梅毒血清学检测方法的应用评价

梅毒血清学检测方法的应用评价[摘要]目的探讨3种梅毒血清学试验在梅毒诊断检测中的应用价值。方法对1552份梅毒阳性血清和1000份健康体检阴性的血清用梅毒甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）、梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）3种方法进行检测。结果3种方法检测2552份血清中，TRUST、TP-ELISA、TPPA灵敏度分别为50.5%、99.4%、100%；特异性分别为99.8%、99.9%、100%。3种方法检测1000份健康体检者血清，TRUST检出2个生物假阳性，TP-ELISA检出1个生物假阳性。结论TRUST、TP-ELISA、TPPA3种方法的敏感性、特异性依次增高。梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种全身性、慢性传播疾病、具有高度传染性和很强致病性。梅毒患者是唯一传染源，其主要通过性接触传播、间接接触传播、母婴传播及血液传播，早期梅毒有较强的传染性。近年来，梅毒的发病率呈逐年上升之势，因此如何早期诊断和及时治疗已成为当前重要问题。由于梅毒检验方法较多，各种方法又有其特殊的临床价值，如何合理选用梅毒检测方法是临床实验室需解决的问题，现四川省大学华西医院对1552份梅毒阳性的血清和1000份健康体检阴性的血清采用TRUST(Toluidineredunheatedserumtest)、TP-ELISA(DiagnosticKitforAntibodytoTreponemaPallidum)、TPPA(TreponemaPallidumParticleagglutinationassay)3种检测方法进行评价，有助于合理选用梅毒检测方法是临床实验室需解决的问题。TRUST测定的非特异性反应素，属于非密螺旋体抗原试验，而TP-ELISA及TPPA测定的是梅毒特异性抗体，属于密螺旋体抗原试验。1材料与方法1.1材料1．1．1标本来源华西医院2011-01/12经临床确诊（按WS273-2007梅毒诊断标准诊断）的梅毒患者血清样本1552例，健康体检阴性者血清1000份。1．1．2试剂TRUST试剂盒为上海荣盛生物药业有限公司；TP-ELISA试剂盒为英科新创（厦门）科技有限公司；TPPA试剂盒为日本富士瑞必欧株式会社产品。1．1．3仪器TCANA酶联免疫全自动分析仪(TP-ELISA检测时使用)。1.2方法用TP-ELISA、TPPA和TRUST3种方法分别对2552份标本进行检测，各项试验操作步骤及结果判断均严格按照试剂盒说明书。2结果3种方法检测1552份梅毒阳性血清和1000份健康体检者血清中,TRUST法检出阳性783例（其中健康体检者检出2例），其敏感性为50.5%，特异性为99.8%；TP-ELISA法检出阳性1543（其中健康体检者检出1例），其敏感性为99.4%,特异性为99.9%；TPPA法检出阳性1552份，其敏感性为100%，特异性为100%。3种方法检测1000份健康体检者血清，TP-ELISA和TRUST均检出生物假阳性。TPPA与TP-ELISA阳性符合率为99.5%,TPPA与TRUST阳性符合率为50.3%，TP-ELISA与TRUST阳性符合率为50.6%，见表1。表13种梅毒血清学检测方法的结果比较受检人群TPPATP-ELISATRUST阳性阴性阳性阴性阳性阴性梅毒阳性患者15520154210781771健康体检者0100019992998对1552例梅毒确诊患者进行统计得出，男性确证患者809人，阳性率占52.12%；女性确证患者743人，阳性率占47.9%，男性梅毒构成比率比例略高于女性，见表2。表23种血清学方法比较男女检出梅毒情况性别TRUSTTP-ELISATPPA阳性数构成/%阴性阳性数构成/%阴性阳性数构成/%阴性男（n=809）35044.842180352.1680952.10女（n=743）43155.235073947.9474347.90合计781100.07711542100.0101552100.003讨论梅毒螺旋体进入机体内可产生2种抗体[1]，1种是特异性抗体,在梅毒的潜伏期约感染梅毒螺旋体后2周左右即可产生。它出现早，消失缓慢，在患者治疗相当长时间后任可检测到。另1种是非特异性抗体（有抗体性质的反应素），它可与VDRL（VenerealDiseaseResearchLaboratoryTest）抗原发生凝集反应，其出现较特异性抗体约晚2~3周[2],在疾病活动期可检出，但治疗后很快下降最终成阴性。选用的TP-ELISA及TPPA是检测特异性抗体，TRUST检测非特异性抗体。TRUST法检测的是在梅毒期脂质组织受到破坏后产生的抗心磷脂类抗体，在梅毒感染的不同时期检出率差别较大。TRUST在一、二期梅毒检出率可高达96.0％～100.0％，但在一期梅毒早期、晚期梅毒、晚期潜伏梅毒及治疗后梅毒的检测中均可呈阴性[3]。在潜伏期、一期及晚期梅毒中检出为58％～85％[4]。因此，该法不适合一期梅毒早期、三期梅毒治疗后梅毒的检测，对潜伏期性梅毒和神经梅毒也不敏感。此外，由于心磷脂也存在人体其他组织，一些类风湿、SLE及恶性肿瘤患者可出现生物学假阳性[5]。TRUST试验多为手工操作，肉眼判断，主观性强，结果不易保存，易受时间、温度等因素影响，且敏感性及特异性较低，因此不利于输血前、术前及大规模体检人员梅毒筛查。但该法可测梅毒抗体滴度，其滴度变化与梅毒治疗呈正相关，适用于临床梅毒疗效的观察、随访和复发的辅助诊断[6]。TP-ELISA是一种基因工程的检测技术，其利用酶的生物放大系统，提高了灵敏度和特异性[7],对1552份梅毒阳性血清其检出率为99.4％。TP-ELISA检测抗体也存在一定假阳性，有文献报道[8]产生假阳性的因素可能为标本处理不完全、标本溶血、标本被细菌污染等，操作失误、仪器的因素如酶标仪使用的影响、全自动加样仪加样时拖带阳性、方法学因素如灰区现象、空白对照影响等。TP-ELISA法操作简单，试剂价格比较便宜，用酶标仪比色判定结果，原始数据得以保存，适合大量标本的筛查。TPPA是用梅毒螺旋体毒株制成抗原，包被在明胶颗粒上，检测其抗体并可检测抗体效价。有文献报道[9]其敏感性为100.0%（和该试验数据相符），对一期、二期及潜伏期梅毒敏感性均较高，为梅毒确证试验的首选方法。由于试剂成本较高、收费较高、手工操作繁琐、耗时较长，原始数据难以保存，不适合大量标本筛查。从医疗单位避免医疗纠纷和减少患者心理压力及家庭矛盾考虑，TPPA用于甄别生物假阳性结果稳定可靠、易判断，不失为临床检测梅毒较为理想方法，适用于TRUST、TP-ELISA阳性及高危人群的确证试验[10]。对梅毒的诊断治疗必须结合临床表现综合分析，为确保结果的准确性，可靠性及适用性，四川大学华西医院目前对输血前、术前及大规模体检人员用TP-ELISA法进行梅毒筛查，阳性标本再用TPPA给予确证，用TRUST试验观察疗效、复发及再感染情况。