硫酸氢氯吡格雷肠溶片的研究

第一部分立项依据一知识产权通用名商品名英文名剂型规格价格用量生产商批准文号硫酸氢氯吡格雷片波立维ClopidogrelHydyogenSulfateTablets片剂75mg/片*7152元1片/天杭州赛诺菲安万特民生制药有限公司(法国授权)国药准字H20056410硫酸氢氯吡格雷片泰嘉ClopidogrelBisulfateTablets片剂25mg/片*10132元2片/天深圳信立泰药业有限公司国药准字J20080090二销售情况：硫酸氯吡格雷是Sanofi-Avetnis公司开发的新型噻吩吡啶类药物，属抗血小板药物1998年6月在美国首次上市。2007年，Sanofi-Avetnis公司的Plavix（“波立维”），全球销售额达73亿美元，列单产品销售额第1位。硫酸氯吡格雷2001年进入我国，目前在国内抗血栓畅销药物中，硫酸氢氯吡格雷的市场份额增长迅速，2005年的市场份额达到了24.49％，排名由2001年的第七位上升至2004年的第一位，目前成为我国抗凝血类药物中市场份额最大的一个产品。2007年按进口额推算，硫酸氯吡格雷的市场总额约为8.66亿元。第二部分硫酸氯吡格雷肠溶片的制剂学研究一所选剂型：肠溶片理由：⑴硫酸氯吡格雷肠溶片是在硫酸氯吡格雷外面包上一层包衣（肠溶衣）使它到达肠道后肠溶衣被破坏，药物再溶解被吸收。由于肠液是碱性的可以中和酸，从而可以避免对胃的损伤。并且酸性药物在碱性环境更易被吸收。⑵有片剂的一般优点：剂量准确，质量稳定，便于识别，服用、携带和运输方便。二处方设计与制备1处方片芯处方：氯吡格雷75g主药淀粉96g稀释剂L-HPC12g崩解剂10%淀粉浆适量粘合剂滑石粉适量润滑剂包衣液处方：丙烯酸树脂Ⅱ号30g肠溶衣材料蓖麻油6g增塑剂滑石粉适量润滑剂95%乙醇加至600ml溶剂共制1000片2制备方法素片制备：将氯吡格雷与淀粉混匀，加适量淀粉浆和L-HPC制成软材，用16目筛制粒，置80℃干燥，然后用14目筛整粒，加入滑石粉混匀后，压片，得素片；片剂包衣：按处方量配置好包衣液后，将片蕊放入包衣锅中，设置仪器参数，使包衣液均匀的喷散到片芯的表面，控制包衣锅的转速进行包衣，待一定时间后将包好衣的片剂取出即得。三制备工艺研究工艺流程:湿法制粒压素片(片芯)→喷包衣液→缓慢干燥→固化→缓慢干燥→肠溶包衣片四包装材料的选择铝塑泡罩装，此包装采用聚偏二氯乙烯(PVDC)或其复合材料制成，对湿气、光线透过率的阻隔性能好。五质量研究和稳定性研究质量研究：性状：本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。硬度：用孟山都硬度计测定，一片能承受40N的压力为合格。脆碎度：用罗氏脆碎仪测，脆碎度＜1%为合格。溶出度：限度为标示量的75％。释放度:限度为标示量的75％。含量：规格为75mg/片。稳定性研究1对试制样品进行光照、高温、高湿等影响因素实验，结果表明：经光照、高温（60℃）10天后，样品外观变化明显，有关物质增加，含量下降，表明强光照射、高温对本品稳定性有影响。高湿条件下，样品的外观变化明显，水分增加，有关物质略有增加，含量略有下降，表明高湿对本品的稳定性和质量略有影响。故本品应遮光，密封，在阴凉干燥处保存。2三批样品在模拟上市包装下加速试验6个月（40℃、相对湿度75%条件下），样品外观发生变化，有关物质略有增加，含量略有下降，表明样品已部分降解，故本品在密封条件下对湿热较敏感，但皆符合质量标准草案。样品在12个月时有关物质已接近质量标准（草案）上限，含量接近质量标准（草案）下限。第三部分硫酸氯吡格雷肠溶片的质量标准一名称通用名：硫酸氯吡格雷肠溶片拼音名：LiusuanLubigeleiChang-rongPian英文名：ClopidogrelBisulfateEnteric-coatedTablets二性状本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。三鉴别取本品，除去包衣后，研细，照以下方法试验。(1)取本品的细粉适量(约相当于氯吡格雷50mg)，加水2ml，振摇溶解，取上清液1～2滴，置盛有硫酸甲醛溶液(取37％～40％甲醛溶液1滴加到硫酸1ml中，摇匀)1ml中，表面即显紫红色。