常见性病实验室检测方法的原理方法和临床意义101018

常见性病实验室检测方法的原理、方法和临床意义病原体淋球菌梅毒螺旋体生殖器疱疹病毒生殖道沙眼衣原体乳头瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血杆菌衣原体念珠菌滴虫疥虫阴虱肝炎病毒－－－病种淋病梅毒:生殖器疱疹:生殖道沙眼衣原体感染:尖锐湿疣:HIV感染/艾滋病:软下疳:性病性淋巴肉芽肿:念珠菌性阴道炎:滴虫性阴道病:疥疮:阴虱病:肝炎（乙、丙）：－－－性传播疾病(STD)/性传播感染(STI)梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎生殖器疱疹尖锐湿疣HIV/AIDS梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿50-60年代经典性病80-90年代监测性病目前传染法报告病例监测性病梅毒淋病沙眼衣原体感染生殖器疱疹尖锐湿疣我国主要流行的性传播疾病（性病）沙眼衣原体:30%～50%生殖支原体:10%～40%其它:20%～30%梅毒淋病HIV/AIDS性病实验室检测方法规范化方法、试剂评估技术规范临床应用：敏感性、特异性疾病筛查：快速、简便、敏感血液筛查：大通量、高敏感流行病学调查：取材方便、人员培训管理骨干培训技术培训主要常见性病实验室检测介绍梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹阴道滴虫病细菌性阴道病生殖器念珠菌病一、梅毒全国梅毒检测技术规范7梅毒及其病原体样品的采集和处理病原学检测血清学检测核酸检测实验室生物安全梅毒血清学检测实验室质量管理常用梅毒检测方法病原学检测血清学检测病原学检查原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法病原学检查的临床意义1.病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。2.螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。3.如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，梅毒血清学检测分类(1)非梅毒螺旋体抗体检测试验（非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗体检测试验（特异性梅毒抗体）两类方法。非梅毒螺旋体抗体试验1、原理：梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体2、方法：快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）性病研究实验室试验(VDRL)等。RPR结果非梅毒螺旋体抗体试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。梅毒螺旋体抗体试验1、原理：用梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体2、方法：梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）化学发光试验梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(TP-RT)FTA-ABS梅毒IgM抗体检测（TP-IgM）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WB）等梅毒螺旋体抗体试验临床意义作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。非梅毒螺旋体抗体试验结果解释示意图早期晚期一期二期早期潜伏晚期潜伏三期治疗前治疗后阳性阴性梅毒螺旋体抗体试验结果解释示意图早期一期二期早期潜伏晚期晚期潜伏三期治疗前治疗后阳性阴性梅毒血清学试验结果的临床意义总汇USRTPPA意义RPRTP-ELISAVDRLTP-RT__排除梅毒一期梅毒的早期++现症梅毒(梅毒孕妇所生的婴儿除外)+-生物学假阳性-+早期梅毒经治疗后梅毒血清学检测意义检测目的:临床诊断、血液筛查、流行病学监测以临床诊断为目的的检测是为了确定梅毒感染的状况。以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒的经血传播。以流行病学监测为目的的检测是为了调查梅毒血清学感染率和发病率。梅毒血清学检测检测策略及要求检测策略以临床诊断为目的两种策略以血液筛查为目的的检测策略以流行病学监测为目的的三种检测策略检测要点根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。检测试剂要求所有应用于临床的检测试剂均必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，有批批检合格证的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。二、淋病常用淋病检测方法直接显微镜检查分离培养淋球菌直接显微镜检查原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黄白色脓性分泌物，其多形核白细胞内可找到革兰染色阴性的双球菌。方法：革兰染色为一传统方法，革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。直接显微镜检查的临床意义男性淋菌性尿道炎的尿道标本敏感性及特异性可高达95%～99%，具诊断价值。宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时敏感性仅40～70%。不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。淋球菌培养1．原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。2、方法特点：敏感性81~100%。特异性100%—淋球菌培养培养条件：35℃～36℃，含5%～10%CO2，湿润（70%湿度）的环境。CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。培养时间：24~48小时淋球菌的初步鉴定初步鉴定淋球菌的依据菌落特征氧化酶试验革兰染色淋球菌培养的临床意义培养法为诊断淋病的金标准.用于女性感染者、亚临床感染者、以及来自直肠和咽部的感染的确诊试验。生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染简介50年代80年代梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎生殖器疱疹尖锐湿疣HIV/AIDS2007年后梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹尖锐湿疣HIV/AIDS常用生殖道衣原体感染检测方法抗原检测酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫层析快速检测核酸检测酶联免疫吸附试验1、原理：于衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测衣原体抗原。2、方法特点敏感性：79－97％特异性:97－99％试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原体感染的检测。在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体检；低流行率（小于5%）的人群中应用时，结果解释应慎重。酶联免疫吸附试验临床意义抗原快速检测1、原理：利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗原。2、方法特点简易，方便，快速，尤其适用于基层单位标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果抗原快速检测临床意义该方法主要适用于女性患者宫颈标本的检测，敏感性较低。该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，较适合基层实验室开展。核酸扩增检测1、原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。2、方法包括聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、等温链置换扩增技术（SDA）、转录介导扩增技术（TMA）等。目前国内广泛使用的有实时荧光PCR。核酸扩增检测临床意义核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。方法评价核酸检测是目前为止最好的检测方法－但存在检测敏感性上的局限性ELISA抗原检测严格按操作说明进行操作－是非常好的检测方法高通量，自动化快速抗原检测操作时间短，单人份操作，但敏感性极低生殖器疱疹常用生殖器疱疹检测方法抗原检测抗体检测抗原检测1、原理：将HSV特异性单克隆抗体包被在酶标板微孔壁上，捕获标本中的HSV抗原，形成抗原抗体复合物，继而与酶标记的二抗结合，通过酶联显色反应检测HSV。2、方法：ELISA为目前临床上HSV抗原检测的常用方法之一抗原检测临床意义生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，临床诊断的准确性不足50%～70%，通过实验室检测手段可确证HSV感染抗体检测原理：将HSV特异性抗原包被在酶标板微孔底上，捕获标本中的HSV抗体，形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测HSV抗体。方法：有检测IgG和IgM两种ELISA方法抗体检测临床意义检测抗HSV抗体的血清学试验可用于证实既往HSV感染、回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大。HSV型特异性血清学抗体检测是发现亚临床无症状生殖器HSV感染者的手段之一。显微镜检查：生理盐水湿片法（幻灯）染色法特点:简便、快速、价廉敏感性只有38%～82%滴虫培养是诊断滴虫病的金标准,敏感性达95%阴道滴虫病细菌性阴道病均质稀薄的白色阴道分泌物pH4.5胺臭味试验阳性线索细胞阳性符合上述4项中3项为阳性可诊断BVAmsel综合临床体征指标生殖器念珠菌病直接涂片镜下见念珠菌略带绿色折光的假菌丝和成群的卵圆形孢子或芽生孢子，直径约3～5μm。假菌丝节间有明显的狭窄部，芽孢往往集中于菌丝分隔处，偶尔可见到分隔的真菌丝。培养（菌种鉴定）谢谢!