第五章血型和输血

第1页第五章血型和输血血型定义：早期指红细胞表面抗原的差异，现知，血小板和白细胞表面抗原也存在差异，因此，血型是抗原抗体系统的遗传特征。血型研究的应用：治疗输血、器官移植、骨髓移植、法医鉴定、考古研究等。第一节红细胞AB0血型系统本节考点：（1）ABO血型系统的抗原及抗体检查（2）ABO血型系统的亚型（3）ABO血型鉴定（4）交叉配血法（5）ABO血型鉴定及交叉配血中常见错误（6）ABO血型系统主要临床意义（一）AB0血型系统的抗原及抗体检查1996年，国际输血协会（ISBT）将红细胞表面抗原分为23个血型系统、5个血型关联和2个血型系列。血型系统指由一个或数个基因所编码的数个相关联抗原的组成。目前，国际输血协会对红细胞血型系统的命名，有2种方法：一种是6位数字法，如001001为AB0血型系统的A抗原；另一种是字母加数字法，如RH1为Rh血型系统D抗原。1.AB0血型抗原（1）AB0抗原的遗传：AB0血型系统的产生及定位：由3个分离位点的基因所控制，即AB0、Hh、Sese基因。基因Hh和Sese紧密相连在第9对染色体上。现在一般接受“三复等位基因”学说：认为在决定AB0血型遗传的基因座上，有A、B、O三个等位基因。AB0遗传座位在第9号染色体的长臂3区4带。A和B基因对于0基因而言为显性基因，0基因为隐性基因。父母双方如各遗传给子代一个基因.则可组成6个基因型；O0、AA、A0、BB、BO、AB；4种表现型：A、B、O、AB。（2）AB0抗原的发生：5～6周胎儿红细胞已可测出ABH抗原。新生儿A、B抗原位点较成人少，一般在生后18个月时才能充分表现出抗原性，但抗原性也仅为成人的20%。此外,ABH抗原频率亦随种族而不同。（3）AB0分泌型：ABH抗原不仅存在于红细胞膜上，也可存在于白细胞、血小板及其他组织细胞上。ABH血型特异物质存在于唾液（含量最丰富）、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等体液中，但不存在于脑脊液。这些可溶性抗原又被称为“血型物质”。凡体液中有血型物质者为分泌型（可以中和或抑制抗体与具有相应抗原的红细胞发生凝集），无血型物质者为非分泌型。血型物质意义：①测定唾液血型物质，可辅助鉴定血型。②中和AB0血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体，鉴别抗体的性质。③检查羊水可预测胎儿AB0血型等。2.AB0系统抗体（1）天然抗体与免疫性抗体：天然抗体是在没有可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，又称完全抗体或盐水抗体；也可能是由一种无觉察的免疫刺激产生而得。免疫性抗体：有IgM、IgG、IgA，但主要是IgG。抗A和抗B可以是IgM与IgG，甚至是IgM、IgG、IgA的混合物，但主要是IgM，而0型血清中以IgG为主。（2）天然抗体和免疫抗体的主要区别；见表1-5-1。（3）抗A、B抗体：O型人血清中不仅有抗A、抗B抗体，还含有一种抗A、B抗体。它与A型或B型红细胞都能凝集，但当用A或B型红细胞分别吸收时，不能将其分为特异的抗A和抗B。它与两种红细胞反应第2页的活性不能通过特异吸收来分离。即使用A和B型红细胞反复吸收，它仍保持与A和B型红细胞都发生反应的活性。所以，不可能在抗A和抗B的混合液中找到抗A、B具有的血清学活性。这可能是O型血清中的抗A、B是一种直接针对A和B抗原的共同抗体结构。（二）AB0血型系统的亚型亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异。AB0血型系统中以A亚型最多见，A亚型主要有A1和A2，占全部A型血的99.9%，其他A亚型（A3、AX、AM）为数少；作AB0血型鉴定时，应加O型血清，以防对A亚型误定型。B亚型（B3、BM、BX）比A亚型少见，临床意义不大。1.A1、A2亚型基本特征A1亚型的红细胞上具有A1和A抗原，其血清中含有抗B抗体；A2亚型的红细胞上只有A抗原，其血清中除含抗B抗体外，还有少量抗A1抗体。在直接凝集反应中，A1、A2亚型两种红细胞的A1与A2抗原均能与抗A试剂发生凝集反应。但抗A1不仅存在于A2亚型，在B型和0型人的血清中除含抗A外还有抗A1，所以可以从B型人血清中获取抗A1试剂。2.A1、A2亚型的鉴定方法以抗A1试剂可区别Al、A2血清，方法是：①可从B型人血清获取抗A1试剂，B型血清有抗A、抗A1，其中抗A抗体能与A型红细胞的Al、A2抗原凝集，如吸收抗A，就只剩下抗A1。②鉴定A1、A2亚型，凡与抗A1试剂发生凝集反应者为A1，如果同时还与抗B凝集，则为A1B型；不与抗A1试剂凝集者，为A2或A2B型。3.A1、A2亚型鉴定的意义目的是防止误定血型。尽管我国A2、A2B型在A与AB型中所占比例少于1%，但定型时易将弱A亚型误定为O型，如果给其输入0型血，不会有太大问题，但是如果把弱A亚型误定为O型，并输给O型人，则受血者的抗A抗体就可能与输入的弱A亚型的红细胞起反应，引起血管内溶血性输血反应。因此，应避免将弱的A亚型定为0型，如：Ax型红细胞与B型血清（抗A抗体）不发生凝集，但与0型血清可发生程度不一的凝集，这可能是因为0型血中抗A效价比B型血抗A效价高，故现做AB0血型鉴定时，应加0型血清（内含抗A、抗B及抗AB），以防将Ax型误定为0型。