第09章生物碱类药物的分析

二、生物碱类药物的通性1.碱性季铵碱＞脂肪胺、脂环胺＞芳胺、N-芳杂环＞酰胺小檗碱＞麻黄碱、阿托品＞罂粟碱＞咖啡因吗啡具酸碱两性2.溶解性游离生物碱不溶或难溶于水，能溶或易溶于有机溶剂，在稀酸中成盐而溶解生物碱盐类易溶于水，不溶于有机溶剂3.旋光性一般多为左旋体有效。第二节鉴别试验一、特征鉴别反应（一）双缩脲反应侧链具有氨基醇结构水层兰色醚层紫红色乙醚紫堇色OH-CuSO4+盐酸麻黄碱盐酸伪麻黄碱（二）Vitali反应托烷生物碱硫酸阿托品+发烟HNO3·黄色醇制KOH深紫色氢溴酸山莨菪碱（三）绿奎宁反应硫酸奎宁、硫酸奎尼丁紫堇色盐酸吗啡+甲醛硫酸（四）Marquis反应吗啡生物碱棕绿色兰色紫色盐酸吗啡+钼硫酸（五）Frohde反应吗啡生物碱（六）官能团反应吲哚生物碱1.利血平+新制香草醛→玫瑰红色红色绿色二甲氨基苯甲醛对利血平冰醋酸冰醋酸、硫酸2.（七）紫脲酸胺反应黄嘌啉类生物碱KClO3+HCl紫色消失KOH氨气蒸干紫色+咖啡因茶碱（八）还原反应吗啡与磷酸可待因的区分反应普鲁士兰Fe3+K2[Fe(CN)6]吗啡+K3[Fe(CN)6]二、一般鉴别反应（一）熔点测定法（二）沉淀反应↓H+生物碱+生物碱沉淀试剂常用的生物碱沉淀试剂为：1.重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、I2—KI、二氯化汞等；2.大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。（三）显色反应常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、钒硫酸、硒硫酸、甲醛硫酸等（四）UV（五）IR（六）色谱法1.HPLC2.TLC硅胶为吸附剂：游离生物碱能顺利迁移，生物碱盐类吸附太牢，造成严重拖尾。解决方法：（1）在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、二乙胺、有机脂烃胺类；（2）硅胶板用碱处理第三节特殊杂质检查•特殊杂质检查主要根据药物与杂质的理化性质差异来进行。利用药物和杂质在颜色、溶解行为、旋光性质、对光吸收选择性等物理性质上的差异，检查杂质是否符合限量规定一、物理法（一）溶解行为的差异利用药物与杂质在溶解性方面的差异进行检查。如硫酸奎宁中无机盐的检查；吗啡中其他生物碱的检查。（二）旋光性质的差异如硫酸阿托品中“莨菪碱”的检查。（三）对光吸收性质的差异如利血平中氟化产物的检查，利血平供试品置于365nm紫外光灯下检查，不得显明显荧光。（四）吸附或分配性质的差异如硫酸奎宁中“其他金鸡纳碱”的检查，利用其吸附性质的差异。二、化学法利用药物与杂质在化学性质上的差异进行检查。如生成沉淀或显色反应。一、非水溶液滴定法（非水碱量法）原料药（一）原理水溶液中滴定突跃不明显，在非水介质中，碱性增强，使滴定顺利进行第四节含量测定1.溶剂：冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐2.滴定剂：高氯酸的冰醋酸溶液或高氯酸的二氧六环溶液有机碱及其盐类及有机酸碱金属盐类8＜pKb＜10冰醋酸作溶剂10＜pKb＜12冰醋酸+醋酐pKb＞12醋酐（二）适用范围3.指示终点的方法电位法：玻璃—甘汞电极系统指示剂法：结晶紫、喹哪啶红等4.HClO4溶液稳定性011010.0011()CCtt一般采用半微量法。Chp（2000）测定方法为：取供试品适量〔约消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8ml〕，加冰醋酸10～30ml使溶解。若供试品为氢卤酸盐，应再加5％醋酸汞的冰醋酸溶液3～5m1，加各药品项下规定的指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。（三）一般测定方法（四）生物碱盐类的滴定HAClOBHHClOABH44置换滴定：无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：高氯酸＞氢溴酸＞盐酸＞硫酸＞HSO4-＞硝酸＞其它弱酸（磷酸、有机酸）由于有机酸系弱酸，被高氯酸置换出的HA，对滴定无干扰，能准确滴定。1.有机酸盐的测定一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰。22HgXAc2BHHg(Ac)X2BH理论量1～3倍2.氢卤酸盐的测定生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。···2---+BH+ClO4BH+HSO4+(BH+)2SO4HClO4（1）直接滴定3.硫酸盐的测定注意硫酸盐的结构，正确判断反应的摩尔比。A.硫酸阿托品HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶1H2OH2SO42NCH3OCOCHCH2OHB.硫酸奎宁HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶3NCH3OCOHHNCHCH2H2H2SO4H2ONCH(OH)NCH3OCHCH2HNCH(OH)NCH3OCHCH2H++SO42-.NCH(OH)NCH3OCHCH2HH+.ClO4.HSO4+--NCH(OH)NCH3OCHCH2HH+.ClO4+--.ClO4滴定反应如下：+3HClO4+用HClO4直接滴定硫酸喹宁时，摩尔比是1∶3（2）加入高氯酸钡消除硫酸的干扰后滴定硫酸奎宁反应摩尔比为1∶2硫酸阿托品不能滴定因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位法指示终点。