植物显微技术课程教案2004

植物显微技术课程教案学时学分：48学时，2.5学分课程性质：D2，专业选修课班级：2002.10-12，生物技术2000，44人（选课），两个实验班2003.10-12，生物技术2001，51人（选课），两个实验班2004.8-10，生物技术2002，43人（选课），两个实验班课程内容：讲解植物显微技术的原理和方法，并最终使学生掌握植物石蜡制片的方法及其各个环节的原理和技术要点课程安排：上课约5次，10个学时，学习植物显微技术的基本原理。其余时间分为9次实验，系统学习植物石蜡制片技术，在实验中熟悉、巩固和扩展植物制片的基本理论和技能。所以本课程是以实验为主的课程。实验分组：实验中每两个同学组成为一个实验小组。每个实验小组从取材料开始，完成石蜡制片的全过程。各个实验小组所用的实验材料互不相同。实验中有些环节需要几个实验小组的同学相互配合，形成实验大组。如脱水、透明、浸蜡、包埋等环节是全天连续而不能间断的过程，需要几个实验小组的同学轮流替换，才能完成。实验要求：要求每个小组独立制作的、合格的石蜡制片不少于20片。以小组为单位认真写出实验报告。成绩评定：学生成绩由三个部分构成（1）上课及参加实验的考勤（占30％）（2）合格制片的数量及质量（占50％）（3）试验报告写作的认真程度，及其对实验过程中问题分析的情况（占20％）参考教材：生物学显微技术.余炳生张仪北京农业大学出版社，1989植物组织制片学.李正理.北京大学出版社，1996生物显微技术.郑国昌人民教育出版社，1978讲课内容和学时安排：讲课内容学时第一章概论一、生物制片的目的0.5二、生物制片的类型1.5第二章石蜡制片第一节石蜡切片的应用范围0.5第二节石蜡切片的步骤和原理3.5第三章显微镜：第一节显微镜的种类1第二节（复式）显微镜的主要结构3第三节各类研究用显微镜1讲课总学时10实验内容和学时安排：实验序号实验名称实验内容实验所需要的时间实验一取材和固定清洗器皿、配置FAA固定液，取材和固定。材料固定时间4小时以上4小时以上实验二脱水和透明配制各级叔丁醇脱水剂，从低浓度开始将材料逐级进入脱水剂，每级脱水约2小时10小时实验三浸蜡材料在装有叔丁醇和蜡的蜡管中，并在58-60℃温箱中4-8小时或过夜。4小时以上实验四包埋折小纸盒若干，将60℃融化的纯石蜡倒入小纸盒中，再快速将材料埋入纸盒的蜡中4小时以上实验五修蜡块和粘蜡块锯小木块多个作为蜡台，将包埋有材料的蜡块用锋利的刀片修理成一定大小的规则形状，再借助于酒精灯把小蜡块粘牢固在蜡台上2小时以上实验六切片、展片和粘片在自动磨刀机上磨刀，清洗载玻片，配制粘片剂，在旋转切片机上切片，镜检，在展片台上展片，粘片6小时以上实验七脱蜡、复水、染色和透明配制各级浓度的酒精，配制番红染液和固绿染液，依次使材料（切片）脱蜡、复水、染色（含镜检）和透明6小时以上实验八封片、清洗和贴标签清洗盖玻片，用树胶封片，最后清洗和贴标签2小时以上实验九植物显微摄影利用选进的尼康E800显微镜，学会植物显微摄影的基本操作2小时以上实验学时合计38学时以上目录第一章概论............................................................................................................................4一、生物制片的目的..............................................................................................4二、生物制片的类型..............................................................................................4第二章石蜡制片....................................................................................................................8第一节石蜡切片的应用范围........................................................................................8第二节石蜡切片的步骤和原理....................................................................................8一、选材..................................................................................................................8二、杀死、固定和保存..........................................................................................8三、冲洗与脱水....................................................................................................12四、透明................................................................................................................13五、浸透（透蜡）和包埋....................................................................................14六、切片................................................................................................................16七、展片和粘片（贴片）....................................................................................17八、染色................................................................................................................18九、封固（封片）................................................................................................21第三章显微镜......................................................................................................................22第一节显微镜的种类..................................................................................................22第二节（复式）显微镜的主要结构..........................................................................22一、物镜................................................................................................................22二、目镜................................................................................................................25第三节各类研究用显微镜..........................................................................................25附件1植物学实验室工作的注意事项.......................................................................27附件2石蜡制片流程及要点.......................................................................................28附件3植物制片的时间安排.......................................................................................36附表4植物切片实验记录...........................................................................................34附件5植物显微技术实验报告的基本内容...............................................................35第一章概论一、生物制片的目的把想要观察的材料制作成适合于在显微镜下观察的薄片，以显示其组织和细胞的结构。二、生物制片的类型（一）临时制片：1.活体制片法（一种临时制片）将生物个体或一部分置于载玻片上，加水和盖玻片进行观察。优点：简单、省时，能进行活体观察；缺点：常因组织过厚光线不易透过，活体材料多为无色，未染色，观察效果差，不易长期保存。（二）永久制片：1.切片法用锋利的刀片将材料切成薄片，便于在显微镜下观察。为了能够切出薄而且完整的切片，对幼嫩的材料（如，幼嫩的根尖、茎尖、叶片等）必须进行包埋，对坚硬的材料（如木材、竹材）必须进行软化而不用包埋。本法在生物制片技术中最为重要。分为：（1）徒手切片法（2）石蜡切片法（3）火棉胶切片法由于过程复杂，已经较少应用。用滑动切片机切片。适用于一些质地十分坚硬，脆而且易折或过软的材料，效果较好。火棉胶是一种硝化纤维素，易燃烧。火棉胶可以购买（火棉胶片或火棉胶乙醚或纯酒精液），也可以自制。自制火棉胶：见照相的底片除去药膜，溶于等量的乙醚或纯酒精中，配制成不同浓度的火棉胶液。制片原理：材料经过固定、脱水，火棉胶液浸泡，火棉胶包埋，滑动切片机切片，脱胶，染色，脱水，透明封片。（4）冰冻切片法特别适用于水分多，柔软，而且容易收缩的材料，如动物组织，用滑动切片机或旋转切片机，配上制冷装置。（5）木材切片法（滑走切片法、软化切片法）（生物学显微技术.余炳生：58）适用于坚硬的木材、竹材、骨质的切片。材料需要软化，常用的软化剂和软化法有：●甘油酒精法：纯甘油1份＋50％酒精1份，浸泡●氢氟酸法：用10－30％的氢氟酸水溶液浸泡材料，能分解材料中的矿物质（如竹材表皮的硅质）。之后用水清洗几个小时后，再用甘油酒精液浸泡。●醋酸纤维素法：适用于极坚硬的木材（如栎类、榉木）材料浸入酒精中1－2天移入纯丙酮中约2小时，除去酒精移入12％移入醋酸纤维素丙酮液，不加热或加热到40度软化后的材料，可以丙酮液中溶去醋酸纤维素。●石炭酸软化法材料用95％酒精饱和石炭酸液浸泡，60度水浴加热●冰醋酸、双氧水（1：2）法溶液量要超过材料的20倍以上，水浴加热2.非切片法（不用刀）（1）离析法利用化学药剂，如烙酸、硝酸等的作