(2)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰应与对照品主峰的保留时间一致（中国药典2010年版二部附录ⅣC）。四检查1重量差异取本品，除去包衣，照以下方法检查取20片，精密称定每片的片重，求得平均片重，然后以每片片重与平均片重比较，按《中国药典2010年版》规定，20片中超出重量差异限度的药片不得多于2片，并不得有1片超出限度的1倍。包衣后的重量差异检查同上。2溶出度取本品2片，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第三法)，以盐酸溶液(0.9→1000)150ml为溶剂，转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液20ml，滤过。照分光光度法(中国药典2010年版二部附录ⅣA)，在270nm的波长处测定吸收度；另精密称取硫酸氯吡格雷对照品适量，用上述溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，同法测定吸收度，测定结果与0.7664相乘，计算出每片的溶出量。限度为标示量的75％，应符合规定。3释放度取本品1片，照释放度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩD),采用溶出度测定法第一法装置，以0.1mol/L盐酸溶液750ml为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经120分钟时，取溶液10ml滤过，作为供试品溶液(1)。然后加入37℃的0.2mol/L磷酸钠溶液250ml，混匀，用2mol/L盐酸溶液或2mol/L氢氧化钠溶液调节溶液的pH值为6.8±0.05，继续溶出45分钟，取溶液10ml滤过，作为供试品溶液(2)。取供试品溶液(1)，以0.1mol/L盐酸溶液为空白，在280nm波长处测定吸收度，吸收值不得大于0.25。另取阿司匹林对照品21mg，置100ml量瓶中，加磷酸钠缓冲液(0.05mol/L)（量取0.2mol/L磷酸钠溶液250ml与0.1mol/L盐酸溶液750ml，混合，pH值为6.8±0.05）适量使溶解，并稀释至刻度，作为对照品溶液。取供试品溶液(2)和对照品溶液，以磷酸钠缓冲液（0.05mol/L）为空白，在270nm波长处测定吸收度，计算出每片的释放量。限度为标示量的75％，应符合规定。其他应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版二部附录ⅠA)。五含量测定照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-三乙胺(680:320:2)[用磷酸溶液(1→5)调节pH值至3.8]为流动相；检测波长为270nm。理论板数按硫酸氢氯吡格雷峰计算应不低于5000，硫酸氢氯吡格雷峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。测定法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于氯吡格雷20mg)，置50ml量瓶中，加流动相适量使硫酸氢氯吡格雷溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硫酸氢氯吡格雷对照品适量(约相当于氯吡格雷20mg)，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。六含量限度本品含硫酸氯吡格雷按氯吡格雷(C16H16ClNO2S)计算，应为标示量的90.0％～110.0％。七其他类别：预防和治疗因血小板高聚集状态引起的心、脑及其它动脉的循环障碍疾病。规格：75mg(以C16H16ClNO2S计)贮藏：遮光，密封，在阴凉干燥处保存。包装:铝塑泡罩装，10片/板/盒。有效期：暂定一年。第四部分硫酸氯吡格雷肠溶片的临床前药理学研究一主要药效学研究药物、试剂：硫酸氯吡格雷(简称氯吡格雷，批号为20101110，含量98.63%)。