动物细胞组织培养(精)

2.3动物细胞工程1、定义:2、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中让这些细胞生长和增殖。它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。动物细胞培养3、动物细胞培养条件：(1)、无菌、无毒的体外环境（添加一定量的抗生素定期更换培养液）防止培养过程中污染防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害(2)、培养基成分：种类：天然培养基：主要取自动物血清，组织提取液，营养价值高，成分复杂合成培养基：人工配置，成分明确，便于控制试验条件葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等??(3)、温度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.4(4)、气体环境O2和CO2和植物组织培养基相比有何独特之处？液体培养基、成分中有动物血清等4.动物细胞生长特性：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质已改变5.过程：剪碎胰蛋白酶（贴壁生长）动物组织块细胞悬液原代培养传代培养胰蛋白酶处理幼龄动物的器官组织；动物胚胎动物细胞培养细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养细胞株细胞系原代培养：一般细胞繁殖1-10代，就发生接触抑制不再分裂，这种培养就叫原代培养。传代培养：贴满瓶壁的细胞由于接触抑制不再分裂，需重用胰蛋白酶处理，再分瓶培养让细胞继续增殖。细胞株：原代细胞一般传至10代左右生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株，遗传物质不改变。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，出现癌变特点，可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。1.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？2.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？3.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？胰蛋白酶水解蛋白质蛋白质蛋白质和磷脂能注意时间的控制不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近思考讨论5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养，使每个细胞与培养液接触不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，因为动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到抑制4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？7、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。这样的过程叫做传代培养8、如何理解原代培养和传代培养？9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？10、有些为何能一直传下去？在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养不都能发生突变，朝着癌细胞方向发展11、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？保存10代以内的细胞，因为10－50部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组织和动物细胞培养的比较6、动物细胞培养应用•大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）•作为基因工程中的受体细胞•培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性•为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据1、下列属于动物细胞工程中的工具是（）A．限制性内切酶B．DNA连接酶C．胰蛋白酶D．果胶酶C2、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（）A．动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D．培养至50代后继续传代的细胞是细胞株B3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于（）A.培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A4、07年江苏高考题动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。右图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。从该图提供的信息可以获得的正确结论有()A．正常细胞与癌细胞的增殖速率相同B．有无血清对正常细胞培养的影响不同C．培养基中补充血清有助于正常细胞的培养D．培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大BCD5、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此图回答(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自___________。(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是__________，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是_______________.(3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有__________等。在此瓶中培养一段时间后，一般传到第代，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养称为___________.幼龄动物的器官或组织、动物胚胎剪碎胰蛋白原代培养10葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清使每个细胞能与培养液接触•(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用_____•处理，然后配置成___________，再分装。胰蛋白酶细胞悬浮液热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练1．概念将动物的一个细胞的，移入一个已经去掉细胞核的中，使其并发育成一个，最终发育为动物个体。动物体细胞核移植技术和克隆动物细胞核卵细胞重组新的胚胎热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练2．过程热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练3．以克隆高产奶牛为例热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练特别提醒(1)克隆动物的性状与核供体生物的性状基本相同，但不是完全相同，因为：①克隆动物的细胞质遗传物质来自于受体卵母细胞的细胞质。②生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的影响。③个体发育过程中，遗传物质可能会发生变异。(2)核移植过程中细胞核只来自于一个个体，因此核遗传物质与供体的相同，属于无性繁殖，不会改变生物体的基因型。热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练4．应用前景(1)加速家畜进程，促进优良畜群繁育。(2)保护濒危物种。(3)转基因克隆动物可作为，生产许多医用蛋白。(4)转基因克隆动物细胞、组织和器官可作为异种移植的供体。(5)人的核移植经诱导分化，形成相应的组织、器官后，可以用于组织器官的移植。(6)研究胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。遗传改良生物反应器胚胎干细胞热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练动物细胞融合和单克隆抗体1．概念或动物细胞结合形成的过程，也称细胞杂交。2．原理。3．诱导融合的方法(1)物理（效率高）、化学方法：与植物体细胞杂交相同，如聚乙二醇、电激法等。(2)生物方法：灭活的病毒。两个多个一个细胞细胞膜的流动性一.细胞融合热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练5．结果形成细胞。6．意义突破了方法的局限，使成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和等的重要手段。如：利用，为制造单克隆抗体开辟了新途径。杂交有性杂交远缘杂交生物新品种培育杂交瘤技术热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练1．对细胞膜融合过程的理解热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练二.单克隆抗体1．事实(1)B淋巴细胞特点：产生一种单一抗体，在体外(能/不能)无限增殖。(2)骨髓瘤细胞特点：。(3)杂交瘤细胞特点：不能能无限增殖B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，既能无限增殖，又能产生特异性抗体。热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练2．单克隆抗体优点：、并可大量制备。3．单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、、简易、的优点。(2)用于治疗疾病和。特异性强、灵敏度高高效快速运载药物热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练4.单克隆抗体的制备过程：热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练1.动物细胞培养过程的顺序是()。①原代培养②传代培养③用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液A．①②③B．①③②C．②①③D．③①②2.在克隆多利羊的过程中，没有运用的技术手段是()。A．细胞培养B．体细胞核移植C．胚胎移植D．基因工程3.一只羊的卵细胞被另一只羊的体细胞核移植后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下了一只羊羔，这种克隆技术具有多种用途，但是不能()。A．有选择地繁殖某一性别的家畜B．繁殖家畜中的优秀个体C．用于保存物种D．改变动物的基因型DDD热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练4.如图为克隆羊“多利”的培育过程示意图。下列各项有关表述不正确的是()A．由于细胞核基因完全来自甲羊，所以克隆羊“多利”的性状与甲羊完全一致B．克隆羊“多利”的培育过程中采用的生物技术有核移植C．乙羊的去核卵细胞为重组细胞基因表达提供了细胞内的环境条件D．此过程说明高度分化的动物细胞核也具有全能性A热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练5.基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞()。A．AAaaB．AaBbC．AabbD．BBbb6.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是()。①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．①②③④B．①③⑤C．②④D．②③7.单克隆抗体与常规抗体相比优越之处在于()。A．单克隆抗体能够制成“生物导弹”B．单克隆抗体可以在体外制备C．单克隆抗体的特异性强，灵敏度高，产量也大大高于常规抗体D．单克隆抗体的制备过程简单CAC热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练【例1】回答下列有关动物细胞培养的问题。(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是_____。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是________。动物细胞培养相互接触接触抑制单层(或一层)胰蛋白酶热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现________的现象，但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，该种细胞的黏着性________，细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量________。(3)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不被染色，原因是_______________________。(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到________期的细胞用显微镜进行观察。(5)在细胞培养过程中，通常在________条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中________的活性降低，细胞________的速率降低。衰老甚至死亡不死性降低减少由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色中冷冻(或超低温、液氮)酶新陈代谢热点考向示例随堂达标检测课堂互动探究活页规范训练深度剖析细胞增殖过程中存在接触抑制现象，需用胰蛋白