AKP说明书

本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成碱性磷酸酶（AKP）测定试剂盒说明书一、原理：碱性磷酸酶分解磷酸苯二钠，产生游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉作用经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物，根据红色深浅可以测定酶活力的高低。二、试剂组成与配制：（50T）1、试剂一为缓冲液：30ml×1瓶，4℃冷藏保存3个月。2、试剂二为基质液：30ml×1瓶，4℃避光保存3个月。3、试剂三为显色剂：90ml×1瓶，4℃避光保存3个月。4、酚标准贮备液：0.5ml×1瓶，4℃避光保存3个月，浓度为1.1mg/ml。0.1mg/ml酚标准应用液配制：1.1mg/ml酚标准贮备液﹕蒸馏水=1﹕10稀释，现用现配三、操作：(一)、血清（浆）中AKP的测定：1、操作表：测定管标准管空白管血清（ml）0.050.1mg/ml酚标准应用液（ml）0.05双蒸水（ml）0.05缓冲液（ml）0.50.50.5基质液（ml）0.50.50.5充分混匀37℃水浴15分钟显色剂（ml）1.51.51.5立即混匀，520nm，0.5cm或者1cm光径比色，空白管调零，测各管吸光度。注：鸡血清（浆）中AKP活力较高，一般需要用生理盐水5倍或10倍稀释后待测2、单位定义：100ml血清在37℃与基质作用15分钟产生1mg酚为1个金氏单位。3、计算公式：mlmlmgml05.0100)005.0()100/(××=标准管含酚的量标准管吸光度测定管吸光度金氏单位碱性磷酸酶4、计算举例：取血清50μl进行AKP检测，测得各管吸光度：标准管0.250，测定管0.404，则计算如下：mlmlmlmgml100/16.1605.0100005.0250.0404.005.0100)005.0()100/(金氏单位标准管含酚的量标准管吸光度测定管吸光度金氏单位碱性磷酸酶=××=××=1本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成（二）、组织匀浆中AKP的测定：1、操作表：测定管标准管空白管1%组织匀浆(ml)0.030.1mg/ml酚标准液(ml)0.03双蒸水(ml)0.03缓冲液(ml)0.50.50.5基质液(ml)0.50.50.5充分混匀37℃水浴15分钟显色剂(ml)1.51.51.5立即混匀，520nm，0.5cm或者1cm光径比色，空白管调零，测各管吸光度。2、单位定义：每克组织蛋白在37℃与基质作用15分钟产生1mg酚为1单位。3、单位公式：取样量中的蛋白克数标准管含酚的量标准管吸光度测定管吸光度碱性磷酸酶÷×=)003.0()/(mggprotU4、计算举例：取1%鸡肝组织匀浆30μl进行AKP测定，测得各管吸光度为：测定管0.081，标准管0.194。同时测定该组织匀浆的蛋白含量为1.29ⅹ10-3gprot/ml。测计算如下：gprotUmggprotU/37.32)03.01029.1(003.0194.0081.0)003.0()/(3=××÷×=÷×=−取样量中的蛋白克数标准管含酚的量标准管吸光度测定管吸光度碱性磷酸酶南京建成生物工程研究所南京建成科技有限公司地址：南京市中央路258－27号电话：[phone]新立基大厦11层1106室8336096983113890邮编：21000983112287(财务)83360272(技术电话)联系人：季建平传真：（025）8322794383609960投诉电话：[phone]短信：13815858329建成主页：（建成生物）(建成科技)E-maiL:[e-mail]&[e-mail]2本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成标准曲线制作：管号加入物0123456781.1mg/ml酚标准(ml)00.0010.00250.0050.0100.0200.0300.0400.050水(ml)0.050.0490.04750.0450.0400.0300.0200.0100缓冲液(ml)0.50.50.50.50.50.50.50.50.5基质液(ml)0.50.50.50.50.50.50.50.50.5充分混匀,37℃水浴15分钟显色剂(ml)1.51.51.51.51.51.51.51.51.5立即混匀,在520nm处,1cm光径,0管调零,测各管OD值以所测得的吸光度为纵坐标，以相应的标准浓度单位为横坐标，绘制标准曲线。AKP标准曲线00.20.40.60.811.21.41.600.20.40.60.811.2酚标准浓度（mg/ml）绝对吸光度3