疟疾镜检的实验室技术

疟疾镜检的实验室技术浙江cdc寄防所2010年6月血片的清洁新的载玻片必须洗洁净后才可直接浸于95%的酒精中，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花毛的细布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰尘沾污。用过的载玻片可用5％之煮沸肥皂水洗涤，将玻片一张一张的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或纱布细心拭擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干，然后浸于95％酒精内脱脂，照上述法处理，亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。采血的部位和方法以耳垂采血为主。以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性采血针迅速刺入，适可而止第一滴血不必擦掉，即可应用。（若由指头取血则受检者痛楚较大，且易引起创口感染，一投不宜采用。）采血的血量厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成边缘光滑之园形，直径约0.8—1.0厘米左右。薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约2厘米采血的时间进行疟疾普查时，在同一时间内常常需要检查很多居民，故一般无法考虑取血的时间。但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考虑在什么时候取血较为适宜，尤在确定不下虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患者的情况下。采血的时间---间日疟间日疟原虫及三日疟原虫，在患者刚发冷发热以后，大部是在环状滋养体期，故这一时期区别疟原虫种类是不容易的。虽在—般情况下，随便什么时间检查感染者的末稍血液，多少能查到各个时期的原虫，但适当的取血时间，一般是在患者发作数小时至十余小时，即已滋养发育至具有易于鉴别的晚期滋养体期．采血的时间---恶性疟恶性疟原虫，从理论上说，因为恶性原虫的裂体生殖是在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患者的末稍血液中不易查到。但实际情况不尽如此，一般在受染者的末稍血液中，随时能见到少数恶性疟原虫的环状滋养体，虽然如此，较理想的取血时间，是在发作后的20小时左右，因为这个时候，环状滋养体虽已滋长发育至最高峰，但尚未回至内脏的毛细血管中去进行裂体生殖。环状滋养体的数量与构造，有助于疟原虫种类的鉴别。恶性疟原虫的配子体很易识别，但在初发时，一般需要在发作八日后才能在末稍血液中出现，应当注意厚、薄血膜的形状和位置薄血膜宽2cm，长2.5cm厚血膜直径0.8-1cm假定将玻片划成三格等分，则厚血膜应位于中格靠右侧线处，薄血膜则从玻片中央起至左格中部止，右端空格供记录姓名，编号或贴标签之用(如图)血片的制作1玻片的执持方法：无论在拭擦玻片，制作血片或染色血片时，手指仅可夹持玻片两侧缘，切匆触及玻片之上下面以免手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不匀，厚血膜易于脱落血片的制作-厚血膜涂制取洁净的载玻片和推片各一张载玻片放桌上，推片以右手拇指和食指持其二侧，以左端下角从受检者之耳垂沾取血滴，在载玻片之适当位置，自内向外回转扩大，涂成厚血膜，使厚薄均匀。涂毕后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之残留小量血液。血片的制作--薄血膜涂制以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，与载玻片约成25一45度角，使血滴向二旁扩展至一定宽度时，立即向左边轻轻迅速推出即成薄血膜。推时速度之快慢和角度均影响血膜的厚薄程度，最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布排列比较均匀。无裂缝，无空隙。血片的编号血片编号可根据实际操作进行。号码必须不易脱落，建议用铅笔在薄血膜上编号。血片的固定和脱膜薄血膜用甲醇固定现场检查的血片厚血膜可以不脱血膜，直接染色。保存时间较长的标本片厚血膜要脱血膜后保存。血片制作的注意事项平放、有盖、防止灰、尘和植物孢子污染。防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸自然干燥，不能太阳晒和火烤制作血片的注意事项制成的血片切勿用火烤、日晒或放在新购置之标本盒内，以免血红蛋白凝固无法脱除。血片放置待干时不可倾斜，否则厚血膜中血细胞沉在一边，可使厚薄不匀。此外还要防止苍蝇吮吸血膜和灰尘污染血片。制成的血膜须完全干燥后(自然情况下约4-12小时才能全干燥；必要时，可置于37℃的暖箱中，促其速干)始可进行固定及染色否则薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜容易在染色时脱落，而常现网状的背景；反之；血片搁置过久则有霉菌及枯草杆菌生长，血红蛋白凝固，也不能使用，因此不利于镜检。若把未经固定的血片能盛于氯化钙的干燥器内，然后放入冰箱中，可保存3年之久，并仍可较满意的染色。血片的染色吉氏染液的成份原料：吉氏染粉10g中性甘油500ml纯甲醇500ml吉氏液染色方法将吉氏染液配成3%的稀释液水97ml+3ml吉氏液PH7.0--7.2染色25—30分钟影响染色效果的因素染料和溶剂的质量染液的新旧染液稀释后的使用时间染液的稀释浓度染色时间：根据染液质量、新旧、浓度和气温染色用水PH7.0—7.2