猪肉中瘦肉精的检测GC-MS法

猪肉中瘦肉精—克伦特罗的检测制作人：班级：食品1001班学号：201035090114目录一、背景事件二、概述1、瘦肉精2、克伦特罗三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗1、检测方法选择2、实验具体方案3、实验结果及分析四、杜绝措施五、参考文献2011年3•15特别行动中，央视曝光了双汇“瘦肉精”养猪一事。河南省孟州市等地养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精”饲养生猪，有毒猪肉流入双汇食品中。一、“双汇”瘦肉精事件瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。但因为考虑对人体会产生副作用，各国开放使用的标准不一。二、概述1、瘦肉精肉质对比2.1在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗。其学名是盐酸克伦特罗，是一种平喘药。•结构简式：•CAS号：37148-27-9•分子式：C12-H18-Cl2-N2-O•理化特性：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。2、克伦特罗2.2人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等。国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1纳克。2.2人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等。国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1纳克。三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗1、检测方法选择GC-MS法优点：把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，常用作筛选后阳性样品的确证。2.1分析方法用C18小柱和聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）整体柱进一步富集净化，经N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，选择离子监测方式进行气相色谱质谱测定。该方法以克伦特罗同位素(Clenbuterol-D9)为内标，内标法定量。C18小柱2、实验具体方案2.2仪器与试剂仪器：岛津GCMS-QP2010Plus高速离心机（转速可达到12000r/min以上）漩涡混合器超声波清洗器氮吹仪固相萃取装置C18固相萃取小柱（100mg,3mL）混合型阳离子交换固相萃取柱试剂：•盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准溶液1μg/mL•内标溶液（Clenbuterol-D9，CLB-D9）1μg/mL•N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）•甲醇(分析纯）•20mmol/L磷酸溶液•甲苯（分析纯）2.3分析条件•色谱柱：Rtx-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)•进样口温度：220℃•柱温程序：70℃(0.6min)-25℃/min-220℃(6min)-25℃/min-280℃(5min)•恒线速度方式,柱流量0.9mL/min•不分流进样•检测波长：244nm•检测离子：CLB：检测m/z86,187,243,262，CLB-D9：检测m/z95,187,262以克伦特罗(m/z86)与内标峰(m/z95)的峰面积比校准定量。2.4实验流程称取(2±0.01)g己绞碎的猪肉4mL0.1mol/L盐酸旋涡振荡5min超声10min离心5min上清液C18小柱0.8mL甲醇：20mmol/L磷酸=1：1(v/v）解析，调ph=7，定容2mL毛细管整体柱0.2mL的甲醇解析+50μL的内标使用液100μL甲苯100μLBSTFA涡旋30s衍生5min300μL甲苯混匀按操作规程使GC-MS仪到工作状态，基线平直时进样质谱图3.1盐酸克伦特罗的GC-MS测定图1为衍生化克伦特罗和内标的质谱图，以克伦特罗碎片离子(m/z86)与内标碎片离子(m/z95)的浓度比值为横坐标，峰面积比值为纵坐标进行定量。3、实验结果及分析3.2标准曲线图2为空白猪肉和添加2.5μg/kg克伦特罗的猪肉样品提取液的离子流图，内标(Peak1)和克伦特罗(Peak2)的保留时间分别为9.83min和9.92min,空白猪肉样品在被测物及内标处均无干扰相关性分析分别添加不同体积的克伦特罗标准溶液(1μg/mL)和50μL内标溶液于2g猪肉样品中(其中克伦特罗的质量分别为1、5、10、20、40和100ng)，样品的处理方法如上所述。以克伦特罗与内标的峰面积的比值对浓度比值进行线性回归，发现克伦特罗在0.5-50μg/kg的浓度范围内，线性关系良好，相关系数大于0.999。3.3检测限及精密度以信噪比的3倍和10倍分别计算检测限和定量限，方法检测限为0.13μg/kg,定量限为0.43μg/kg。该方法有较好的日内及日间精密度，在定量限附近，相对标准偏差小于20%（见表1），可满足分析要求。表1.克伦特罗的方法学数据•相关部门要对瘦肉精的流通进行严加监管，实行购买登记制度。•养牲畜者自律，监管人严格监督。•对责任人加大处罚力度，完善法律法规实。四、杜绝措施[1]气相色谱质谱联用仪(GC-MS)测定猪肉中的瘦肉精的含量.食品与发酵工业．2011年03期．[2]DengRuiguang，ZhangHaitang，WangZiliang，ZhongHua，ZhangGaiping．DevelopmentofGC-MSMethodforDetectingClenbuterolResiduesandConfirmationofSelf-madeStripPerformance．CHINESEAGRICULTURALSCIENCEBULLETIN.2008,24(11)[3]应永飞,皮雄娥,吴平谷等.气相色谱-质谱法同时测定动物尿样中莱克多巴胺和克伦特罗.质谱学报.2006,27(2):74-78.五、参考文献谢谢！