脑脊液常规操作规程

常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改第1页共6页1．检验目的指导脑脊液（CSF)常规测定。2．方法原理2.1脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。由于脉络丛上皮细胞对血浆中各种物质的选择性分泌和超滤作用，血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不同。其中最易通过血脑屏障的是氯、钠、镁离子及乙醇;其次为清蛋白、葡萄糖、钙离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、胆固醇则极难或不能通过。中枢神经系统任何部位发生器质性病变时，如感染、炎症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。通过对脑脊液理学检查，显微镜检查、化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治疗和预后判断提供依据。2.2脑脊液（CSF）常规测定内容包括:颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、潘氏试验、细菌等。2.3潘氏（pandys)试验：CSF中的球蛋白与苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。3．方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特4.标本类型4.1标本类型：新鲜CSF。4.2标本拒收条件：拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。4.3标本保存与稳定性：一般室温1h内完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查。1颜色（COLOR)6中性粒细胞（NE)2透明度（clearity)7淋巴细胞（LY）3凝固性（coagulability）8单核细胞（MO）4脑脊液有核细胞计数（CSF—NUCL)9潘氏试验（pandystest）5脑脊液红细胞计数（CSF—RBC)常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改第2页共6页5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统5.1标本容器：BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。5.2试剂5.2.1试剂组分：生理盐水0.9%Nacl溶液白细胞稀释液1%冰乙酸（1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml)刘氏快速瑞氏染色液A液：曙红、甲醇B液：亚甲蓝潘氏试剂10%苯酚溶液（纯苯酚10ml+蒸馏水至100ml）5.2.2试剂存储和有效期：试剂名称存储条件有效期开瓶有效期位置生理盐水室温1年1年存货柜/血常规室操作台冰乙酸室温2年1年药品柜1%乙酸冷藏1年1年试剂冰箱10%苯酚溶液室温1年1年药品柜刘氏快速瑞氏染色液室温2年6个月药品柜/染色操作台5.3仪器：OLYMPUS光学显微镜，血细胞计数板。6.校准程序（计量学溯源性）不适用7.质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施不适用8.程序步骤常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改第3页共6页8.1一般性状检查：轻轻混匀CSF，观察量、颜色、有无凝块和透明度（一般细胞数≥300/μl个时或蛋白增加可产生混浊），并记录。8.2显微镜检查8.2.1细胞计数（无凝块标本）（1）清或微混标本：a)混匀后直接冲入计数池，计数四角四大方格内细胞总数（包括RBC，NUCL）。b)用白细胞稀释液作1：1稀释，计数有核细胞数c)红细胞数＝细胞总数－有核细胞数（当白细胞数≥30个/μl时，在白细胞计数池中直接分类至少50个白细胞）（2）混浊及以上标本：a)稀释标本：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数细胞总数；b)溶解RBC：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数有核细胞数；c)冲池；计数d)红细胞数=细胞总数－有核细胞数8.2.2有凝块或粘稠标本：（1）用吸管旋转并挤压凝块，挤出里面的液体及细胞。（2）2000rpm×5min离心，分离上清液和沉渣。（3）混匀沉渣，涂片，用高倍镜观察NUCL、RBC。（4）报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。8.2.3离心获取沉渣和上清液：将完成计数的CSF离心，2000rpm×5min离心,吸出上清液于另一试管，并在试管上编号。8.2.4瑞氏染色：当NUCL106/μl时进行操作。将沉渣混匀涂片，厚薄根据有核细胞数而定，血性标本可考虑推片。待干后，瑞氏染色进行分类（分100个NUCL）；如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时，应请示上级主管，由有经验的上级主管进行分析，并在报告时另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞等。8.3潘氏试验8.3.1试验操作：取小试管一支，加入10%的石碳酸水溶液约5ml，用一次性吸管加一滴CSF上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。8.3.2结果判定：阴性：清晰透明。弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。外观稀释样本量稀释液/溶解剂粉色/轻度混浊1:2020μl380μl红色/混浊1:5010μl490μl带血量极高/极度混浊1:10010μl990μl常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改第4页共6页阳性（+）：灰白色云雾状。（2+）：白色浑浊。（3+)：白色浓絮状沉淀。（4+）：白色凝块。9.计算结果原理9.1颜色9.1.1红色：常见于穿刺损伤或出血性病变。为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意：(1)离心沉淀后：如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血时间已经超过4小时。如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血。（2）红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺损伤引起出血时也可看到，因脑脊液渗透压较血浆高所致。9.1.2黄色：可因陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血、椎管梗阻、化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、重症如核黄疸等引起。9.1.3白色或灰白色：多因白细胞增加所致，常见于化脓性脑膜炎。9.1.4褐色或黑色：常见于脑膜黑色素瘤。9.1.5绿色：可见于绿脓假单胞菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎、高胆红素血症和脓性脑脊液。9.2透明度：脑脊液混浊程度与细胞数量有关，脑脊液中细胞数超过300×10/L时，可出现混浊。蛋白质含量增加或含大量微生物也可产生混浊。9.3凝固性：结核性脑膜炎静置12-24小时后，标本表面有纤细的网膜形成。蛛网膜下腔梗阻时，可产生黄色胶冻状。9.4潘氏试验：有脑组织和脑脊髓膜疾患时常成阳性反应如化脓性脑脊髓膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦呈阳性反应。9.5细胞分类：9.5.1中枢神经系统病变的CSF，细胞可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改第5页共6页9.5.2中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主。9.5.3细菌感染时（化脓性脑脊髓膜炎），细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。9.5.4寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。9.5.4脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。10.生物参考区间（正常脑脊液中白细胞主要为淋巴细胞、单核细胞，之比约为7:3，可含极少中性粒细胞）。11.警告值、危急值（适用时）12.检验结果可报告区间13.对超出可报告范围的结果的处理13.1如检到细菌时应建议培养确认。13.2有不能分类细胞，应请示上级主管，并另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞。14.实验室解释15.安全防护措施15.1所有样品按具有潜在传染性的标本处理。颜色（COLOR)无色透明度（clearity)透明凝固性（coagulability）无凝块潘氏试验（pandystest）阴性OR弱阳性有核细胞计数（CSF—NUCL)成人（0-8）×106/L中性粒细胞（NE)成人（0-6%）儿童（0-15）×106/L新生儿（0-8%）新生儿（0-30）×106/L淋巴细胞（LY）成人（40-80%）单核细胞（MO）成人（15-45%）新生儿（5-35%）新生儿（50-90%）红细胞计数（CSF—RBC)0×10/L常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改第6页共6页15.2测定完成后，上清液及沉渣试管于2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小时以上，倒入医疗废物下水槽，由医院统一消毒处理；塑料试管或容器等容器等医疗废弃物倒入黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销毁处理。15.3原液保存48小时或以上，倒入黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销毁处理，并做记录。16.最常见的误差源。手工操作，主观性较强，细胞鉴别需要有经验。17.方法的局限性（如乳糜血、溶血、高胆红素血等干扰影响、交叉反应等）18.参考文献18.1全国临床检验操作规程-第三版19.有关引用程序与文件20.SOP涉及的记录与表格