模拟试卷C

模拟试卷C一、单项选择1、HDL被认为是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是CHD（冠心病）的保护因子；VLDL水平升高是CHD的危险因子；LDL是首要致AS（atherosclerosis动脉粥样硬化）因子，经过氧化或其他化学修饰后，其致AS作用更强。2、RT-PCR可以进行RNA定性或定量分析；Southernblot应用于遗传诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析；EMSA（electrophoreticmobilityshiftassay电泳迁移率变动分析）可鉴定蛋白质与特定核酸序列的相互作用。（个人看法：选A。）3、电穿孔法、脂质体法、病毒载体转染、磷酸钙共沉淀法书上都有提到，氯化钙法没有提到。4、（个人看法：选B）5、（个人看法：选D）6、基因转移可由病毒介导和非病毒介导。病毒载体介导的基因转移效率较高，是使用最多的基因治疗载体，主要有逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体；非病毒载体法所用的表达载体主要是重组表达质粒。（p593-594）7、D8、染色质重塑（chromatinremodeling）指通过改变基因启动子和调节序列区域的染色质结构，来调节基因的表达，也称为核小体重塑（nucleosomeremodeling）,主要包括CpG岛甲基化、组蛋白共价修饰。核小体重塑指有ATP依赖性核小体重塑复合体参与的核小体的移位、替换。去组装改变等。RNA聚合酶CTD的磷酸化是转录前起始复合物组装过程中的一步。（个人看法：选C）9、B10、TATAbox是真核生物启动子的核心序列。11、(1)2-DE（二维（双向）凝胶电泳）和LC（液相色谱）都是分离蛋白质组的有效方法。(2)MS(质谱)通过测定样品离子的质荷比（m/z）来进行成分和结构分析，可鉴定蛋白质。以上两点是蛋白质组学的一些研究技术。(3)Genechip或微阵列可以同时测定成千上万个基因的转录活性，甚至可以对整个基因组的基因表达进行分析，因而成为基因组表达谱研究的主要技术。（个人看法:选D）12、SAGE、MPSS、microaraay(微阵列)都是转录组学的研究方法；RFLP（限制性片段长度多态性）可以检测限制性内切酶识别位点的突变，在基因诊断中有应用。(个人看法：选D)13、Sanger双脱氧链终止法利用2’，3’-双脱氧核苷酸掺入终止聚合反应。（具体见书（493页））（选D）14、染色质重塑（chromatinremodeling）指通过改变基因启动子和调节序列区域的染色质结构来调节基因的表达，也称为核小体重塑（nucleosomeremodeling）.其与蛋白质的多样性应该无关。（选C）15、（选C）16、细胞内受体（包括细胞质或胞核内的受体）的相应配体都是脂溶性信号分子。（个人看法：选D）17、（选D）低分子量G蛋白（小G蛋白）与异源三聚体G蛋白一样，具有GTP酶活性，故亦称低分子量GTP酶（smallGTPase）.RAS是第一个被发现的低分子量G蛋白，因此这类蛋白质被称为RAS超家族GTP酶（RASsuperfamilyGTPases）18、原位杂交（insituhybridization）可在细胞涂片、组织切片以及分裂中期染色体带中检测DNA或RNA。可用于基因及其表达产物的定位分析。基本原理：在细胞或组织结构保持不变的情况下，用标记的已知的核苷酸片段，按照核酸杂交中的碱基互补配对原则，与待测细胞或组织中的相应基因片段结合（杂交），所形成的杂交体经显色反应后，在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的核酸分子。荧光原位杂交（Fluorescenceinsituhybridization）应用荧光标记的探针。19、关于SSCP（单链构象多态性）：在非变性条件下，DNA分子可自身折叠形成一定的空间构象，这种构象由单链DNA分子的碱基序列所决定，DNA分子中的碱基变异（即使只有一个碱基）可导致其空间构象改变，从而导致电泳迁移率发生改变。