控制性低中心静脉压对兔肝缺血再灌注损伤保护作用的研究

控制性低中心静脉压对兔肝缺血再灌注损伤保护作用的研究重庆医科大学附属第一医院麻醉科400016邓圻玮希闵苏何开华程波【摘要】目的研究控制性低中心静脉压（CLCVP）对肝缺血再灌注损伤（IRI）后肝脏血流速度、生化及肝脏超微结构的变化，了解其肝保护作用。方法新西兰大白兔32只，随机分为4组：对照组（C组）、单纯CLCVP组（L组）、肝IRI组（IR组）、CLCVP下肝IRI组（LIR组）。麻醉后，L组建立CLCVP模型（CVP4-5cmH2O,MAP≥90mmHg），IR组建立肝IRI模型(夹闭肝门1/2h后开放)，LIR组建立CLCVP模型和肝IRI模型。分别于各组处理前(T0)、CLCVP模型建立(肝IRI血流开放)即刻(T1)、1/2h(T2)、1h(T3)、2h(T4)、4h(T5)、6h(T6)时点，彩色超声测肝血流速度，抽静脉血检测ALT、AST。各组取肝组织固定，电镜观察细胞超微结构变化。结果1、与C组比，L组各时点间肝脏动静脉流速差异无统计学意义，IR组T1-5时点肝动脉流速减慢(P0.05)，IR组T5、6时点及LIR组T1-6时点肝静脉流速增快(P0.05)；与IR组比，LIR组T1、2时点肝动脉流速增快(P0.05)，LIR组T1-6时点肝静脉流速增快(P0.05)。2、L组各时点AST和ALT较C组差异无统计学意义。IR组和LIR组T1-6时点AST、ALT较C组和L组增高(P0.05)；IR组T1、T4-6时点ALT和AST值均高于LIR组(P0.05)。3、C组和L组超微结构未见异常。LIR组较IR组肝细胞线粒体肿胀减轻，血窦面微绒毛稍有肿胀，肝血窦覆盖完整。结论CLCVP对肝IRI有一定保护作用，其机制可能与改善肝IRI后肝血流情况，减轻肝细胞及肝血窦损伤，改善器官灌注有关。【关键词】控制性，中心静脉压；缺血再灌注；肝保护；血流速度StudyofprotectionofcontrolledlowcentralvenouspressuretohepaticischemiareperfusioninjuryinrabbitsDENGQi-wei-xi,MINSu,HEKai-hua,etal.DepartmentofAnesthesiology,FirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,ChinaCorrespondingauthor:MINSu(E-mail:[e-mail])[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofcontrolledlowcentralvenouspressure(CLCVP)onbloodflowvelocity，biochemicalindicatorsandultramicrostructureofrabbitliverafterhepaticischemiareperfusioninjury(IRI).MethodsThirty-twohealthyNewZealandwhiterabbitsofbothsexeswererandomlydividedinto4groups(n=8each):groupⅠcontrol(C),groupⅡCLCVPwithnoIRI(L);groupⅢIRI(IR);groupⅣCLCVP+IRI(LIR).Theanimalswereanesthetizedwith3%pentobarbital30mg/kgthroughearmarginalvein,intubatedandmechanicallyventilated.IngroupLandLIRnitroglycerin10-30μg·kg-1·min-1anddopamine40-50μg·kg-1·min-1werepumpingviafemoralveintoestablishtheCLCVPrabbitsmodel(CVP4-5cmH2O,MAP≥90mmHg).IngroupIRandLIRhepaticIRImodelwasproducedbyoccludingporterveinandhepaticarteryfor30minutesfollowedbyreperfusion.ThecontentsofserumALT,ASTandbloodflowvelocityofhepaticarteryandveinweremeasuredafteranesthesia(T0)andatimmediately(T1),1/2h(T2),1h(T3),2h(T4),4h(T5),6h(T6)afterCLCVPmodelingorIRIreperfusion.Ultramicrostructureofliverwasobservedbytransmissionelectronicmicroscope(TEM)after6hreperfusion.ResultsTherewasnosignificantdifferenceinbloodflowvelocityofhepaticandtheserumASTandALTbetweengroupCandL.BloodflowvelocityofhepaticarterywassignificantlysloweratT1-5ingroupIRthaningroupC,andsignificantlyfasteratT1-2ingroupLIRthaningroupIR.BloodflowvelocityofhepaticveinwassignificantlyfasteratT5-6ingroupIRandT1-6ingroupLIRthaningroupC,andwassignificantfasteratT1-6ingroupLIRthaningroupIR.TheserumALTandASTconcentrationwassignificantlyhigheratT1-6ingroupIRandLIRthaningroupCandL,andtherewasnosignificantlydifferencebetweengroupCandL.TheserumALTandASTconcentrationwassignificanthigheratT1,T4-6ingroupIRthaningroupLIR.ThedamagetolivertissuewassignificantlyamelioratedingroupLIR.ConclusionControlledlowcentralvenouspressurecanattenuatehepaticischemiareperfusioninjury.