致癌作用；d、可利用化学试剂分解病毒体。4、基因工程疫苗本质上是亚单位疫苗如：含宋内志贺菌表面抗原质粒的伤寒沙门菌Ty21a优点：安全、经济、可批量生产；缺点：抗原的回收纯化困难。5、重组载体疫苗将抗原表位的目的基因片段转入减毒的病毒或细菌。形式：整合于病毒、细菌基因组或质粒本质：活疫苗6、核酸疫苗（DNAVaccine）核酸疫苗原理：将病原体的保护性抗原基因与质粒重组，重组体注入机体，使机体持续表达该抗原，诱导体液和细胞免疫。优点：a、制备简便、成本低；b、便于贮藏和运输；c、免疫应答持久。核酸疫苗缺点：安全性问题a、人们担心外源DNA整合到宿主染色体中而激活癌基因和影响抑癌基因的表达，导致细胞的恶性转化。b、可能诱导自身免疫性疾病。（二）类毒素概念：可诱导机体建立特异性抗毒素免疫。+吸附剂（佐剂）如：白喉-百日咳-破伤风三联疫苗（DPT）二、人工被动免疫1．抗毒素如：精制破伤风、白喉、肉毒抗毒素2．血清丙种球蛋白、胎盘丙种球蛋白3．抗菌血清：已淘汰4．其他免疫制剂：IFN、IL等。区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体、细胞因子接种次数免疫出现时间1~3次慢，2~4周1次快，立即免疫维持时间长，数年~数月短，2~3周主要用途预防治疗或紧急预防两种人工免疫方法比较第三节细菌感染的治疗主要采用抗菌药物来治疗细菌感染。有：天然的抗菌药物人工合成—磺胺类喹诺酮类微生物合成的抗生素类正确的选择和合理的使用十分重要。第三节细菌感染的治疗原则抗生素①细菌性感染；②病原体种类及其药敏实验；③药物抗菌作用及其体内代谢过程特点。