临用前以蒸馏水配制成0.06,0.2,0.6,2,6mg/ml供大鼠灌胃用;盐酸噻氯匹定(简称塞氯匹定,SIGMA公司,批号6665A,含量99%),临用前以蒸馏水配制6mg/ml的药液供大鼠灌胃用;ADP、花生四烯酸(SIGMA公司);胶原:称取大鼠腹部去毛皮肤1g,加入10ml生理盐水,于冰水浴中研磨,3000r/min离心10min后取上清液,此上清液再以8000r/min离心10min,第2次离心得的上清液制得100mg/ml母液备用。动物：Wistar大鼠（天津药物研究院实验动物室提供）（该品种大鼠性格温顺，抗病力强，给药容易，采样量合适方便）。1抗血栓形成作用方法:雄性Wistar大鼠，体重(287±32)g，按体重随机分为5组，每组10只。分别灌服蒸馏水(对照组)氯吡格雷1，3，10mg/(kg·d)，噻氯匹定30mg/(kg·d)×3d，给药体积均为0.5ml/100g，于末次给药后2h，以20%乌拉坦1g/kg腹腔麻醉，仰卧位固定，分离颈总动脉，并将BT87-2型实验性体内血栓形成仪的刺激电极和温度探头钩上，刺激时间4min，刺激强度2mA，记录动脉血栓形成的时间。结果：大鼠灌服氯吡格雷1,3,10mg/(kg·d)后,与对照组比较动脉血栓形成时间分别推迟26%,29%,67%,呈一定的量效关系,表明氯吡格雷能明显延长大鼠实验性动脉血栓形成时间。阳性药物噻氯匹定抗血栓形成作用亦较明显。氯吡格雷10mg/(kg·d)对血栓形成时间的影响与噻氯匹定30mg/(kg·d)×3的用相当(P0.05),而前者的剂量明显比后者低,说明氯吡格雷的抗栓效力比噻氯匹定强。2抗血小板聚集作用方法：取上述体内血栓形成后的大鼠，腹主动脉取血,3.8％枸橼酸钠与全血按1：9混合，1000r／m离心7min制备富血小板血浆(PRP)3000r／m离心10min制备贫血小板血浆(PPP),应用SPA-3型PPP自动平衡血小板聚集仪，将各诱导剂诱导的血小板聚集百分数佩至60％～70％。诱导剂ADP、花生四烯酸,胶原终浓度分别为4μmol/L，2mmol／L，20mg／ml。结果：大鼠灌服氯吡格雷1，3，10mg/kg后，对ADP诱导的血小板聚集抑制百分率分别为41%，55%，60%；对花生四烯酸诱导的血小板聚集抑制百分率分别为38%，55%，54%；对胶原诱导的血小板聚集抑制百分率分别为42%，43%，49%。表明氯吡格雷能明显抑制ADP、花生四烯酸及胶原诱导的血小板聚集。阳性药物噻氯匹定对ADP、花生四烯酸及胶原诱导的血小板集聚抑制作用亦较明显，但其作用没有氯吡格雷强。3抗实验性静脉血栓形成作用方法：健康雄性Wiｓtar大鼠50只，体重(303±37)g，按体重随机分为5组，每组10只，分别灌服蒸馏水，氯吡格雷0.3,1,3mg/kg，噻氯匹定30mg／(kg·d)×3d，给药体积均为0.5ml/100g于末次给药后2h戊巴比妥钠40mg／kg腹腔麻醉，仰卧位固定，打开腹腔，分离下腔静脉，结扎左肾静脉分支下方下腔静脉，并同时结扎两侧腰髂静脉及精索静脉，随后缝台腹壁。3h后，再次打开腹腔．在下腔静脉结扎处下方1.5cm处穿线结扎，取下该段血管，纵向切开．取出血栓，于室温下放置24h后，称取血栓干重。结果：大鼠灌服给予氯吡格雷0.3，1，3mg/kg后，产生剂量相关的抗静脉血栓作用，与对照组比较抑制血栓形成百分数分别为58%，64%，79%。表明氯吡格雷对大鼠静脉血栓的形成具有明显的抑制作用。阳性药物噻氯匹定抗静脉血栓作用亦明显，但不如氯吡格雷强。二一般药理学研究1神经系统动物：健康Wistar大鼠合格证号：SCXK2009-2010（该类大鼠性格温顺，抗病力强，给药容易，采样量合适方便）。方法：健康Wistar大鼠40只，雌雄各半。分为4组，每组10只，各组雌雄各半。分别灌服蒸馏水，氯吡格雷0.3，1，3mg/kg，给药体积均为0.5ml/100g。使用开阔法装置对大鼠的行为进行观测：（1）3分钟内大鼠行走的格数。一只大鼠四肢走到同一格才算移动了一格。这种行为表示探究行为；（2）站立次数，也表示探究行为；（3）排便次数，表示恐惧情绪。结果：灌服氯吡格雷的三组大鼠的行走格数、站立次数和排便次数