【Keyword】controlled；centralvenouspressure；liverfunction；ischemiareperfusioninjury；bloodflowvelocity控制性低中心静脉压(Controlledlowcentralvenouspressure,CLCVP)指通过麻醉及其它医疗手段将CVP控制在3～5cmH2O，同时维持动脉收缩压≥90mmHg和心率稳定，以减少术中出血。肝脏手术术中大量出血和肝缺血再灌注损伤(Ischemiareperfusioninjury，IRI)是术后并发症和死亡的主要原因。有研究[1、2]证实CLCVP技术应用于肝脏手术能有效地减少术中出血和血制品的输注，缩短手术时间，但其血流动力学改变对肝脏及其他重要脏器的灌注是否有影响尚存在争议[3]。因此，本研究拟探讨该技术对肝IRI后肝血流速度变化、肝功能以及肝超微结构的影响，对其在肝脏手术中的临床应用提供参考。材料与方法小动物呼吸机(TKR-200A型，南昌特力麻醉呼吸设备公司)，双通道微量注射泵(WZS-50F6，浙江大学医用仪器有限公司)，BL-410生物机能实验系统（成都泰盟科技有限责任公司），彩色超声多普勒诊断仪(GEV730，美国通用电气公司)，752紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司），电镜（H-7500，Hitachi，日本），谷草转氨酶（GOT/AST）比色法试剂盒（长春汇力生物技术有限公司），谷丙转氨酶（GPT/ALT）比色法试剂盒（长春汇力生物技术有限公司）成年新西兰大白兔32只(重庆医科大学实验动物中心提供)，雌雄不拘，体重1.9-2.2kg。随机分为4组（n=8）：对照组（C组）、单纯CLCVP组（L组）、肝IRI组（IR组）、CLCVP下肝IRI组（LIR组）。耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，仰卧固定于兔台。气管切开接小动物呼吸机机械通气；分离右颈内静脉和左颈总动脉，插管监测CVP、MAP；分离右股静脉置管。L组、LIR组建立LCVP模型：泵入硝酸甘油10-30μg·kg-1·min-1、多巴胺30-40μg·kg-1·min-1，将CVP降至4-5cmH2O，并维持MAP≥90mmHg。IR组、LIR组建立IRI模型：脱毛，逐层入腹，用无创动脉夹夹闭肝门，阻断血流1/2h后开放。在各组处理前(T0)、LCVP模型建立(IRI血流开放)即刻(T1)、1/2h(T2)、1h(T3)、2h(T4)、4h(T5)、6h(T6)各时点，彩色超声测门静脉、肝静脉、肝动脉血流速度，抽血检测ALT、AST。6h后取肝脏，快速制备数个1×1×1mm大小组织块，置于4℃4%戊二醛中固定，常规透射电镜制样，观察肝细胞超微结构。应用SAS8.2统计软件分析处理数据，计量资料用均数±标准差(x±s）表示，采用重复测量数据方差分析，P0.05为差异有统计学意义。结果与C组比，L组各时点间肝脏动静脉流速差异无统计学意义，IR组T1-5时点肝动脉流速减慢(P0.05)，IR组T5、6时点及LIR组T1-6时点肝静脉流速增快(P0.05)；与IR组比，LIR组T1、2时点肝动脉流速增快(P0.05)，LIR组T1-6时点肝静脉流速增快(P0.05)，见表1-3。表1各组各时点门静脉血流速度的比较(n=8，cm/s，x±s)与C组比，P0.05,表2各组各时点肝静脉血流速度的比较(n=8，cm/s，x±s)分组T0T1T2T3T4T5T6C组7.73±1.348.26±2.167.75±4.178.48±3.208.98±2.749.48±3.328.95±1.22L组9.03±1.1315.88±7.6714.10±5.3712.90±4.0714.39±5.1015.65±2.6513.23±4.82IR组10.08±1.785.69±3.607.43±2.6910.40±4.7111.83±3.6822.73±16.05*20.00±12.33*LIR组10.18±1.4927.08±13.89*#△32.25±17.46*#△35.05±10.00*#△38.75±7.14*#△34.25±8.26*#△33.50±9.95*#△与C组比，*P0.05,与L组比，#P0.05,与IR组比，△P0.05分组T0T1T2T3T4T5T6C组10.2±0.7311.59±5.88.70±2.2410.60±2.8912.25±2.0612.25±2.5012.58±4.57L组11.8±1.6215.08±3.3013.00±2.8314.50±2.6512.65±2.8013.63±3.6812.53±4.17IR组10.93±1.5812.28±2.6015.10±3.6013.55±3.2719.80±2.1814.48±2.2117.25±2.06LIR组10.6±1.0814.00±4.0013.67±3.0613.87±1.8016.33±2.0814.33±4.0413.33±3