（三）AB0血型鉴定1.原理常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见表1-5-2。2.鉴定方法（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用0型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。第3页（2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。3.抗A、抗B和抗AB标准血清标准准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。4.血型鉴定操作时注意事项一般注意事项：①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。⑥正、反定型结果一致才可发报告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。（四）交叉配血法最重要的是AB0血型配合。必须在AB0血型相同，且交叉配血无凝集时才能输血。1.目的：检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情况。2.原则：主侧加受血者血清与供血者红细胞；次侧加受血者红细胞与供血者血清，观察两者是否出现凝集。3.方法（1）盐水配血法：简便快速。主要缺点是只能检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。（2）抗球蛋白法配血法：又称Coombs试验。是最可靠的确定不完全抗体的方法，但操作繁琐。抗球蛋白法配血法是最早用于检查不完全抗体的方法。直接抗球蛋白法可检查受检者红细胞是否已被不完全抗体致敏；间接抗球蛋白法可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。本法虽较灵敏，但也有一定限度，且操作复杂，不利于急诊检查和血库的大批量工作。试剂：抗球蛋白试剂盒：包括抗广谱、抗C3、抗IgG3种试剂。阳性对照：IgG型抗D致敏5%RhD阳性红细胞生理盐水悬液。阴性对照：正常人5%红细胞生理盐水悬液。注意事项：①标本采集后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失。②抗人球蛋白血清应按说明书最适稀释度使用，否则可产生前带或后带现象而误为阴性结果。③阴性对照凝集：可能是抗人球蛋白血清处理不当，仍有残存的种属抗体，或被细菌污染，应更换血清重做试验。核实阴性结果方法：在该试管中加1滴IgG致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清未被消耗，阴性结果可靠。④阳性对照不凝集：可能是抗人球蛋白血清或用于致敏红细胞的不完全抗D血清失效，或红细胞未洗净带人球蛋白所致，应更换血清或洗净红细胞后重做。⑤如需了解体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。（3）聚凝胺法配血法：可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有规则与不规则抗体，故本法已逐渐推广使用。配血原理：聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季镀盐，溶解后第4页带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝集，低离子强度溶液也能减低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胶的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生凝集不会散开。如血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。（4）凝胶配血法：又称微管（板）凝胶抗球蛋白试验，此法在凝胶中进行，保持了传统抗球蛋白试验的准确、具有简便、可靠的特点，全自动血型分析仪进行交叉配血，也是利用凝胶配血。其他可检出不完全抗体的方法有蛋白酶法、胶体介质法等。卡式配血／血型鉴定检测法已成为国际安全输血检查的推荐方法。4.质量控制（1）血液标本：交叉配血的血液标本，受血者标本应为新鲜血，供血者标本应为血袋两端刚剪下小管中的血液。（2）选用方法：用试管法做交叉配血。（3）溶血现象：配血管出现溶血现象，为配血不合。（五）AB0血型鉴定及交叉配血中常见错误1.分型血清方面的原因（1）自制分型血清抗体：效价太低、亲和力不强，造成定型不准确。（2）患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症：如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症等，可产生缗线状假凝集。新生儿脐血中含有华顿胶或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