第节糖化血红蛋白测定

第节糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本：A/0页码：第1页共5页1检测原理本法利用TTAB作为溶血试剂，用来消除白细胞物质的干扰（TTAB不溶解白细胞）。血液样品不需要除去不稳定HbA1c的预处理。全血溶血液中的HbA1c浓度，用浊度抑制免疫学方法测定。先加入抗体缓冲液，样本中的糖化血红蛋白（HbA1c）和抗HbA1c抗体反应形成可溶性的抗原-抗体复合物，因为在HbA1c分子上只有一个特异性的HbA1c结合位点，不能够形成凝集反应。然后，加入多聚半抗原缓冲液，多聚半抗原和反应液中过剩的抗Hb1c抗体结合，生成不溶性的抗体-多聚半抗原复合物，可用比浊法进行测定。同时在另一个通道上测定Hb浓度。在改通道中，溶血液中的血红蛋白转变成特征性吸收光谱的血红蛋白衍生物，用重铬酸盐作标准参照物，进行比色法测定Hb浓度。根据Hb含量及HbA1c含量，计算出HbA1c%。（TTAB：十四烷基三甲基溴化铵）2标本采集及影响因素2.1采血方法空腹抗凝（EDTA-K2）静脉血2~3ml。2.2标本保存抗凝全血于4~8℃可保存7d。2.3注意事项标本应尽量避免溶血。3试剂和设备3.1试剂采用罗氏原装双试剂3.1.1试剂组成：R1试剂：抗体试剂MES﹡﹡缓冲液：0.025mol/L：TRIS﹡﹡﹡缓冲液：0.015mol/LPH6.2HbA1c抗体（绵羊血清）：≧0.5mg/mL；稳定剂；防腐剂（液体）R2试剂：多半抗原试剂MES缓冲液：0.025mol/L；TRIS缓冲液：0.015mol/L，PH6.2第一节糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号：A/0页码：第2页共5页HbA1c多半抗原：≧8μg/mL；稳定剂；防腐剂（液体）﹡﹡MES=2-吗啉乙烷磺酸﹡﹡﹡TRIS=三（羟甲基）-基氨基3.1.2试剂准备：直接使用。3.1.3试剂保存：2~8℃冷藏保存。3.2控制品Rochecobasc501原装配套控制品。3.3校准品Rochecobasc501原装配套校准品。3.4仪器Rochecobasc501全自动生化分析仪。4操作程序4.1检测过程流程表1-1-1HbA1c在Rochecobasc501分析仪上的分析参数测定模式2点终点法反应时间/测定点10/34—70波长A/B660/340nm反应方向上升单位mmol/L（g/dL）试剂移液稀释液（H2O）R1120μLR224μL样本容量样本样本稀释样本稀释液（NaCl）正常5μL——减少5μL——增加5μL——签收标本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。4.2样本签收第节糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号：A/0页码：第3页共5页严格按照标本签收程序签收标本。4.3样本处理标本以3500r/min，离心10分钟，分离血清上机检测，若标本不能及时检测，分离血清于2~8℃保存。4.4样本检测4.4.1手工编排测试项目：适用于无双向条形码标本或标本复查。将标本按编号次序装载于仪器专用架上，放置于c150模块内。在Rochecobas的操作窗选择常规标本单个标本批量标本急诊标本输入架号位放置标本到置及标本号急诊位4.4.2运行：确认样本已经装载在样本架上，架号、样本号、项目设置无误的情况下，进入如下操作：在相应的标本类型里输入起始号，回车4.5检验后样本保存样本检验完后将样本由样本架上卸下，放置于试管架上，密封后保存于样本保存冰箱（2~8℃）保存期为5d。5校准程序5.1校准品准备和储存每瓶准确加3ml蒸馏水复溶，轻轻旋转摇匀，室温放置30min待充分溶解后分装，-20℃可保存20d，2~8℃可稳定24h。急诊选择项目保存开始开始常规选择标本类型、输入序列号或样本号选择项目保存重复常规工作菜单选择项目输入最后的样本号第一节糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号：A/0页码：第4页共5页5.2校准条件在更换试剂批号、更换仪器主要配件、仪器进行维修、大保养、室内质控失控时均需校准，无特殊情况校准周期为7d。5.3校准程序选定定标液及定标方法加载定标液定标结果查看红色消失为成功有红色且出现Failed为失败6质量控制程序6.1质控品准备和储存平时保存在-20℃低温冰箱，启用时取出，室温放置30min待充分融化后使用，2~8℃稳定72h。6.2控制品水平和分析批长度每24小时至少进行1批，每批至少2个水平。6.3质控操作程序选中质控项目加载质控品质控结果查看选择项目7性能参数线性范围：3~26g/L，不准确度允许范围X±15.0%，不精密度CV＜5.0%。质控状态选择保存开始开始质控运行状态图表实时质控累积Levy-Jennings图结果误差判断结果累积校准状态校准状态保存开始开始第节糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号：A/0页码：第5页共5页7性能参数线性范围：3~26g/L，不准确度允许范围X±15.0%，不精密度CV＜5.0%。对于超出线性范围的结果，用生理盐水对标本进行稀释再检测，结果乘以稀释倍数。8生物参考区间成人：4.8~5.9%9临床意义9.1此试验用于评定糖尿病的控制程度。当糖尿病控制不佳时，糖化血红蛋白浓度高至正常2倍以上。因为糖化血红蛋白是血红蛋白生成后与糖类经非酶促结合而成的。它的合成过程是缓慢且相对不可逆的，持续存在于红细胞120天生命期中，其合成速率与红细胞所处环境中的糖浓度成正比。因此，糖化血红蛋白所占比率能反映测定前1~2月内平均血糖水平。本实验已成为反映糖尿病较长时间血糖控制水平的良好指标。如果HbA1c的浓度高于10%，胰岛素的剂量就需要调整。在监护中的糖尿病患者，其中Hb1c的浓度改变2%,就具有明显的临床意义。9.2此试验不能用于诊断糖尿病或判断天-天间的葡萄糖控制，亦不能用于取代每天家庭查尿或血液葡萄糖。9.3HbA1c水平低于确定的参考范围，可能表明最近有低血糖发作、Hb变异体存在或红细胞寿命短。9.4任何原因使红细胞生存期缩短，将减少红细胞暴露到葡萄糖中的时间，随HbA1c%就会降低，即使这一时间平均血液葡萄糖水平可能是升高的。红细胞寿命缩短的原因，可能是溶血性贫血或其他溶血性疾病、链状细胞特征、妊娠、最近显著的血液丧失或慢性血液丧失等，当解释这些患者的HbA1c结果时应当小心。10参考文献[1]Rochecobasc501糖化血红蛋白（免疫比浊法）测定试剂说明书。[2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006:347~350.编制人：高强审核人：王永锋批准人：吴田明生效日期：2014.01.01