关于PCR-SSCP：首先将待测DNA片段进行DNA扩增，使双联DNA变性成单链DNA，再进行聚丙烯酰氨凝胶电泳，将样品DNA与正常DNA比较，观察是否有条带位置的改变，可判断特定的DNA序列中是否有不同的碱基。（选A）20、（个人看法：选D）二、名词解释1、染色质重塑（chromatinremodeling）指通过改变基因启动子和调节序列区域的染色质结构，来调节基因的表达，也称为核小体重塑（nucleosomeremodeling）,主要包括CpG岛甲基化、组蛋白共价修饰。2、RFLP（restrictionfragmentlengthpolymorphism）限制性片段长度多态性分析由于DNA变异产生新的酶切位点或原有的酶切位点消失，用限制性内切酶消化时产生与变异前相比在长度或数量上不同的DNA片段。可借助核酸分子杂交或PCR进行检测。3、顺式作用元件（cis-actingelements）指位于基因内外、与基因表达调控相关、能被基因调控蛋白特异性识别、结合的特定DNA序列称为顺式作用元件。主要有启动子（promoter）、增强子（enhancer）、沉默子（silencer）。4、PMF（peptidemassfingerprinting肽质量指纹图谱）：蛋白质经过酶解变成肽段后，获得所有肽段的分子质量，形成一个特异的PMF图谱，通过数据库搜索与比对，便可确定待分析蛋白质分子的性质。PMF是质谱技术鉴定蛋白质的方法之一。5、Genediagnosis(基因诊断)利用分子生物学技术，通过检测基因及其表达产物的存在状态，对人体疾病作出诊断的方法。基因诊断检测的目标分子是DNA、RNA、蛋白质或多肽。6、Gprotein(G蛋白)G蛋白是鸟苷酸结合蛋白（guaninenucleotide-bindingprotein）的简称。G蛋白与GDP结合时处于无活性状态，与GTP结合时，则处于活性状态，可与下游分子结合，并通过变构效应将下游分子激活，从而开放相应信号通路。G蛋白本身具有GTP酶活性，可将结合的GTP水解为GDP，使其本身从活性状态回到无活性状态，并关闭下游信号通路。目前已知的G蛋白主要有与七跨膜受体结合的G蛋白以及低分子质量G蛋白（21KD）两类，它们都是多种细胞信号转导通路的开关。7、基因芯片（genechip）先在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量预先制备的DNA探针以显微打印的方式有序固化于支持物表面（eg.硅片、膜、玻璃片等固相表面），然后与待测的以同位素或荧光标记的DNA样品杂交。通过对杂交信号的检测分析，得出样品的遗传信息（基因序列及表达）。它是进行大量基因表达及监测等方面研究的技术。8、Insulinresistence（胰岛素抵抗）指胰岛素靶细胞（eg.骨骼肌、脂肪组织、肝脏等）对胰岛素的敏感性降低、对葡萄糖的利用率降低以及抑制葡萄糖输出的作用减弱。三、简答题1、细胞中有多种RNA，请写出六种，并简述它们的功能。（没把握）答：mRNA:含有氨基酸编码信息，作为细胞内合成蛋白质的模板；tRNA:是蛋白质合成中的氨基酸转运载体；rRNA:与核糖体蛋白组成核糖体，为蛋白质合成提供场所；lncRNA:一般是指大于200nt的RNA.其生物学功能复杂。它能转录产生lncRNA的DNA序列，有的lncRNA能使基因沉默，而有的则能激活基因的表达，等等；miRNA:成熟的miRNA可以与AGO蛋白组成miRNA诱导的沉默复合体，发挥对蛋白质合成的调节作用；siRNA:双链siRNA的向导链可与AGO蛋白组成RNA诱导的沉默复合体，来识别、结合同源靶RNA分子并将其讲解，从而使相应基因沉默。2、简述蛋白质组学常用研究方法及其原理答：（1）2-DE-MALDI-MS2-DE(two-dimensionalgelelectrophoresis二维（双向）凝胶电泳)的原理是蛋白质在高压电场作用下，先进行等电聚焦分离，利用蛋白质分子等电点的不同使蛋白质得以分离；随后，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，使蛋白质再根据分子量大小进行分离。