液相色谱仪常见问题及处理方法

液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足，解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。调整衰减即可。5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。7、检测池中有气泡。解决办法为排气。8、流动相流量不合适。调整流速即可。为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查（在安装了保护预柱的情况下）；2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，若压力仍高则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合HPLC仪器问题1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。3、接头处为何经常漏液，如何处理？答：接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。接头被污染或磨损；建议更换接头。接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。4、进样阀漏液是如何造成的？答：a.转子密封损坏；更换转子密封b.定量环阻塞；清洗或更换定量环c.进样口密封松动；调整松紧度d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状）e.废液管中产生虹吸；清空废液管谱图问题1、问：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？答：a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板b.色谱柱塌陷；填充色谱柱c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱2、问：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？答：保护柱或分析柱污染；取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相；改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。3、问：K值增加时，拖尾更严重，这是为什么？答：反相模式，二级保留效应；a.加入三乙胺（或碱性样品）b.加入乙酸（或酸性样品）c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d.更换一支柱子4、问：保留时间的波动有几种可能的原因？答：温控不当；调节好柱温。流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。液相色谱常用符号与术语表ACN乙腈AcetonitrileAUFS满量程的吸光度单位Absorbanceunits,fullscaleAs峰不对称因子B二元流动相中的强溶剂；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇BSA牛血清白蛋白（一种蛋白质）BovineserumalbuminCAF咖啡因（中性溶质）CaffeineCRF色谱响应因子Chromatographicresponsefunction；色谱图总分离度的定量指标dc色谱柱内径（cm）DMOA二甲基辛胺DimethyloctylamineDNB2,4-二硝基甲酰（基）2，4-Dinitrobenzoyldp色谱柱填料的粒度（cm）DRYLAB液相资源公司（LCResourcesINC.)的计算机模拟软件。DRYLABI用于等度预测，DRYLABG用于梯度预测F流动相的流速（ml/min）FC-1131，1，2-三氟-1，2，2-三氯乙烷GPC凝胶渗透色谱法Gel-permeationchromatographyHA酸性溶质，能电离出A-Hex己烷Hexanehr二相邻谱带之间的谷高HVA高香草酸Homovanillicacidh’峰高h1,h2相邻谱峰1和谱峰2的峰高IEC离子交换色谱法Ion-exchangechromatographyIP离子对Ion-pairIPC离子对色谱法Ion-pairchromatographyJ色谱峰强度参数K’所给谱峰的容量因子，k’=(tR-t0)/t0=tR’/t0，tR=t0(1+k’)k梯度洗脱过程中，某溶质的k’的平均值或有效值kw以水做流动相k’的外推值k1,k2相邻谱峰1和谱峰2的容量因子L色谱柱长度（cm）Lc检测器流动池光路的长度（cm）M溶质的分子量MC二氯甲烷MethylenechlorideMDST混合设计统计技术Mixture-designstatisticaltechnique；一种优化流动相的软件MeOH甲醇MethanolMTBE甲基叔丁醚Methyl-t-butyletherMW溶质的分子量N色谱柱塔板数NAPAN-乙酰普鲁卡因胺N-Acetylprocainamide（碱性溶质）N0检测器的基线噪音ODS十八烷基硅烷OctadecylsilylP色谱柱的压力降[通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱极性参数PA普鲁卡因胺Procainamide（碱性物质）PAH聚芳香烃PolyaromaticHydrocarbonPESOS优化流动相的计算机软件（美国Perkin-Elmer产品）pKa溶质酸性常数的负对数；当pH=pKa时，溶质中有一半是电离的Rk保留值范围，Rk=（最末谱峰k’）/（最初谱峰k’）RRM相对分离度图（通常N=10000）Rs相邻二谱峰的分离度S当流动相中的%B改变时，测量溶质保留值的变化速率的参数SAL水杨酸SalicylicAcidSEC尺寸排阻色谱法Size-exclusionchromatographyS/N信噪比Signaltonoiseratiot分离时间（min）（样品进样时t=0）tp梯度系统的滞后时间（min）TBA四丁基铵离子TetrabutylammoniumionTEA三乙胺TriethylamineTHF四氢呋喃Tetrahydrofurantk在用于校正等度洗脱溶剂强度的流动相离开梯度混合器时，梯度洗脱的时间TLC薄层色谱法Thin-layerchromatographyTMA四甲基铵Tetramethylammonium（盐）TMS三甲基硅烷Trimethylsilyl高效液相色谱仪操作步骤：1)、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2)、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，冲洗时速度不要超过3ml/min。5)、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过25MP。选用合适的流速，走基线，观察基线的情况。6)、进样和进样后操作，进样，所有的样品均需过滤，全部样品走完后，再走一段基线，洗掉剩余物。7)、关机时，先关计算机，再关液相色谱。注意事项：1)、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。3)、所有过柱子的液体均需严格的过滤。4)、压力不能太大，最好不要超过25MP。