猪瘟检测与防治

重庆市高教自考本科毕业论文论文题目：猪瘟检测与防治准考证号：010514103755姓名：普传贵指导教师姓名彭洁职称讲师考生单位云南省农业职业技术学院邮编650220电话[phone]专业名称畜牧兽医论文提交日期2015年3月论文答辩日期2013年4月主考单位重庆西南大学二零一五年四月十日目录摘要................................................................................................................................................................31.病原学特征...............................................................................................................................................32．流行病学.................................................................................................................................................43.临床症状...................................................................................................................................................44.病理变化...................................................................................................................................................55.猪瘟实验室常规诊断技术....................................................................................................................65.1免疫荧光试验免疫荧光试验（FAT）.....................................................................................65.2酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（ELISA）..............................................................75.3常规反转录-聚合酶链反应聚合酶链反应（PCR）........................................................85.4实时荧光定量PCR技术...................................................................................................95.4核酸探针技术核酸探针技术..........................................................................................105.5基因芯片检测技术..........................................................................................................106.猪瘟的防治.............................................................................................................................................11参考文献.....................................................................................................................................................14猪瘟检测与防治普传贵摘要：猪瘟是威胁养猪业最严重的传染病，对于疫情严重的猪场，只有采取乳猪超前免疫，才能够控制猪瘟的流行。猪瘟是威胁养猪业最严重的传染病，对于疫情严重的猪场，只有采取乳猪超前免疫，才能够控制猪瘟的流行。关键词：猪瘟；诊断；防治；猪瘟又称“烂肠瘟”，是由黄病毒科瘟毒病属的猪瘟病毒(CSFV)引起猪的一种急性、发热、接触性传染病。国际兽医局将其列为A类16种法定传染病之一，猪是该病毒唯一的自然宿主。急性病例呈败血症的临诊症状，剖检可见内脏器官出血、坏死和梗死。慢性经过的病例，主要是纤维素性坏死性肠炎。常有副伤寒及巴氏杆菌病继发感染。1.病原学特征猪瘟病毒属黄病毒科、瘟病毒属。本病毒对外界环境的抵抗力较强，既能在冷冻条件下存活，也能在烟熏烤晒加工的肉品中存活；但不耐热，仅部分毒株可抵抗56℃温度。pH3.O或pH＞11.O可灭活；对乙醚、氯仿、β-丙烯内脂敏感；能被2％氢氧化钠、1％福尔马林、碳酸钠(4％无水或10％结晶碳酸钠+0．1％去污剂)、离子和无离子去污剂、含1％碘伏的磷酸灭活。2．流行病学（1）从发病区域上看，多为养猪密集的专业村，小型个体养殖场，疫源常常是外引猪所致，发病后，表现症状不明显，发现不及时或误诊，采取措施不当。