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中药抗菌成分及机制研究进展摘要:随着抗生素在临床中的应用越来越广,抗生素滥用和细菌耐药性渐渐成为全球问题,生活用品安全天然也渐渐成为人们的追求。白及和黄连是中国传统用于治疗疮痈肿毒的常用药,其中白及在抗G+菌方面有着良好作用,黄连尤其是从黄连中提取得到的黄连素是一种广谱抗菌类生物碱,对G+菌、G-菌均有良好的抗菌活性,但是黄连素对G+菌的抗菌活性低于白及提取物。因此,本研究拟以白及黄连为主要成分制备一种具有抗菌消炎作用的天然洗液,并对其抗菌消炎作用进行研究。关键词:白及、黄连、洗液、抗菌消炎引言近年来抗生素、半合成或者合成的药物在临床上的应用越来越广泛,这些药物虽然可以有效控制严重感染性疾病,但是抗生素使用量的加大和使用频率的加快还是使其滥用越来越严重,细菌耐药性也随之成为全世界临床治疗中面临的重要问题。因此,临床中引入新的非抗生素类但是同时又具有类抗生素样作用的药物已经成为全球课题,在这样的背景下,中药及其复方制剂以其悠久的临床治疗经验和丰富的现代抗菌抗炎研究为这类急需解决的问题无疑提供了新途径。其中白及和黄连作为传统用于治疗疮痈肿毒的常用药,在抗菌消炎方面均有良好的药理活性。1.中药抗菌活性成分1.1生物碱类生物碱是存在于自然界中的一类含氮有机化合物,研究发现许多生物碱类化合物具有杀菌、抑菌活性。如,VollekovaA等发现[1]小檗碱(黄连素)对多种真菌、霉菌、G+菌、G-菌均具有杀灭或抑制作用,是一种广谱的抗菌药物;朱峰等[2]以链霉素为对照品采用K-B纸片法测定野朱红栓菌甲醇粗提物活性成分朱红菌素和朱红栓菌素对大肠埃希菌、链球菌、沙门氏菌、金黄葡萄球菌的抗菌活性,发现朱红菌素和朱红栓菌素对上述试验菌株均有抑菌活性,其中对大肠埃希菌的抑菌活性最强;刘军峰等[3]采用抑菌圈法测定了槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦豆子总碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、番茄早疫、番茄灰霉和辣椒炭疽的抗菌活性。试验结果表明,5种生物碱对3种细菌生长均具有显著的抑制作用;张惠峰等[4]用倍比稀释法测定青刺果总生物碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、志贺菌和白色念珠菌的抗菌效果结果发现青刺果总生物碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、志贺菌和白色念珠菌均有抑制作用。此外,吴茱萸、麻黄、贝母、常山、白毛藤、乌头等多种中草药经研究证明也具有抗菌活性。1.2黄酮类黄酮类化合物是一类基本母核为2-苯基色原酮的化合物,临床上早有将黄酮类化合物用做抑菌药物的实例,如黄芩苷和石吊兰素。还有一些植物中的黄酮类化合物经研究证明也具有抗菌功效,如秦晓荣等[5]用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等为实验菌株,药敏纸片法考察抗菌活性发现槲皮素具有广谱抗菌性且对革兰氏阴性菌的抗菌作用强于革兰氏阳性菌;陈淳等[6]采用溶剂法提取番石榴叶总黄酮发现其对茄子白绢病菌、甘蓝黑斑病菌、白菜炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌等蔬菜病原真菌均具有抑菌活性;王芳等[7]发现猪屎豆叶提取得到的总黄酮对大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球的菌的最小抑菌浓度(minimuminhibitoryconcentration,MIC)值分别为12mg/mL、8mg/mL、12mg/mL、1mg/mL,但对铜绿假单胞菌无抑制作用;李钟美[8]对高良姜的黄酮类物质进行研究发现高良姜中起抑菌作用最主要的物质为高良姜素、槲皮素、山萘酚、乔松素,其次为姜黄素、原儿茶酸。除此之外大豆异黄酮、桑色素、木犀草素、二氢杨梅素、金丝桃苷、白杨素、芹菜素、千层纸素等经研究证明也均具有抗菌作用。1.3挥发油类挥发油是一类在芸香科、菊科、木兰科等科属中较为常见的化合物,在中枢神经系统、抗炎、抗菌、抗肿瘤、心脑血管系统、抗病毒等方面均有应用。