情志刺激法建立肝郁脾虚模型的研究

1情志刺激致大鼠肝郁脾虚证模型的研究郭建丽冯玛莉*（山西省中医药研究院，山西太原030012）摘要：目的采用慢性束缚加饮食失节孤养模拟肝郁脾虚病因，创立复合病因大鼠造模方法。方法：将模型大鼠束缚于钢丝网笼中，令其肢体不能自由活动，每日束缚6h，每笼一只孤养，每周不定时的禁食两次，连续3周；另设疏肝健脾方逍遥丸、疏肝泻火方龙胆泻肝丸正常对照鼠一笼合养，自由活动、饮水。结果模型对照组大鼠体重增长、糖水消耗量、水平运动和垂直运动显著低于空白对照组、水中静止时间显著高于空白对照组，血红蛋白、血小板减少、胸腺指数和脾指数、5-羟色胺和多巴胺含量显著低于空白对照组，逍遥丸组显著体重增长、糖水消耗量、水平运动和垂直运动、血红蛋白、血小板减少、胸腺指数和脾指数、5-羟色胺和多巴胺含量显著高于模型对照组，水中静止时间显著低于模型对照组。结论慢性束缚加饮食失节加孤养模拟情志病因建立肝郁脾虚模型，其指标改变基本符合肝郁脾虚模型症状体征，疏肝健脾方逍遥丸改善模型大鼠症状体征，疏肝泻火方龙胆泻肝丸有一定的作用，表明肝郁脾虚模型。关键词：情志刺激；肝郁脾虚；模型OldstimulationmethodtoestablishthemodelofthespleendeficiencystomachGUOJian-li,FENMa-li(ChineseMedicineInstituteofShanxi,Taiyuan,030012,China)Abstract:ObjectiveThechronicbound+dietdishonorofasolitary+methodcopythespleendeficiencystomachmodel,foritsfurtherdevelopmentandresearchtoprovidethescientificbasisMethodsMaleandfemalemicehalfandhalf,,itwillberandomlydividedintoblankcontrolgroup,modelcontrolgroup,freeandunfetteredscatteredgroup,atonicdiarrhealiversoupgroups,andtheonly10.Compositecausesownratmademodemethod:willbuildmodelratsinhomemadesteelwireWangLong,makeitsbodyandlimbsnotfreeactivities,normalgrouponlyacage$5a,modelcontrolgroup,freeandunfetteredscatteredgroup,atonicliversoupgroupdiarrhea,laboratorymiceeverycageasolitaryraise,dailybound6h,from9am-3PM.Aweekofratstimingfasttwice,timeofthemouldmade3weeks.ResultsAndblankcomparedtothemodelcontrolgroupofratsweightaslow,sugarwaterconsumptionislow,thehorizontalmovementand2verticalmotioninthewater,reducestatictimeincreases,thethymusandspleenindexindexislow,freeandunfetteredscatteredtotheratofsymptomswereobviouslyimproved,purgingtoniclivergrouphascertaineffect.ConclusionsEstablishmentofTCMsyndromewithcharacteristicsofthespleendeficiencystomachmodelhasanimportantmeaning,andthroughthechronicbound+dietdishonorofasolitary+methodcancopythespleendeficiencystomachsuccessfulmodel.KEYWORDS:Sentimentwillstimulate;Spleendeficiencystomach;model肝郁脾虚证是中医脏腑最常见的病理证候之一。