MALDI（基质辅助激光解吸附离子化）技术的基本原理：将样品与小分子基质混合共结晶，当用不同波长激光照射晶体时，基质分子所吸收能量转移至样品分子，形成带电粒子并进入MS进行分析，飞行时间与（m/z）^1/2成正比。MS（质谱）是通过测定样品离子质荷比（m/z）来进行成分和结构分析的方法。利用MS鉴定蛋白质主要通过两种方法：①肽质量指纹图谱（PMF蛋白质经过酶解成肽段后，获得所有肽段的分子质量，形成一个特异的PMF图谱）和数据库搜索匹配；②肽段串联质谱（MS/MS）的信息与数据库搜索匹配。（2）LC-ESI-MSLC（liquidchromatography液相色谱）的原理：将组织中提取的目标蛋白质混合物先进行选择性酶解，获得肽段混合物，再进行二维液相分离。一维液相分离一般采用强阳离子交换层析，利用肽段所带电荷数差异进行分离；二维液相分离常常采用纳升反相层析，利用肽段的疏水性差异进行分离。ESI（electrosprayionization电喷射离子化）基本原理：利用高电场，使MS进样端毛细管柱流出的液滴带电，带电液滴在电场中飞向与其所带电荷相反的电势一侧。液滴在飞行过程中变得细小而呈喷雾状，被分析物离子化成为带单电荷或多电荷的离子，使被分析物得以鉴定。MS（质谱）原理：同上.3、简述表皮生长因子受体（EGFR）介导的信号途径的信号转导过程答：EGF与EGFR结合，EGFR形成二聚体改变构象，PTK（proteintyrosinekinase）活性增强，EGFR通过自我磷酸化作用将其胞内区的数个酪氨酸残基磷酸化酪氨酸磷酸化的EGFR与生长因子结合蛋白（growthfactorbindingproteinGRB2）的SH2结构域结合GRB2的SH3区域识别结合SOS并使其活化SOS促进RAS（低分子量G蛋白）的GDP释放和GTP结合活化的RAS（RAS-GTP）作用于RAF（属于MAPKKK）活化的RAF作用于MEK（属于MAPKK）活化的MEK作用于ERK1（属于MAPK）至此完成了MAPK的三级磷酸化及激活过程活化的ERK转位至细胞核，使一些转录调控因子发生磷酸化，从而影响靶基因的表达水平，调节细胞对外来信号产生生物学应答。4、简述原发性肝癌发病的分子机制（没把握）答：（1）原癌基因的异常①点突变：原癌基因在射线或化学致癌剂作用下，可能发生点突变，从而改变表达蛋白的氨基酸序列，造成蛋白质序列的变异。(Eg.RAS基因突变为癌基因后，编码的RAS蛋白发生构型改变，其与GDP结合活性减弱，不需外界生长信号刺激即可与GTP结合而自身活化，导致细胞不可控制地增殖、恶变。)②病毒诱导：有的病毒DNA可以直接插入到肝细胞原癌基因附近，直接启动或增强原癌基因的表达；有的也可以先整合到肝细胞基因组DNA上，通过转录并翻译成蛋白质后，再激活自身基因或肝细胞的原癌基因。（eg.乙肝病毒（HBV））③基因扩增：原癌基因因某种原因发生自身扩增而过度表达，导致编码产物过量表达，细胞发生变化；④基因重排导致原癌基因在染色体上位置发生改变，使原来无（低）活性的原癌基因易位至启动子、增强子附近，形成融合基因，产生异常的蛋白质而使细胞转化。（2）抑癌基因的异常抑癌基因在物理、化学或其他致癌因素的影响下，发生突变、缺失或失活（eg.黄曲霉素（AF）的代谢产物AF-8,9-环氧化物，可与生物大分子结合，修饰DNA和大分子，这可能与P53基因的突变有关），使得细胞丧失由抑癌基因提供的抑制表达活化癌基因的肿瘤细胞的致癌性的功能（eg.P53基因突变失活后，其编码产物失去阻滞细胞周期、维持基因组稳定等功能，此外，失活的P53基因还下调野生型P53基因的抑制生长功能等等）5、简述利用RT-PCR方法进行基因表达半定量分析的原理。答：首先设置经过处理的细胞组和未经处理的细胞组（对照组），分别提取样品mRNA，并以之为模板反转录合成cDNA，然后再以cDNA为模板进行特异性扩增。得到扩增产物后进行电泳，通过条带的