其抗菌作用已有大量科学研究实例证明,如,蒲忠慧等[9]实验发现肉桂挥发油对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及抗药性金黄色葡萄球菌均具有良好的抗菌活性;刘易鑫等[10]采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对水蒸气蒸馏法提取的突托蜡梅叶中挥发油进行成分分析,并采用滤纸片琼脂平板扩散法及肉汤稀释法检测该挥发油对9种常见病原菌的抑菌活性突托蜡梅叶中挥发油对受试菌均有不同强度的抑制作用;周峰等[11]用水蒸气蒸馏法提取丁香、肉桂、八角茴香、大蒜、薄荷、肉豆蔻、香茅、藿香、艾叶、干姜、鱼腥草和荆芥等12种中药的挥发油,用培养基平板连续稀释法进行体外实发现这12种中药的挥发油均对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、黄曲霉和绿色木霉等6种菌均有一定的抗菌作用。因此部分植物的挥发油具有抗菌效果是毋庸置疑的。1.4多糖类多糖是一类广泛存在于生物体的大分子活性物质,具有抗肿瘤、调节血糖等多种作用,近年来随着对多糖研究的深入,越来越多的多糖也被发现具有抑菌作用。如,孟俊龙等[12]采用分光光度法研究香菇多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的抑制作用发现香菇多糖均对其有抑制作用,且抑制作用由强到弱依次为金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌;黄敏桃等[13]发现苦丁茶水提物中槲皮素、多糖、熊果酸、齐墩果酸与抑菌活性有显著相关性;张海艳等[14]发现马齿苋多糖对3种病菌有明显抑菌作用,其中对痢疾杆菌的抑菌作用效果最强;李瑜等[15]发现对于细菌,枸杞多糖8mg/mL时出现抑菌圈,而黄芪多糖0.02mg/mL时效果最佳,对于霉菌,随着枸杞多糖浓度的增大,抑菌圈的直径增大,而黄芪多糖0.02mg/mL时效果最佳;此外,一些多糖如:鱼腥草多糖、茵陈多糖、山药多糖等也具有抑菌作用[12-17]。1.5皂苷类皂苷,一类苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的糖苷。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母、柴胡等,其主要有效成分中都包括皂苷类化合物,有些皂苷还被证明具有抑菌活性。如,孙延芳等[18]对纯化的酸枣果三萜皂苷进行抑菌研究发现酸枣果的三萜皂苷具有广谱抗菌效果,对实验所用的致病菌有较强的抑制和灭活作用。对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌和炭疽杆菌的MIC可达0.078mg/mL,MBC值为0.180~0.712mg/mL,尤其对绿脓假单胞菌和白色假丝酵母菌显示明显的抑制作用;李婉珍等[19]发现瓜蒌皮总皂苷对金黄色葡萄球菌有抑菌效果,抑菌圈为15.3mm;高骁君等[20]发现白毛夏枯草复方次生代谢产物含量和抑菌活性均高于单方,影响其抑菌活性的成分主要是环烯醚萜类与皂苷类;陆灿等[21]研究发现燕麦皂苷对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌及白色念珠菌有明显的抑制作用;此外,香椿皂苷、无患子皂苷、玉米须皂苷、商陆皂苷等陆续被发现也具有抑菌活性。[22-25]1.6蒽醌类天然药物中的蒽醌类化合物一般存在广泛且重要的药理作用,一些中药材,如紫草、丹参、黄精、雷公藤等植物中均含有大量蒽醌类化合物,这些化合物被证明不但具有抗肿瘤、抗氧化功能,在抗菌方面也有良好效果。如,田兵等[26]发现芦荟的抗菌作用与蒽醌化合物的含量呈正相关性;王亚楠等[27]研究柳珊瑚共附生真菌发现其蒽醌类化合物macrosporin对鳗弧菌具有较强的抑菌作用。还有许多中药如大黄、虎杖、决明子、何首乌、茜草、芦荟等植物中的蒽醌也被证明具有抑菌活性。甚至有研究者[28]将含蒽醌的中草药视为一种纯天然的抑菌防腐剂。1.7萜类萜类化合物是一类基本结构为异戊二烯单位的烃类及其衍生物,通常在植物生长、发育过程中起重要作用。梁海燕等[29]发现芳樟醇等萜类有着明显的抑菌活性,其中芳樟醇在8ul浓度下即可对菌丝生长和孢子萌发产生抑制;文福姬等[30]发现松针精油溶液浓度达到5%时对金黄色葡萄球菌抗菌活性最好;炭梅叶精油主浓度0.005mg/mL时,精油对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑制作用均随浓度增大而增加,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。