机能实验家兔肠缺血再灌注损伤

家兔肠缺血/再灌注损伤Ischemia-reperfusionInjuryinRabbit(I/R)组员：张景帧孙艺王燕李蓉蓉宋天冬宋子夜掌握缺血再灌注损伤模型的复制，比较缺血损伤和缺血再灌注损伤的区别观察缺血再灌注损伤的表现，理解缺血再灌注损伤发生的机制【目的要求】【实验动物】家兔【实验器材】兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水【实验设计原理】通过肠系膜上动脉结扎，即SMAO(SuperiorMesenteryArteryOcclusion)来阻断部分肠的血液供应一段时间后再恢复血流灌注，以复制肠缺血/再灌注损伤的动物模型，探讨缺血/再灌注损伤的发生机制Ⅰ组：持续缺血组夹闭肠系膜上动脉1hⅡ组：再灌损伤组夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复血流30min【实验分组】【实验方法与步骤】1.称重2.全麻（耳缘静脉注射25%乌拉坦4ml/kg）★注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，排尽气泡，速度不宜太快★麻醉效果：角膜反射基本消失，钳夹家兔舌头无回收，四肢松软3.仰卧固定（背部交叉）、备皮颈部正中（甲状软骨下缘→胸骨上切迹）腹部正中（剑突下1.5cm起向下5cm）★注意：平贴皮肤剪毛，勿拎起皮肤！4.颈部正中切口行动脉插管切口范围：颈部正中，甲状软骨下缘→胸骨上切迹，长约5cm分离左侧颈总动脉：胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌之间深面的颈动脉鞘内，与气管平行，颜色鲜红、较细、触之有搏动感，长约2-3cm，穿线备用注意：（1）钝性分离（2）辨清颈A鞘内的血管神经血管插管先结扎远心端，后夹闭近心端，剪口部位尽量靠近远心端，成45度角朝向近心端剪一小口，约为管径的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.5cm【插管的注意事项】插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气泡，记录前应关闭三通管插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血管5.腹部正中切口：腹正中线自剑突下1.5cm起向下做5cm切口※6.寻找肠系膜上动脉：将家兔腹腔内脏左移，找到齐右肾门对侧垂直向腹主动脉分出的肠系膜上动脉，穿双线备用，注意避免损伤其他血管（缺血再灌注夹闭时注意垫橡皮管）7.记录一段正常血压曲线8.复制肠缺血-再灌注模型，轻轻提起肠系膜上动脉的穿线，用动脉夹夹闭，同时观察各项生理指标变化。9.分组进行实验并记录各项指标。（Ⅰ组：夹闭肠系膜上动脉1hⅡ组：夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复血流30min）肠系膜上动脉示意图1.移动内脏时，动作要轻柔2.分离肠系膜上A时需小心细致，不要使用锐利器械，以免损伤血管造成大出血3.肠系膜上A夹闭要彻底，缺血再灌注组结扎时注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全【注意事项】【结果分析】①峰表示：结扎肠系膜上A→血管床容量↓→有效循环血量相对↑→BP↑压力感受器(+)减压反射→BP↓②峰表示：松开肠系膜上A→血管床容量↑→有效循环血量相对→BP↓升压反射（再灌注损伤还未来得及发生）有时②峰不出现，BP↓直到死亡③血压持续下降，有再灌注损伤Ⅰ组：结扎→BP↑→BP↓趋于平稳（相似于结扎前），肠壁粉红→暗红（淤血）肿胀（水肿），无出血点Ⅱ组：结扎→BP↑→BP↓趋于平稳（机体自身调节）→再灌→BP↓，肠壁暗红、水肿、出血点BP低于正常1/2时→休克※Ⅰ、Ⅱ组比较说明：缺血损伤与是不同的损伤过程，损伤过程，后者损伤更严重【典型结果】【结果不明显可能存在的问题】（1）实验过程中是否发生了大血？（2）缺血是否完全？（3）再灌注是否通畅？（4）记录结果时基线是否改变？（5）个体差异【I/R的发生机制】（1）活性氧的作用）（2）钙超载）（3）白细胞的作用）（4）高能磷酸化合物生成障碍）（1）尽早恢复血流灌流，缩短缺血时间（2）再灌注时遵循低温、低压、低钙的原则（3）清除活性氧（4）Ca2+拮抗剂的使用（5）减少白细胞的激活和炎性介质的释放（6）补充能量及促进能量生成（7）启动细胞内源性保护机制【如何防治I/R】