据统计，中医五藏中发病率最高的是肝脏——占五藏发病的39.6％，肝郁证及其相兼证候则占肝病总数的41.9%[1]。肝郁脾虚证的基本病变是肝失疏泄，脾失健运，主要表现为：精神抑郁，情绪不宁、胸胁胀闷或易怒善哭、脘闷嗳气，不思饮食，大便不调为特征的一类临床病证，其形成多与现代抑郁、焦虑、悲痛等负面情绪心理应激状态有关。从现代医学观点来看，涉及神经、消化、免疫等多系统的功能改变。本实验模拟现代人的情志不遂致病的病因病机，采用慢性束缚加饮食失节孤养的方法创制，通过公认的实验性肝郁脾虚症状、体征和相关指标的测试，并设疏肝健脾经方逍遥丸、疏肝泻火方龙胆泻肝丸为对照，佐证肝郁脾虚模型制备成功，为研究肝郁证病理、从肝辨证论治以及疏肝药的研发提供基础研究。1材料1.1动物大鼠，SD种，体重(200±20)g，清洁级，山西省中医药研究院实验动物室提供，实验动物生产许可证编号为SCXK（晋）2010-002。1.2药物：逍遥丸：国药准字Z14020866，山西杨文水制药有限公司，批号：101220；功用疏肝健脾；龙胆泻肝丸：国药准字Z20020013，石家庄神威药业有限公司，批号：10101511；功用疏肝泻火；用时以蒸馏水配制成20%的混悬液，每只大鼠的给药量4g/kg·d，根据大鼠体重以0.2ml/kg灌胃。1.3仪器动物血球计数仪：ABC，法国ABX；高架十字迷宫：PM-200，成都泰盟科技有限公司；八臂迷宫测试系统：RM-200，成都泰盟科技有限公司；电子天平：BP-310S，德国赛多利斯天平有限公司；低速离心机：KDC-1044，科大创新股份有限公司中佳分公司。2方法2.1自创复合病因大鼠造模法3将造模大鼠放入自制的钢丝网笼中，令其身躯及四肢不能自由活动，正常组5只一笼合养，模型对照组、逍遥丸组、龙胆泻肝丸组，实验鼠均每笼一只孤养，每日束缚6h，从9：00am～3：00pm。每周给大鼠不定时的禁食两次，造模时间3周。2.2分组与给药实验鼠雌雄各半，将其随机分为空白对照组、模型对照组、逍遥丸组、龙胆泻肝丸组，每组各10只。灌胃量为0.2ml/kg，给药量为4g/kg·d，自模型制备后给药，每日一次，连续3周。2.3观测指标2.3..1一般情况观察：包括眼睛状态、日常理毛皮毛变化、对外界刺激的反应、大便性状、挣扎时的表现、精神状态[2]。2.3.2精神行为学指标测试：蔗糖水偏嗜度：给大鼠两瓶水，一瓶为1%的蔗糖水，一瓶为自来水，并称重，24h后，再次称重，计算大鼠糖水偏爱(糖水偏爱=糖水消耗/总液体消耗×100%)[3]、高架十字迷宫测试[4]：用仪器来进行测量(八臂迷宫测试系统：RM-200，成都泰盟科技有限公司)。强迫游泳实验[5]：用桶盛水，记录大鼠5min中内攀爬、游泳、静止的时间。自主活动实验[6]：自制开野箱，观察5min内大鼠的活动情况（水平穿格数和站立次数）。2.3.3血液学指标检测：动物血球仪测定血红蛋白含量和血小板计数。2.3.4免疫器官指数：剖取脾脏、胸腺，称重计算脾脏、胸腺指数（mg/g）。2.3.5相关生化指标检测：大鼠断头，取脑组织，称重后置含有其脑重10倍生理盐水的匀浆器中，冰水浴中匀浆，离心。用荧光分光光度法测定脑组织中多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）的含量。2.4统计学方法实验数据x±s表示，应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，多组间数据采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。