1.8其他除上述化合物外,还有一些化合物如有机酸类、鞣质等也被证明具有抗菌活性。如,胡晓燕等[31]发现板蓝根总有机酸部位对大肠杆菌AG100A的抑菌作用最强;李曼玲[32]发现一些有机酸类化合物,像延胡索酸、没食子酸、琥珀酸、绿原酸、异绿原酸等均具有良好的抑菌作用;向丽等[33]研究诃子鞣质对生物被模型白色念珠菌的抑制作用发现诃子鞣质可以抑制白色念珠菌生物膜的形成;周湘[34]发现全柿果实鞣质的水提取物在体外有明显地抑制白色念珠菌、血链球菌和大肠埃希菌活性的作用。;松长青等[35]研究发现石榴皮鞣质对革兰阳性菌具有较强的抗菌活性,能够显著影响金黄色葡萄球菌的细胞壁和细胞膜结构,且对菌体内蛋白合成具有一定的抑制作用。2.中药抗菌的作用机制中药成分复杂,作用多样,就目前研究进展而言中药对人体产生抗菌作用一般通过两个方面:一是依靠中药抗菌成分直接干扰或破坏细菌细胞,另一个方面则是通过提高机体免疫力间接对患者产生一种抗菌效果。2.1直接干扰或破坏细菌细菌是一类原核细胞型的单核微生物,形体微小,结构简单,有细胞壁而无典型的细胞核。中药有效成分抗菌的机制一般表现为破坏细菌细胞结构或干扰细菌代谢。在破坏细菌结构方面,通常表现为中药提取液改变细菌细胞结构的某个主要组成部分,如破坏细菌细胞壁、细胞膜、降低细胞膜流动性、使细胞质壁分离等。如,李仲兴等[36]从五倍子中提取得到的五倍子提取液可以直接改变葡萄球菌的细胞形态,使细菌细胞逐渐膨胀,细胞内容物逐渐消失从而达到抗菌的目的;林居纯等[37]将蛇莓水提物作用于菌体发现其可以使金黄色葡萄球菌严重质壁分离;万力等[38]发现山苍子油作用于申克孢子丝菌时可以直接破坏细胞膜,降低细胞内渗透压使其死亡;TsuchiyaH等发现[39]槐属二氢黄酮G可以细胞膜的流动性从而达到抗菌的目的。在干扰细菌合成代谢方面,中药抗菌的机制一般表现为干扰核酸、蛋白质、细胞壁等的合成或者影响肽聚糖、甘露聚糖几丁质-葡聚糖、β-内酰胺酶等的合成。如,张慧芸等[40]将丁香提取物作用于大肠杆菌和单增李斯特菌发现细胞膜受到严重的损坏,作用机理是丁香提取物膜密度降低,内容物减少,干扰蛋白质和细胞壁的合成。姜涛等[41]将含有没食子酸酯的绿茶粗提物作用于耻垢分枝杆菌,作用后细胞壁呈现膨出、变形等形态学变化,细胞质出现疏密不均现象,推测主要成分与耻垢分枝杆菌细胞质膜蛋白特异性结合后影响了细胞壁肽聚糖的代谢,从而产生抑菌作用。王刚生等[42]将桂皮油藿香油的复合物作用于烟曲霉菌,电镜观察显示药物穿透细胞壁和细胞膜,干扰甘露聚糖几丁质-葡聚糖的合成,破碎的细胞壁刺入细胞内,干扰核酸和蛋白质的合成,使细胞器、细胞核受到损伤,内容物流失,直至细胞崩裂死亡;Daisy等[43]发现地胆草中的萜类化合物可以抑制形成自溶酶活性,达到直接破坏细菌细胞的目的。2.2增强机体的免疫能力人体免疫能力的降低会导致病菌的侵入,因此增强机体的免疫力相当于增强人体的抗菌能力,多数中草药如人参、三七、白术、黄连等均具有增强机体免疫力的功效。如,三七多糖可以可以增强增强网状内皮系统的活性;人参可以增强机体淋巴细胞的功能;郭向华等[44]发现苦参碱可以通过诱导肺Th1型免疫反应加快PA生物膜肺炎大鼠肺部的细菌清除以及减轻肺部病理损伤,对PA生物膜肺感染大鼠具有免疫保护作用。展望脂多糖(LPS)作为细菌内毒素的主要成分是引起引起全身性炎症反应综合征或脓毒症等疾病的主要启动子,而中药活性成分由于成分多样、作用机制多变,在发挥抗菌作用的同时也常通过群体感应系统发挥清除减弱LPS、细菌内毒素等作用,从而在抗菌的同时产生抗炎作用或对机体自身脏器细胞起保护作用。因此将中药天然活性成分制备成一种洗液不但成分天然无污染而且具有多作用的优势。参考文献[1]VollekovaA,Kost,alovaD,KettmannV,etal.Antifungalac-tivityofMahoniaaquifoliumextratanditsmajorprotoberberinealkaloids[J].PhytohterRes,2003,17(7):834-837.[2]朱峰,卢卫红,陈忻,吴静姝.朱红栓菌中两个吩噁嗪酮类生物碱的分离与鉴定[J].天
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