皖贝母总生物碱的提取综述

皖贝母总生物碱的提取综述专业：中药学方向：中药生产与研发小组成员：胡伟、王起文、吴李超颜磊、钱贺、张亮亮2012年12月12日目录摘要………………………………………………………11.皖贝母的资源学研究…………………………………11.1资源种类……………………………………………11.2资源分布……………………………………………22.皖贝母的鉴别…………………………………………32.1性状鉴别…………………………………………42.2显微鉴别……………………………………………42.2.1鳞叶横切面……………………………………………42.2.2粉末……………………………………………52.3薄层色谱扫描……………………………………………52.3.1样品供试液的制备………………………………………62.3.2薄层板的制备……………………………………………62.3.3点样与薄层展开…………………………………………72.3.4显色检视……………………………………………72.3.5色谱扫描……………………………………………83.皖贝母的化学成分分析……………………………………93.1生物碱类成分……………………………………………93.1.1生物碱的理化性质………………………………………103.2皂苷类成分……………………………………………103.3其它成分……………………………………………104.皖贝母的药理作用…………………………………………114.1镇咳作用……………………………………………114.2祛痰作用……………………………………………124.3平喘作用……………………………………………124.4镇静、镇痛作用…………………………………135.皖贝母总生物碱的提取…………………………………135.1生物碱提取方法研究……………………………………135.1.1酸水提取法……………………………………………145.1.2醇提法……………………………………………145.1.3亲脂性有机溶剂提取法………………………………145.1.4其它提取法……………………………………………145.2总生物碱提取方法的选择………………………………155.3提取试验……………………………………………155.3.1仪器与材料……………………………………………155.3.2试验方法……………………………………………165.3.2.1药材的预处理…………………………………………165.3.2.2醇提取方法及流程……………………………………166.总生物碱的纯化、富集……………………………………176.1粗总生物碱的溶解…………………………………………176.2大孔吸附树脂预处理………………………………………176.3正交实验设计……………………………………………176.4大孔树脂洗脱……………………………………………177.皖贝母总生物碱的检识和鉴定………………………187.1理化鉴别……………………………………………187.2薄层鉴别……………………………………………187.2.1样品供试液的制备…………………187.2.2对照品溶液制备…………………………………187.2.3薄层板的制备……………………………………197.2.4薄层展开……………………………………………197.2.5显色检视……………………………………………198.总生物碱的含量测定………………………………………198.1供试液的配制……………………………………………198.2标准曲线的绘制…………………………………………198.3供试品皖贝母总生物碱的含量测定…………………19参考文献……………………………………………20摘要安徽贝母(Fritillariaanhuiensis.S.C.ChenetS.F.Yin)为百合科贝母属新种，又称皖贝母。是安徽的道地药材。皖贝母中的主要化学成分有异甾体类生物碱和甾体类生物碱，主要为浙贝乙素(vertieinone，peiminine)、贝母辛(pesmssine)、异浙贝甲素(,isoverticine)、一种新的生物碱皖贝甲素(wanpeininA)。