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游离雌三醇(uE3)测定操作程序1、目的:规范样本的检测过程,以保证样本检测的准确性。2、适用范围:适用于孕中期(15~20+6周)母血清中游离雌三醇(uE3)的测定。本试剂盒可用于下列组合情况之一:hAFP+游离hCG+uE3hAFP/游离hCGβ+uE3完整hCG+uE33、方法和原理:方法:时间分辨荧光法原理:DELFIA®游离雌三醇(uE3)测试是一种固相、时间分辨的荧光免疫测定法,它基于铕标记雌三醇和血清样本中雌三醇竞争结合雌三醇多克隆抗体上(兔源)有限的结合位点。直接针对兔IgG的第二个抗体包被于固相上,使抗体结合抗原和游离抗原易于分离。增强液将铕离子从铕标记抗原上洗脱到溶剂中,它们与增强液中的成分形成强荧光螯合物。随后对每个微孔的荧光强度进行测量。每个样本中的荧光强度与样本中游离雌三醇的浓度成反比。4、使用仪器:a.可调移液器b.1420时间分辨荧光测定仪;c.LifeCycle4.0产前筛查风险评估软件;d.微孔板洗板机-DELFIAPlatewash;e.自动振荡器-DELFIAPlateshake;f.电脑和打印机。5、操作程序:5.1标本准备:5.1.1取出冰箱暂存的标本,平衡室温解冻(四小时内采集的标本3000转每分钟离心分离血清装入EP离心管内保存并编号),准确核对标本资料。5.1.2编号原则:采用唯一识别码,每检测批次按年(后两位数)-月-日-001格式进行编号。如2013年1月1日检测的标本编号为:130101001开始;2013年12月12日检测的标本编号为:131212001开始。5.2试剂及微滴定板准备:5.2.1所有试剂临用前取出恢复到室温方可使用。5.2.2浓缩清洗液用去离子水稀释25倍,即40ml浓缩清洗液加960ml去离子水稀释,摇匀备用。5.2.3铕示踪剂贮存液的制备:在每一个瓶中精确地加入0.75ml去离子水,静置至少30分钟,使用前轻轻混匀。5.2.4标准品的稀释:向标准品中精确加入1.1ml的去离子水,轻轻混匀。在使用前至少放置30min。5.2.5兔抗雌三醇多克隆抗体的制备(使用前1小时内准备):按45μl兔抗雌三醇多克隆抗体贮存液与1.5mluE3测试缓冲液混合的比例制备每个板条所需的兔抗雌三醇多克隆抗体稀释液。5.2.6雌三醇-铕示踪剂的制备(使用前1小时内准备):按15μl示踪剂贮存液与1.5mluE3测试缓冲液混合的比例制备每个板条所需的示踪剂稀释液。5.2.7将所需数目的微滴定板条移到板条框内。5.3加样:5.3.1在每个板孔中加100μL稀释的兔抗雌三醇多克隆抗体溶液,不要用第一滴;5.3.2在室温下孵化微孔板架15分钟(+5分钟)并用DELFIAPlateshake混合器低速振荡;5.3.3在板孔中加入50μLE3标准品(Std)或病人血清样本(未知品-Unk);5.3.4在每个板孔中加入100μL稀释后的E3-铕示踪剂溶液;5.3.5在温室下孵化微孔板架1小时(最长1小时10分钟)并在DELFIAPlateshake混合器上低速振荡。5.4洗版:完成孵育后,使用DELFIAPlatewash的83(wash)洗板程序清洗每一个板条。5.5增强:用微量移液器直接从试剂瓶中吸取200μl的增强液加在微孔板的每个微孔中,避免接触板孔的边缘和孔中的液体。DELFIAPlateshake混合器慢速振荡5分钟。5.6读数:确保板条在板条架上固定牢固并使用荧光免疫分析仪进行测量。选择“83PRENUE3”MultiCalc程序进行测量和自动计算结果。5.7风险评估:使用Wallac的LifeCycleTM软件计算(软件的使用程序见第四节)。5.8切割值的设定:21-三体高危1/270;18三体高危1:350;NTD高危AFPMOM值≥2.5。6、注意事项:6.1每次实验都应运行标准曲线;6.2本试剂盒仅适用于体外诊断,试剂盒内的试剂作为一个整体使用,不要将不同批号的试剂混用,不要用过期试剂;6.3在开始准备标本前试剂应该恢复到室温,冷冻保存的标本缓慢恢复到室温,加样前轻轻摇匀,不要剧烈振荡。7、临床意义:唐氏综合症是常见的染色体病之一,在新生儿中的患病率为1/600~1/800,其主要表现为智力障碍,同时多伴有严重的心脏病及多发畸形。给社会和家庭带来沉重的负担。目前对本病尚无有效的治疗方法,故安全有效的筛查和诊断,市减少患儿出生的有效途径,本试剂盒假阳性率在5%的前提下对唐氏儿检出率为65%~85%。
本文标题:游离雌三醇
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