寄生虫实验检验技术

第1页实验检验技术一、病原检查1.粪便检查（1）直接涂片法：适用于蠕虫卵、原虫检查（活滋养体检查和包囊的碘液检查）。（2）浓集法1）加藤厚涂片法。2）沉淀法：自然沉淀法主要用于蠕虫的检查、离心沉淀法、倒置沉淀法适于比重较大的蠕虫卵检查、汞碘醛离心沉淀法适于原虫滋养体、包囊、蠕虫卵和幼虫的检查；醛醚沉淀法适于蠕虫卵和原虫包囊的检查。3）漂浮法：饱和盐水漂浮法适于各种线虫卵、带绦虫卵等检查；硫酸锌离心漂浮法适于原虫包囊、多数蠕虫卵等检查；蔗糖溶液漂浮法适于原虫包囊、卵囊或孢子囊检查。4）尼龙袋集卵法：主要适于血吸虫卵检查。（3）虫卵计数法1）改良加藤厚涂片法：适于各种蠕虫卵计数。2）小管浮聚计数法：适于大多线虫卵计数（4）毛蚴孵化法：适于血吸虫病原体检查。（5）钩蚴培养法：检出率较直接涂片法高7倍。（6）带绦虫孕节检查法：肉眼可观察。（7）常用原虫检查染色法：劳氏酸性品红-固绿染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫检查、福氏快速苏木精染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊检查、金胺-酚染色法和改良抗酸染色法适于隐孢子虫卵囊检查。2.肛门外检查（1）肛门周围蛲虫虫卵检查：有透明胶纸法、棉签拭子法，适于蛲虫、带绦虫检查。（2）肛门周围蛲虫成虫检查：在肛门附近发现白色小虫，可进一步鉴定。3.血液及骨髓检查（1）检查微丝蚴：①新鲜血片检查法；②厚血膜法；③活微丝蚴浓集法；④离心浓集法。（2）检查疟原虫：①新鲜血片检查法：采血、制片（薄血膜，厚血膜）、固定、染色；②定量血沉棕黄色层（QBC）检查法；③疟原虫计数法。4.其他排泄物与分泌物检查（1）痰液检查：适于肺吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体、蛔蚴等检查，方法有：直接涂片法、消化沉淀法。（2）尿液和鞘膜积液检查：适于检查班氏微丝蚴，可用离心法。（3）阴道分泌物检查：适于检查阴道毛滴虫等，可用直接涂片法、悬滴法、涂片染色法。（4）前列腺液检查：适于检查男性泌尿生殖道的阴道毛滴虫。（5）十二指肠液检查：十二指肠液检查引流液检查适于粪便检查寄生虫阴性时使用；肠检胶囊法适于蓝氏贾第鞭毛虫。（6）脑脊液检查：适于弓形虫、溶组织阿米巴大滋养体和肺吸虫卵等检查。（7）浆膜腔积液检查：适于检查弓形虫、微丝蚴等。5.活组织检查（1）皮肤及皮下结节活检：适于检查利什曼原虫、蠕虫、疥螨和蠕形螨；（2）肌肉活检：适于检查旋毛虫幼虫、猪囊虫、卫氏并殖吸虫成虫等其他蠕虫；第2页（3）淋巴结活检：适于检查利什曼原虫、弓形虫和丝虫成虫；（4）肠黏膜活检：适于检查日本血吸虫卵、溶组织内阿米巴。6.人工培养与动物接种当被检者疑为寄生虫病而直接病原体检查阴性时，可做人工培养与动物接种。二、免疫学检查寄生虫病的免疫诊断，主要是应用免疫学方法检查患者血液循环中或体液中针对寄生虫的抗体或由寄生虫本身分泌排泄的抗原，方法大多较为敏感，可以检出微量存在的抗体或抗原，因之，对临床上疑似的患者，可提供诊断依据，有重要的辅助诊断价值；在寄生虫病防治工作中，可进一步查清病人，监测疫情变化并评价防治工作效果。应用于寄生虫病诊断的免疫学检查方法，简单介绍如下：1.皮内试验（ID）（1）原理：寄生虫变应原刺激宿主后，机体产生亲细胞性的IgE抗体和IgG4抗体当同样抗原与抗体结合后，可引起肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放活性介质，使注射部位局部出现红肿。（2）应用：ID多用于蠕虫病的诊断及某些螨虫所致的变态反应的诊断。皮内试验可用作：①过筛方法，先作皮试，阳性者再作进一步检查；②临床辅助诊断；③考核预防效果，用作检查新感染的方法，特别对儿童。2.尾蚴膜反应（CHR）（1）原理：血吸虫尾蚴抗原与患者血清特异性抗体在体外共同孵育后，在尾蚴体表面形成折光性套膜。（2）应用：早期诊断血吸虫病，有较高的特异性和敏感性。3.环卵沉淀试验（COPT）环卵沉淀试验（COPT）是以血吸虫整卵为抗原的特异免疫血清学试验。COPT可作为诊断血吸虫病的血清学方法之一及临床治疗病人的依据；可用于考核治疗和防治效果；并可用于血清流行病学调查及监测疫情。4.间接血凝试验（IHA）间接血凝试验（IHA）是以红细胞作免疫配体的载体，并以红细胞凝集读数的血清学方法。5.免疫荧光技术免疫荧光技术（IFA）是用荧光素标记的抗体检测抗原或抗体的免疫学标记技术，常用于病原体感染的荧光抗体染色主要有直接法与间接法。6.酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（ELISA）简称酶联试验，已广泛用于多种寄生虫感染的宿主体液（血清，脑脊液等）以及排泄分泌物（尿，乳，粪便等）内特异抗体或抗原微粒的检测。三、单克隆抗体在寄生虫病诊断中的应用单克隆抗体的特异性高，但敏感性常不及多克隆抗体。目前，已有应用于疟原虫抗原、疟原虫循环抗原、血吸虫循环抗原、血吸虫虫卵抗原，以及丝虫病、囊虫病、弓形虫病等寄生虫病的诊断。四、DNA探针技术在寄生虫病诊断中的应用DNA探针技术（分子杂交技术）在寄生虫病诊断中的应用主要有两个方面：一是进行种、株鉴定等分类学研究；二是用于寄生虫病的诊断及流行病学研究。由于是直接检测寄生虫DNA片段，因而比免疫血清学方法可靠、稳定。