实验中可能出现的常见问题与解决办法

实验中可能出现的常见问题与解决办法一．污染污染是指由于微生物的侵染，在组织培养容器中滋生大量菌斑，使组培材料不能正常生长和发育的现象，主要有以下5方面的原因：1.器具灭菌：实验的所有器具都要在121°C消毒25min，若灭菌温度不够或者时间不足，都会导致污染。灭菌时要求冷空气完全排除，否则会达不到指定温度。其次，要做好灭菌登记，杜绝出现人为失误造成的污染。此外，在接种过程中，每用一次都要在火焰上彻底灼烧，特别在接触到污染物时极易引起器具污染。2.外植体：很多材料在灭菌后其实还是带菌的，不过量比较少，短期应该观察不到被感染的现象。3.接种操作：首先，接种人员的手，手腕要用酒精棉球好好擦拭。其次，对于放置在外的培养物（灭菌好的培养基）其瓶子外壁上有灰尘与微生物，放入超净台前可以用酒精消毒一下。再者，很容易出现瓶口的污染，所以接种人员的技术要娴熟，干练。4.环境条件：加强环境的灭菌消毒。若有污染的材料不可以就地清洗，必须高压杀菌后再清洗，否则会导致大量孢子弥漫。此外，要及时打扫卫生，定期蒸熏消毒。保证环境的干净。5.超净工作台：要定期对初过滤器进行清洗和更换。此外，每次使用前要提前20min打开机器预处理，并对台面进行酒精喷雾消毒。二．材料死亡实验过程中，很可能出现材料死亡，主要有以下几个方面：1.外植体灭菌过度：一旦材料太小或灭菌时间太长，剂量太大，就会导致材料死亡，所以要严格控制时间。2.污染：大量污染会造成材料死亡。3.培养基配置出现问题：在激素配置或营养成分配置出现问题时，材料易死亡，常常发生在无生长点的材料和愈伤组织中。4.培养环境的恶化：温度过高，透气不好，培养过于密集，久不转移，有害气体的累积都会造成培养材料的死亡。【措施】：【1】.选用较为温和的灭菌剂，降低药物浓度，减少灭菌时间，或选取较为坚强的外植体（eg：生长季节取芽）【2】注意个人卫生，严格按照规则进行操作。【3】认真配置各种母液及培养基，选用盐含量较低的培养基，也可以试着用1/2或1/4的培养基，并调整各激素的用量和配比。也可以适当添加抗生素，活性炭及必要的有机营养。【4】改善培养环境，及时转移和分瓶。【5】加强组培的过度管理。三．玻璃化是一种植物生理失调症，通常为植物体或叶片出现半透明或水渍状，这种现象称为玻璃化。其主要原因有6点如下：1.激素浓度：激素的影响包括生长素和细胞分裂素，一方面指细胞分裂素的浓度，一方面指生长素与细胞分裂素的比例，当细胞分裂素浓度过高或者生长素与细胞分裂素比例失调时，都会导致玻璃化，每种植物发生玻璃化时的激素浓度都不同，要提前查阅文献，找到合适浓度的激素。2.温度与湿度：温度主要影响植物的生长速率，温度升高时植株生长速度加快，但是温度过高时，会产生不良影响。温度忽高忽低易使得瓶内湿度增加，促进玻璃化的形成。为此，可以换用透气性比较好的牛皮纸封口。此外，若一个培养瓶中的培养材料越多，发生玻璃化的几率越大。3.光照：增加光照或延长光照时间可以减少玻璃化的几率。当温度较高，光照不足时，很容易玻璃化。4.培养基的成分：在培养基中，适当提高碳氮比例，可以减少玻璃化的比例。5.对策：减少培养基中的含氮量，增加光照，调节培养温度，降低细胞分裂素的用量，提高培养基硬度来防止玻璃化。四．褐化褐化是指培养过程中，由组培物质向培养基中释放褐色物质，导致培养基逐渐变为褐色，培养材料变褐死亡的现象。主要有以下几点因素。1.