（2）从发病时间看，全年发病最高峰是春季的3--4月份，其次是秋季的8--10月份。（3）从发病年龄看，春季以断奶猪20—60日龄多发。常常是引进猪未免或免后几天即开始发病，全群症状不一，死亡不高。秋季发病猪年龄不一，育肥猪也可发病，多为混合感染。（4）从发病群体看，发病率主要在个体养殖户和专业养殖村，疫源引进控制措施不当，综合防疫意识不强，使病毒得以扩散。其次为中、小型混合型养殖场，饲养密度大，隔离措施不到位。大型种猪场发病率较低，综合防治能力大型种猪场发病率较低，综合防治能力强，基本能控制猪瘟的发生。3.临床症状急性型：高热稽留(41～42℃)。食欲减退，偶尔呕吐。嗜睡、挤堆。呼吸困难，咳嗽。结膜发炎，两眼有脓性分泌物。全身皮肤黏膜广泛性充血、出血。皮肤发绀，尤以肢体末端(耳、尾、四肢及口鼻部)最显著。先短暂便秘，排球状带黏液(脓血或假膜碎片)粪块；后腹泻排灰黄色稀粪。大多在感染后5～15天死亡，小猪病死率可达100％。亚急性型：多年来一些地区散发一种所谓“无名高热”症，经研究证明多为猪瘟。因其潜伏期长，症状较轻不典型，病死率一般不超过50％，抗菌药物治疗无效，称为“温和型”猪瘟。病猪呈短暂发热(一般为40～41℃，少数达41℃以上)，无明显症状。母猪感染后长期带毒，受胎率低、流产、死产、木乃伊胎或畸形胎；所生仔猪先天感染，死亡或成为僵猪。慢性型：体温时高时低，呈弛张热型。便秘或下痢交替，以下痢为主。皮肤发疹、结痂，耳、尾和肢端等坏死。病程长，可持续1月以上，病死率低，但很难完全恢复。不死的猪，常成为僵猪。多见于流行中后期或猪瘟常发地区。4.病理变化急性型：白细胞及血小板减少。全身性出血、淤血，尤以(耳根、颈部、胸腹下、四肢内侧)皮肤、淋巴结、喉头、膀胱、肾、回盲处明显。脾不肿大，边缘有暗紫色稍突出表面的出血性梗死，为猪瘟特征性病变，但一般不常见，仅50％～70％病例出现梗死病变。常见全身淋巴结肿大、出血，切面周边出血显著，杂有贫血变化，呈红白相间的大理石状，多见于颌下、颈部和腹腔淋巴结。慢性型：主要为坏死性肠炎，一般在回盲瓣口、盲肠及结肠黏膜上形成同心轮状的纽扣状溃疡，突出于黏膜面，颜色黑褐,中央凹陷。通常无出血及炎性病变。全身性淋巴组织萎缩。仔猪常见胸腺萎缩，肋软骨连接处外生骨疣。5.猪瘟实验室常规诊断技术5.1免疫荧光试验免疫荧光试验（FAT）猪瘟荧光抗体染色技术是将提纯后的抗CSFV抗体IgG标记上荧光物质，制成猪瘟荧光抗体染色试剂。用该试剂去着染猪病料（如病猪扁桃体、淋巴结、肾等）的冰冻切片或触片，然后利用荧光显微镜观察组织细胞内是否有亮绿色荧光。如果被观察的组织细胞内有亮绿色荧光，就是猪瘟病毒荧光抗体染色阳性，说明被检病料中有CSFV感染。反之，被观察的组织细胞内没有亮绿色荧光，就是猪瘟病毒抗体染色阴性。利用荧光抗体技术检测病猪内脏器官可能存在的CSFV，对CSF的早期诊断具有十分重要的意义。猪瘟荧光抗体染色技术在CSFV感染早期检出率较高，不仅能检出强毒抗原，还能检出低毒力病毒感染的带毒母猪，猪瘟的常规诊断需要4～5d，而该项技术可在12h内作出判断，既快速又客观、准确，在规模化猪场临床上得到了广泛应用。所以目前许多规模化大猪场利用荧光抗体染色技术，有计划地对猪场进行猪瘟净化。Robertson等首次将FA运用于猪瘟病料和组织培养物的检测。张淑霞等从抗猪瘟高免血清中提取IgG，标记荧光素（FITC），制备出了猪瘟荧光抗体（CSFV-FA）。该抗体能够检测人工感染猪扁桃体中的病毒抗原，而且这种荧光反应能够被抗CSF高免血清特异性抑制。应用CSFV-FA可在病死猪的扁桃体、脾、肾、回肠末端等器官的触片或冰冻组织切片中发现病毒抗原，也可先将可疑病料经无菌处理后接种于细胞培养物，随后再用CSFV-FA检测出感染细胞中的猪瘟病毒抗原。FAT法简单、快速、可靠，许多国家将它作为执行猪瘟消灭计划的法定诊断试验。[1]5.2酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（ELISA）具有高度敏感性和特异性，而且它的试剂比较稳定，操作简单且无放射性危害，特别是商品试剂盒和自动化仪器的应用，使其成为一种适用于各级检验部门的免疫标记技术。随着检验医学的不断发展，酶联免疫测定的技术方法也得到发展和更新，Dot-ELISA、发光酶联免疫测定、免疫印迹法、BAS-酶联免疫吸附试验等方法都不断得到应用。周宗元等应用猪瘟兔化弱毒PEG沉淀抗原HRP-SPA建立了HRP-SPA-ELISA检测CSFV抗体的方法，通过对5份阴性血清和32头仔猪注射疫苗前后不同时期的256份血清进行检测，证明本法有较高的敏感性和特异性。余兴龙等以在大肠杆菌中高效表达的CSFV的E2基因产物为抗原，以HRP标记的的兔抗猪IgG为二抗，建立了检测CSFV抗体的间接ELISA方法，结果表明用E2基因产物蛋白作为诊断猪瘟的抗原，具有特异性高、易纯化和成本低等特点。陆芹章等（2004）制备了猪瘟单克隆抗体，以ACI-ELISA法检测CSFV，并用PCR方法作比较，结果表明30份猪瘟阴、阳性病料的ACI-ELISA试验结果与PCR检测结果相符本方法与动物接种、免疫荧光、血清中和等CSF常规诊断方法比较，更加快速、准确、经济，且一次可检测大量样品，同时比PCR方法耗时短、费用低，便于推广。陈振海（2005）等以CSFVGST-Erns融合蛋白作抗原进行间接ELISA，结果表明用该方法检测CSFV抗体具有很高的特异性和敏感性。目前，已有很多采用基于中和性单抗的竞争ELISA方法来检测某些病原中和抗体的报道，说明利用CSFV中和性单抗作为竞争抗体检测CSFV中和抗体是可行的。梁冰冰等利用杆状病毒表达猪瘟病毒（CSFV），以重组E2蛋白作为包被抗原，辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体，建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA（CI-ELISA）方法，该法操作简便、快速，适于现场应用，同时具有一般ELISA的操作