第三章细胞生物学研究方法No2

第三章细胞生物学研究方法细胞生物学有哪些研究方法，它们各有何用途？第一节显微镜技术一光学显微镜技术1mm100μm10μm1μm100nm10nm1nm0.1nm光学显微镜电子显微镜扫描隧道显微镜图3--1显微镜的分辨范围（一）普通复式光学显微镜技术光学显微镜的组成主要分三部分:（1）光学放大系统；（2）照明系统；（3）机械和支架系统。普通光镜的最大分辨率是0.2微米。PartsofaNikoncompoundlightmicroscope.（二）荧光显微镜技术特异蛋白质等生物大分子定性定位的最有力的工具。（三）激光共焦点扫描显微镜技术比普通荧光显微镜的分辨率提高1.4---1.7倍。通过”光学切片”观察较厚样品的内部结构。（四）相差显微镜技术相差显微镜的样品不需染色,可以观察活细胞，甚至研究细胞核、线粒体等细胞器的动态。二电子显微镜技术（一）电子显微镜的基本知识1.电子显微镜与光学显微镜的基本区别2.电子显微镜的分辨本领与有效放大倍数3.电子显微镜的基本构造（二）主要电镜技术介绍1.超薄切片技术2.负染色技术3.冷冻断裂和冷冻蚀刻电镜技术4.电镜三维重构技术5.扫描电镜技术CO2临界点干燥法三纳米显微技术扫描隧道显微镜STM的主要特点:(1)具有原子尺度的高分辨本领；(2)可以在真空,大气,液体等多种条件下工作；(3)非破坏性测量。第二节细胞的分离和培养一、流式细胞仪(flowcytometry)二、细胞培养概念细胞培养(CellCulture)是指从活体中取出细胞(或其它建系细胞),在体外使之能继续生存,生长甚至增殖的一种方法.(一)动物细胞培养体外培养的动物细胞可分为原代细胞(primaryculturecell)与传代细胞(subculturecell)。细胞株(cellstrain)细胞系(cellline)(二)植物细胞培养体外细胞培养的方式1.粘附型培养:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。粘附是大多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式2.悬浮型培养:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。来源:来自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以.特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团优点:生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态.缺点:观察不方便,很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)第三节细胞组分的分析方法一用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物差速离心,即利用不同的离心速度所产生的不同离心力,将各种亚细胞组分和各种颗粒分开。第四节细胞化学和细胞内分子示踪技术一、细胞化学技术细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类与脂质等的显示方法二、免疫细胞化学技术1234三、放射自显影技术利用放射性标记技术研究生物大分子在细胞内的合成动态。细胞工程细胞工程(cellengineering)是在细胞水平上的生物工程。细胞融合与细胞杂交技术两个或多个细胞融合成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合(cellfusion)。