3结果3.1一般情况变化：表1一般外观行为观察观察项目眼睛日常理毛，皮毛变化对外界刺激的反应大便（色，质，大小，数量）挣扎时的表现精神状态4（三线表；表中症状、体征要量化；表1、表2合并。）3.2精神行为学变化表2肝郁脾虚大鼠1%蔗糖偏爱度%（x±s）空白对照组与模型对照组、逍遥丸组、龙胆泻肝组相比均有有统计学意义（P0.05），表示造模均成功。模型对照组与逍遥丸组比较有统计学意义（P0.05），与龙胆泻肝组比较没有统计学意义（P0.05）。说明逍遥丸对肝郁脾虚模型可以起到较好的治疗作用，同时也间接说明肝郁脾虚模型造模成功。龙胆泻肝对肝郁脾虚模型可以起到一定作用，但疗效不显著，同时也间接说明此动物模型非肝郁化火证型。表3肝郁脾虚大鼠高架十字迷宫、自主活动、强迫游泳测试（x±s）组别高架十字迷宫自主活动强迫游泳OE+CEOT%OE%水平运动垂直运动游泳攀爬静止空白对照组活动灵敏有神日常理毛活动频繁，皮毛光泽度好对外界刺激反应灵敏，警觉度高大便色暗，颗粒饱满，量多挣扎时有力精神好模型对照组眯小无神日常理毛活动少，皮毛不泽，甚者稀疏对外界刺激（声音、拨弄等）反应迟钝大便色浅，质软甚者稀溏，颗粒变小，量少挣扎时无力且挣扎时间短精神萎靡，困倦嗜睡逍遥丸组活动稍迟较有神日常理毛活动逐渐增强，皮毛光泽度较好对外界反应较灵敏大便色暗，颗粒较饱满，量中等挣扎时较有力精神较好龙胆泻肝组活动迟钝略有神日常理毛活动较少，皮毛不泽对外界反应稍迟钝大便色较浅，颗粒稍小，量偏少挣扎时力弱精神稍萎靡，不嗜睡组别1%蔗糖偏爱度%空白对照模型对照逍遥丸龙胆泻肝丸88.15±3.9196.67±1.74*92.93±2.2*▲93.86±2.10*5空白对照组模型对照组逍遥丸组龙胆泻肝丸28.1±6.325.0±9.429.3±9.319.0±9.7**16.3±9.6**11.1±9.3**23.5±7.9**▲21.8±12.4**▲21.8±12.4**▲21.1±3.2*19.3±3.6*19.3±3.6*41.0±7.613.5±2.528.9±5.5**8.6±2.3**36.2±4.6*▲▲12.2±1.7*▲▲33.7±5.5*▲10.5±3.0*▲109.3±32.6157.5±27.948.7±19.773.1±17.9**108.2±25.2**104.3±39.5**87.5±17.5*▲119.2±42.9*▲79.2±25.3*▲83.3±19.9*130.0±17.0*78.3±20.2*空白对照组与模型对照组、逍遥丸组、龙胆泻肝组相比显著降低，有统计学意义（P0.05或P0.01）。表示造模均成功。模型对照组与逍遥丸组比较有统计学意义（P0.05），与龙胆泻肝组比较没有统计学意义（P0.05）。3.3血液学指标。空白对照组与模型对照组、逍遥丸组、龙胆泻肝组相比均有有统计学意义（P0.05），表示造模均成功。模型对照组与逍遥丸组比较有统计学意义（P0.05），与龙胆泻肝组比较没有统计学意义（P0.05）。表4肝郁脾虚大鼠血常规、免疫器官指标（x±s）组别血常规免疫器官血红蛋白血小板脾脏系数（mg/g体重）胸腺系数（mg/g重）空白对照组12.7±1.7787.1±130.50.18±0.30.14±0.51模型对照组7.3±1.0*314.9±55.2*0.15±0.27*0.97±0.29*逍遥丸组9.9±3.9*▲644.8±105.1*▲0.17±0.7*▲0.14±0.69▲龙胆泻肝组7.9±0.9*358.2±74.1*0.17±0.4*0.10±0.23注：正常大鼠血红蛋白的参考值范围9.0~15.0，血小板参考值范围300~999。3.5生化指标空白对照组与模型对照组、逍遥丸组、龙胆泻肝丸组相比有有统计学意义（P0.05），表示造模成功。模型对照组与逍遥丸组比较有统计学意义（P0.05或P0.01），与龙胆泻肝丸组比较没有统计学意义（P0.05）。表5肝郁脾虚