还有萜类、甾体、脂肪酸、嘌呤、嘧啶、糖类、苷类（胡萝卜苷）甾醇类化合物（β-谷甾醇）等化合物。皖贝母的主要活性成分为生物碱类和皂苷类，两者均为植物次生代谢产物。本实验采用醇提取法提取，以大孔吸附树脂分离纯化皖贝母总生物碱，用红外分光光度计进行总生物碱含量测定。关键字：皖贝母总生物碱醇提取大孔吸附树脂分离纯化1.皖贝母的资源学研究1.1资源种类[1]安徽共有11种、2变种、1变型贝母属植物。它们是安徽贝母F.anhuiensis、白花贝母F.anhuiensisvar.albifiora、皖西贝母F.anhuiensisf.Jinzhaiensis、舒城贝母F.shuehengensis、湖北贝母F.huPeiensi、浙贝母F.thunbergii、天目贝母F.monantha、铜陵黄花贝母F.monanthavar.Tonglingense、江南贝母F.huangshane、皖江贝母F.waangensis、祁门贝母F.gimenensis、宁国贝母F.ningguoensis、窄叶小贝母F.xiaobeimu。其中有7种、2变种、1变型仅分布于安徽，为安徽特有的种质资源。天目贝母仅分布在华东区，湖北贝母、浙贝母、江南贝母的分布区限于华东和华中区。无广布种存在。安徽贝母(Fritillariaanhuiensis.S.C.ChenetS.F.Yin)为百合科贝母属新种，又称皖贝母，野生于皖西山区，在该地区历来有做贝母药用的习惯，也是安徽的道地药材。据研究表明安徽贝母与川贝在镇咳祛痰方面进行临床及药理作用的对比，结果无显著性差异。近年来栽培取得成功。1.2资源分布[2]贝母属植物分布于北温带，在我国主产新疆(14种、19变种)、四川(17种、7变种、1变型)等省。安徽是贝母属植物分布的南部边缘地带，目前已发现分布有11种、2变种和1变型贝母属植物，在种质资源上仅次于新疆和四川，在我国东南部中最丰富，且特有现象明显。安徽的皖南山区和大别山区是我国贝母群南方种系的重要分布和分化中心。其中安徽境内贝母属植物呈规律性分布：安徽贝母（皖贝母）自然分布于大别山区与江淮丘陵区，舒城、霍邱、霍山、金寨等县有大面积家种，资源量大。白花贝母分布于金寨县，有小面积栽培。皖西贝母分布于金寨、霍山、霍邱，有小面积家种。舒城贝母据文献记载分布于舒城小涧中，但由于今年来的资源破坏，估计已濒灭绝。湖北贝母分布于舒城、岳西等地，有小面积栽培。浙贝母在霍邱、宁国、舒城、铜陵等地有小面积栽培。天目贝母分布于皖南山区和大别山区，因人为挖采，资源量日益减少。铜陵黄花贝母分布于铜陵，有家种，资源量较大。江南贝母分布于铜陵、南陵和纵阳等县，野生资源量少。皖南贝母分布于族德、绩澳和黄山等地，，有小面积栽培。皖江贝母分布于铜陵，资源量少。祁门贝母野生于祁门、黔县和绩溪等地，资源蕴藏量少。宁国贝母分布于宁国、宣城等地，有小面积栽培。窄叶小贝母分布于宁国，野生资源量少。2.皖贝母的鉴别2.1性状鉴别[3]安徽贝母完整的鳞茎呈扁球形、类圆锥形或心形，直径0.6～1.7cm，高0.8～1.8cm，表面类白色或微黄色，顶端钝圆或突起，基部中央凹入，有须根痕;外层鳞叶两瓣，大小悬殊，商品多分离为单瓣;质坚而脆，折断面白色粉性。气微、味苦。2.2显微鉴别[4]2.2.1鳞叶横切面安徽贝母皮细胞长方形，气孔少数，为不定式;表皮非腺毛分布稀疏，由20个细胞构成，细胞形小壁厚，非腺毛顶端钝尖而微弯，基部渐宽。薄壁组织有细胞间隙，细胞内充满淀粉粒，并有草酸钙方晶。维管束为外韧型，不规则散列，木质部仅有2～3个导管，非木化，韧皮部由筛管和小型薄壁细胞构成.2.2.2粉末安徽贝母可见淀粉粒众多及气孔表皮细胞表面观长方形，表皮毛罕见.导管为螺纹和环纹，直径10～12um.草酸钙方晶直径5～12um，散在于薄壁细胞中。下面图1为皖贝母的粉末鉴别图。图1.鳞茎粉末图x160安徽贝母1气孔2淀粉粒3导管4草酸钙结晶2.3薄层色谱扫描[5]用薄层色谱来鉴别皖贝母是简便、快捷、行之有效地手段。也是药典常用的理化鉴别的方法。其步骤主要分为制备样品供试液、制备薄层板、点样、展开和检视、扫描。