如硝酸士的宁4.硝酸盐的测定按常法测定，如磷酸氯喹、磷酸可待因5.磷酸盐的测定简便、快速、准确、精密、取样量小，测定的是生理活性部分。如有酸性或碱性成分存在时会影响，选择性差，不能直接用于制剂分析，只能用于原料药测定。（五）特点（六）片剂分析片剂中许多赋形剂如硬脂酸盐、苯甲酸盐、羧甲基纤维素钠等都消耗高氯酸，因此片剂的测定一般需提取分离并经干燥后才可进行。如硫酸奎宁片碱化、有机溶剂提取后，供试品成为游离碱，如1mol硫酸奎宁→2mol奎宁→消耗4molHClO4，所以用HClO4滴定时，反应摩尔比为1∶4即片剂滴定度不同于原料药。二、提取中和法（提取酸碱滴定法、提取容量法）（一）原理与方法生物碱盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂游离生物碱不溶于水，易溶于有机溶剂依据性质中和法测定有机层（B）水层有机溶剂OH-sol过滤sol(BH+)稀酸或H2O游离生物碱或生物碱盐类1.碱化2.有机溶剂提取3.中和法测定（1）直接滴定法用于碱性较强的生物碱终点酸滴定液滴定）（中性乙醇）残渣（，蒸干）有机层（BsolBB（2）剩余滴定法用于碱性较弱的生物碱BBsolBHH，蒸干定量过量的酸标准溶液碱滴定液滴定有机层（）残渣（）（）终点（3）酸滴定液返提后剩余滴定法用于对热不稳定的生物碱终点碱滴定液滴定水层）水层（有机层（弃去）定量过量的酸滴定液）有机层（HBHB1.碱化试剂最常用氨水2.提取溶剂（1）提取溶剂选择的原则（2）常用的提取溶剂最常用氯仿（二）测定条件的选择（3）提取溶剂的用量及提取次数通常应提取4次，第一次用量至少应为水液体积的一半，以后几次应各为第一次的一半3.提取终点的确定用合适的沉淀反应确定4.指示剂的选择（一）基本原理在适当的pH介质中有机相·(BH+In-)水相·(BH+In-)+HInH+In-+BH+BH+三、酸性染料比色法制剂步骤：水相中反应→有机溶剂提取→比色法测定1.水相的最适pH值如果水相pH值过小，酸性染料几乎仍以分子状态存在；如果水相pH值过大，则生物碱几乎全部以游离碱的形式存在2.有机溶剂的选择CHCl3、CH2Cl2（二）影响定量分析的因素3.酸性染料的选择常用溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝（BTB）等4.水分的影响严防水分的混入有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干燥滤纸滤过5.有色杂质的排除五、色谱法（一）高效液相色谱法1．反相HPLC分析生物碱类和有机含氮药物的特点色谱峰拖尾，保留时间过长，甚至长期地保留在色谱柱上。2．解决方法（1）加扫尾剂法最常用的扫尾剂是三乙胺（2）用硅胶作固定相法（3）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法四、紫外—可见分光光度法大多数生物碱分子结构中含有生色团，可在紫外区产生吸收。97：83．咖啡因和茶碱的特征鉴别反应是()A.双缩脲反应B.Vitali反应C.Marquis反应D.紫脲酸铵反应E.绿奎宁反应96：136．用非水溶液滴定法测定盐酸吗啡含量时，应使用的试剂是()A.5％醋酸汞冰醋酸液B.盐酸C.冰醋酸D.二甲基甲酰胺E.高氯酸99：78.非水溶液滴定法测定硫酸奎宁原料的含量时，可以用高氯酸直接滴定冰醋酸介质中的供试品，1摩尔硫酸奎宁需要消耗高氯酸的摩尔数为()A.1B.2C.3D.4E.597：130.非水溶液滴定法测定硫酸奎宁含量的反应条件为()A．冰醋酸一醋酐为溶剂B.高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定C．1mol的高氯酸与⅓mol的硫酸奎宁反应D.仅用电位法指示终点E．溴酚蓝为指示剂96：77.酸件染料比色法中，水相的pH值过小，则()A.能形成离子对B.有机溶剂提取能完全C.酸性染料以阴离子状态存在D.生物碱几乎全部以分子状态存在E.酸性染料以分子状态存在99x：[116—120]滴定反应中A.被测物与HClO4的摩尔比为1∶1B.被测物与HClO4的摩尔比为1∶3C.均不是99x：116．硫酸奎宁片经碱化、氯仿提取后用HClO4滴定()99x：117．硫酸阿托品在冰醋酸中用HClO4滴定()99x：118.硫酸奎宁原料药用HClO4滴定()99x：119.磷酸可待因用HClO4滴定（）99x：120.硝酸士的宁用HClO4滴定（）95:87.酸性染料比色法测定生物碱类药物，有机溶剂萃取测定的有色物是()A.离子对和指示剂的混合物B.生物碱盐C.指示剂D.离子对E.游离生物碱95：[111—114]可选择的药物：A.阿托品B.吗啡C.两者均可D.两者均不可95：111.具有酯结构（）95：112.为两性化合物（）95：113.显较强碱性（）95：114.用提取容量法测定（）例.用非水溶液滴定法测定二盐酸奎宁时，二盐酸奎宁和HClO4的摩尔比是()A.1∶1B.1∶2C.1∶3D.1∶4E.1∶1.5例.检查硫酸阿托品中莨菪碱时，应采用()A.色谱法B.红外分光法C.旋光度法D.显色法E.直接检查法例.能够发生Vitali反应的药物是()A.盐酸吗啡B.硫酸奎宁C.磷酸可待因D.盐酸麻黄碱E.硫酸阿托品例[1～5]A.双缩脲反应B.Marquis反应C.两者皆是D.两者皆不是1.盐酸麻黄碱（）2.某些生物碱类药物（）3.盐酸吗啡（）4.咖啡因（）5.硫酸奎尼丁（）