热点实验AnnexinV凋亡流式双染与Tunel凋亡免疫组化案例介绍

原位末端凋亡法（Tunel）实验服务TUNEL实验技术简介：TUNE技术，即脱氧核苷酸末端转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase，TdT)介导的2dUTP缺口末端标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling，TUNEL)技术是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法，已广泛用于生物、医学研究领域。TdT-mediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法。细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNAfragmentation)，TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生，所以可以传达细胞凋亡的讯息。TdT为terminaldeoxynucleotidyltransferase，此种酵素可以在没有DNA模板的情形下，连结核甘酸到DNA的3'-OH处。1992年，以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素，自此衍生出TUNEL此项技术。TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期，即可侦测到DNA片段的产生，并且可以直接使用在组织切片上，观察细胞凋亡发生的位置。所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法。实验服务注意事项1.实验委托者提供实验分组情况及实验背景资料，有具体要求请事先说明；2.实验委托者可提供组织块（以中性福尔马林或多聚甲醛固定，如组织块极小请事先说明）、蜡块或切片（使用免疫组化专用切片，以避免实验过程中掉片）；3.TUNEL染色完毕后，照相1-2张/每切片，如需要图片分析请事先说明；4.TUNEL试剂盒的购买：事先咨询嘉美生物，明确是否有该抗体可使用，如无则由双方协商公司代购。标本收集、保存、运输1.组织标本：事先应以10%的福尔马林或4%的多聚甲醛固定（后者同时适合免疫荧光检测）；2.细胞检测：由实验室负责准备检测样本，实验委托者提供细胞或实验室负责提供细胞；3.样本运输：样本密封完毕，建议以塑料瓶装好标本寄送以免路途损坏；如寄送切片则选择纸盒包装完好，周围加以泡沫或纸巾填塞以免路途损坏，常温寄送即可。实验咨询：[e-mail]-FITC/PI细胞凋亡双染流式检测实验服务原理：在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将AnnexinV与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。案例介绍：抗肿瘤药物细胞干预培养以及细胞凋亡检测细胞：人肺癌A549细胞药物：a、b、c三种药物干预24h实验分组:A组：细胞中加入药物a，培养24h后，细胞凋亡AnnexinV/PI双染流式检测；B组：细胞加入药物b，培养24h后，细胞凋亡AnnexinV/PI双染流式检测；C组：细胞加入药物c，培养24h后，细胞凋亡AnnexinV/PI双染流式检测；D组：细胞正常培养，培养24h后，细胞凋亡AnnexinV/PI双染流式检测；实验结果:嘉美生物是一家主要从事AnnexinV,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司。相关文章芯片类检测：Luminex\PLEXMAP\BIOPLEX液相芯片检测实验服务细胞生物学实验：流式分选外包服务免疫学实验：流式CBA多因子检测外包实验分子生物学外包服务：个性化治疗分子检测外包服务热点实验服务：国家自然科学基金等基金的申请外包服务热点实验服务：大陆核心期刊三包服务（实验、撰写、发表）原代细胞培养服务：原代细胞分离培养鉴定以及检测等整体课题服务原代细胞培养服务：原代肝细胞定制服务