2.3.1样品供试液的制备称取贝母粉末1g，以10%氢氧化铵溶液湿润，加混合溶剂(乙醚:氯仿:乙醇=25:8:2.5)20ml，室温浸渍24小时，滤过，残渣再以混合溶剂10ml洗涤，滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，加无水乙醇溶解，供点样。2.3.2薄层板的制备取硅胶G4g置于研鉢中，加入3份0.5％CMC-Na在研鉢中按同一方向研磨混合，除去表面气泡，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳的的涂布，涂好后放在水平台上晾干备用。2.3.3点样与薄层展开取样品溶液少量点样于硅胶G薄层板，以环已烷-醋酸乙醋-二乙胺(6:4:l)为展开剂，展开距离为7cm，取出吹干后，进行第二次展开。2.3.4显色检视层离后取出置65℃烘箱中加热1小时，冷后，喷以碘化铋钾试液显色。2.3.5色谱扫描以上层析板显色1小时后，置CS一910型双波长色谱扫描仪上进行扫描。扫描条件:测定波长4O0nm，参比波长700nm.狭缝:1.25xl.25mm.扫描方式:反射式、锯齿形扫描.皖贝毋的薄层色谱扫描根据其主要斑点的峰高值（见表1.），可作为皖贝母的鉴定依据。下图2.为薄层色谱扫描图谱。图2.皖贝母的薄层层析色谱扫描图谱表1.皖贝母薄层层析斑点的峰高值(mm)3.皖贝母的化学成分分析据研究表明皖贝母中的主要化学成分有异甾体类生物碱和甾体类生物碱，主要为浙贝乙素(vertieinone，peiminine)、贝母辛(pesmssine)、异浙贝甲素(,isoverticine)、一种新的生物碱皖贝甲素(wanpeininA)。还有萜类、甾体、糖类、苷类（胡萝卜苷）甾醇类化合物（β-谷甾醇）等化合物。皖贝母的主要活性成分为生物碱类和皂苷类，两者均为植物次生代谢产物[6]。3.1生物碱类成分安徽贝母(Fritillariaanhuiensis.S.C.ChenetS.F.Yin)鳞茎中主要含有四种生物碱Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ及Ⅳ。碱I为浙贝乙素(vertieinone，peiminine)、碱Ⅱ为贝母辛(pesmssine)、碱Ⅲ为异浙贝甲素(,isoverticine)、碱Ⅳ是一种新的生物碱，定名为皖贝甲素(wanpeininA)。根据IR，MS，，1HNMR以及1CNMR光品名斑点hRf值ABCDE皖贝母1551713225谱解析和衍生物制备，推定其结构为5ɑ，14ɑ，22β-cevanine-3β，6ɑ，20β-triol。下图3.为四种生物碱Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ及Ⅳ的结构：图3.生物碱Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ及Ⅳ的结构式3.1.1生物碱的理化性质碱I为簇状结晶，熔点212～214℃，[ɑ]D一62.5o，分子式C27H43O3N,分子量429。碱Ⅱ为无色棱晶，熔点268～270℃，[ɑ]D一46。，分子式C27H41O3N,分子量427。碱Ⅲ为丝状结晶，熔点134～136℃，[ɑ]D一42.14o，分子式C27H45O3N，分子量431。碱Ⅳ为小白色簇晶，熔点281～283℃（d)，[ɑ]D一5.71o，分子式C27H45O3N[9]。碱Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ及Ⅳ都具有较强的碱性，碱Ⅱ的碱性略弱于碱Ⅰ，Ⅲ及Ⅳ。碱Ⅰ，Ⅲ及Ⅳ为叔胺碱，碱Ⅱ为仲胺碱都具有亲脂性，一般易溶于有机溶剂，尤其易浓于亲脂性溶剂，如苯、乙醚、氯仿等，但由于所含羟基多，亦可溶于醇类。生物碱可与碘化铋钾试剂反应生成橘红色至黄色无定形沉淀；与碘化汞钾试剂反应生成类白色沉淀；与硅钨酸试剂反应生成类白色或淡黄色沉淀；与苦味酸反应生成黄色沉淀；碘-碘化钾试剂反应生成红棕色无定形沉淀。生物碱可与改良的碘化铋钾试剂发生显色反应。3.2皂苷类成分皂苷是一类复杂糖苷，归属于糖脂的一类，是众多中草药的有效成份，是一类重要的活性天然产