材料的种类：不同植物发生褐化的几率不同。2.材料的年龄和大小：外植体的老化程度越高，含有的木质素越多，也比较容易褐化。此外，材料较小时比较容易褐化，而相对较大的材料则不容易褐化。3.光照：摘取外植体前，对母株进行适当的遮光处理，可以有效防止褐化。在接种后对材料进行一定的暗处理也可以降低褐化发生几率，不过处理过度是材料会死亡。4.温度：低温可以抑制褐化作用。五．黄化黄化是指在组培过程中，植株整体失绿，或叶片斑驳黄化的现象。主要原因是Fe不足，矿物营养不均衡，通气不良，乙烯含量过高，激素配比不当，糖量不足，PH变化太大，培养温度不适，光照不足等。解决方法是：配置母液时注意一仪器刻度是否都准确；及时转接培养物；使用透气性较好的封口膜，适当调节PH，无机盐浓度和激素配比要事先算好，不要忘记加糖，培养时加入抗生素也会影响导致黄化，可以适当的减少抗生素的量。六．变异和畸形变异和畸形是指在培养过程中，由于激素，环境等的作用，使得组培苗的外部形态和内部生理发生变化，引起畸变，矮化，丛生，叶片变厚等的现象。畸变主要是由于激素种类和浓度导致的，温度过高也会导致变异。在环境变得恶劣时也会发生变异。对此，可以更具植物的种类与生长习性，降低细胞分裂素的浓度，调节生长素与细胞分裂素比例，改善环境等来减轻变异和畸变。七．组培苗瘦弱或徒长正常的组培苗应当叶色鲜绿，植株粗壮。如果在增值阶段出现芽苗瘦弱，徒长或节间过长，这种苗会长大，但就是比正常的瘦弱。有时即使是正常健壮的小苗，若生根阶段培养基或环境得不到保障的话，也会借鉴明显伸长，叶片变细，变薄，黄化等。这些苗过度培养时一死亡。原因：1.细胞分裂素浓度过高，产生过多不定芽，这些密集的芽若不及时进行转移与分割，很快会变成瘦弱苗。2.温度过高高温有利于苗的生长，温度过高，会造成节间生长过快。3.光照不足：组培苗会变黄，变细，变瘦，加速生长，使苗在短时间内变得更瘦弱。4.通气不良：通气不良是，会增加瓶内湿度，易导致苗的玻璃化和徒长。解决方法：1.根据植物特点减少分裂素的使用，加速继代培养的速度，适当减少接种的密度，适当降低温度，提高光照时间，调整培养基硬度，改用透气的封口膜。八．不生根或生根率低组培时经常会出现植物出根速率慢，效率低的现象，这些苗过度培养时，不容易适应外界条件。原因可能如下：1.激素种类和浓度：通常NAA用0~1.0mg/L时培养15天就可以升根，但是有些需要与IAA和IBA混合使用。生根率不会随着生长素的升高而一直生高。2.环境条件：主要是温度和光照，温度低时，生根周期会延长。对于一些热带花卉来说，低温会使小苗不生根，温带花卉在温度较低，光照较弱时生根良好。改善措施：1.对难生根的植物，实验前要先查好比较适宜的种植条件。2.掌握各个操作中的要领和质量要求，尽量不要损伤材料。用于生根的苗尽量不要带有愈伤组织。九．过度苗死亡率高原因如下：1.组培苗的质量差。2.环境条件不适宜：基质的湿度过大会引起根部的溃烂，温度过高过低都会使组培苗的生长不适。还有光照，在过度期间要适当的用阴影网遮去大部分光照，之后再逐渐加强光照。但是在过度培养的后期，要提高光照强度，否则会造成定植成活率低。3.过度苗管理不精细：当发现组培苗出现不良状况时要及时的找出对策，防止其进一步的死亡。解决方法：1.有针对性的调整配方，改善组培条件，努力培养质量优良的小苗。2.及时出瓶，要防止出现根部的损伤。3.改善过度培养的环境，自动温控，及时灌水。4.加强过度苗的肥水管理和病虫害防止。