实验酶的活性及专一性测定

实验七酶的活性及专一性测定一、实验目的通过本实验，了解酶的活性测定方法及其对底物催化的专一性。二、实验原理唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色，以此证明酶催化底物的专一性。三、器材及试剂1.器材：试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴锅，冰箱等。2.试剂：（1）0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）：称取可溶性淀粉0.5g，加5ml蒸馏水调成糊状，徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水中，不断搅拌，待其溶解后，加0.3gNaCl，加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制，防止细菌污染。（2）2%蔗糖溶液：称2g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。（3）班氏试剂：溶解结晶硫酸铜17.3g于100ml热的蒸馏水中，冷却后加水至150ml为A液。取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，加蒸馏水600ml,加热溶解，冷却后加水至850ml为B液。将A液缓慢倒入B液中，混合即可。（4）稀释唾液：用清水漱口，清除食物残渣。再含蒸馏水15ml作咀嚼运动，2分钟后将稀释唾液收集于样品杯中备用。（5）碘-碘化钾溶液：四、实验方法1.唾液淀粉酶的活性测定唾液的稀释：取10支试管，分别编上号1-6，取1ml唾液加入1号试管，加水稀释10倍后从中取出1ml加入2号试管，依次梯度稀释。试剂管号123456唾液(ml)111111蒸馏水(ml)999999各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，然后向6支试管内同时加入1ml的0.5％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37℃恒温水浴中，10分钟后取出，滴加2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数，计算酶的活性，用于后续实验。2.淀粉酶的专一性取3个试管，分别编号，按下表操作，记录实验现象。试管编号1#2#3#稀释的唾液淀粉酶/mL1110.5%淀粉溶液/mL32%蔗糖溶液/mL3蒸馏水/mL3摇匀，37℃保温15minBenedict试剂/mL222摇匀，沸水煮2分钟观察记录结果五、实验结果及分析六思考题每组中蒸馏水分别起什么作用？将酶煮沸10min，重复以上实验可能会有什么结果？